Молекулярно- генетический профиль дофаминовой нейромедиаторной системы при алкоголизме и героиновой наркомании

Скачать 1.22 Mb.

Название	Молекулярно- генетический профиль дофаминовой нейромедиаторной системы при алкоголизме и героиновой наркомании
страница	3/10
Тип	Автореферат

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Автореферат

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Таблица 2. Диапазоны значений клинических параметров развития

зависимости от алкоголя

Параметр/код/ ед.измерения	Описание	Значения и дипазоны		N	%
Возрастные параметры
Возраст знакомства (полных лет)	Возраст первого употребления алкоголя	Ранний	до15	119	21,72
		Средний	15-17	296	54,01
		Поздний	От 17	133	24,27
Возраст начала злоупотребления (полных лет)	Возраст начала систематического злоупотребления	Ранний	До 20	113	20,62
		Средний	20-30	341	62,23
		Поздний	От 30	94	17,50
Возраст ААС (полных лет)	Возраст становления сформированного ААС	Ранний	До 24	118	21,53
		Средний	24-36	306	55,84
		Поздний	От 36	124	22,63
Динамические параметры
Скорость злоупотребления (годы)	Период между знакомством с алкоголем и началом систематического злоупотребления алкоголем	Быстрая	До 4	100	18,25
		Средняя	4-13	326	59,49
		Медленная	От 13	122	22,26
Скорость ААС1 (годы)	Скорость формирования ААС: период между началом систематического злоупотребления и становлением сформированного ААС	Быстрая	До 2	101	18,43
		Промежуточая	2-7	338	61,68
		Медленная	От 7	109	19,89
Скорость ААС2 (годы)	Общая скорость формирования ААС: период между знакомством с алкоголем и становлением сформированного ААС	Короткая	До 8	128	23,36
		Средняя	8-19	301	54,93
		Затяжная	От 19	119	21,72
Качественные параметры
Ремиссия (мес)	Длительность терапевтической ремиссии (только для рецидивов, N=247)	Без ремиссий	До 2	47	19,03
		Ремиссии до года	2-12	169	68,42
		Ремиссии более года	От 12	31	12,55
Резистентность (баллы)	Нормированная резистентность к терапии *	Малая	До 3	179	32,66
		Средняя	3-7	226	41,24
		Высокая	От 7	143	26,09
Эйфория (категориальный параметр-вне метода квартилей)	Уровень первичной эйфории при знакомстве с алкоголем (N=484)	Выраженная эйфория		169	34,92
		Нейтральная реакция		243	50,21
		Выраженная негативная реакция		72	14,88

*Нормированная терапевтическая резистентность: (K1+0,5*К2)/(возраст больного), К1-количество госпитализаций, К2-количество амбулаторных обращений.
В когорте больных героиновой наркоманией мы использовали клинические параметры, подобные таковым для больных алкоголизмом. Был добавлен дополнительный возрастной параметр- возраст знакомства с алкоголем, и дополнительный динамический параметр- период поиска наркотика (период между знакомством с алкоголем и знакомством с наркотиком), позволяющий оценить условную «скорость» перехода от алкоголя, как социально одобренного ПАВ, к употреблению запрещенных наркотических средств. Характеристика клинических параметров развития зависимости от опиатов (героин) приведена в Таб.3, диапазоны их значений отражены в Таб.4.

Таблица 3. Характеристика распределения значений клинических параметров

по методу квартилей в общем массиве больных героиновой наркоманией (N=225)

Параметр	Min	Max	Среднее	SD	медиана	Мода	Квартили,
							25%	75%
Возраст знакомства с ПАВ (полных лет)	11	36	17,87	3,7	18,0	18,0	15	20
Возраст знакомства c алкоголем (полных лет)	8	20	14,49	1,92	15	16	13	16
Период поиска (лет)	-3	20	3,37	3,41	2	2	1	5
Возраст начала злоупотребления (полных лет)	14	36	19,63	3,57	19	20	17	21
Возраст АС	14	36	19,84	3,65	20	20	17	22
Длительность эпизодического употребления (мес)	0	72	6,82	9,34	3	1	1	6,5
Скорость злоупотребления (годы)	0	14	1,76	2,48	1	0	0	3
Скорость АС2 годы)	0	15	1,98	2,62	1	0	0	3
Резистентность (баллы)	2,5	61,36	11,78	9,57	8,7	5	5,56	14,79
Ремиссия (дни) выборка РЕЦИДИВ (n=143)	0	1825	214,13	304,9	120	180	45	210
Балл отягощенности	0	5	1,14	1,06	1	1	0	2

Таблица 4. Диапазоны значений клинических параметров развития зависимости от героина

Параметр/ ед.измерения	Описание	Значения и дипазоны		N	%
Возрастные параметры
Возраст знакомства с наркотиком (полных лет)	Возраст первой пробы наркотика	Ранний	до14	35	15,56
		Промежуточный	15-20	153	68,00
		Поздний	От 21	37	16,44
Возраст знакомства c алкоголем (полных лет)	Возраст первой пробы алкоголя	Ранний	До 12	29	12,89
		Промежуточный	13-16	169	75,11
		Поздний	От 17	27	12,00
Возраст начала злоупотребления (полных лет)	Возраст начала систематического злоупотребления наркотиком	Ранний	До 16	42	18,70
		Промежуточный	17-21	131	58,22
		Поздний	От 22	52	23,11
Возраст АС	Возраст появле-ния сформиро-ванного АС	Ранний	До 16	37	16,44
		Промежуточный	17-22	150	66,67
		Поздний	От 23	38	16,89
Динамические параметры
Период поиска (годы)	Период между первой пробой алкоголя и первой пробой наркотика	Короткий	1 или менее	76	33,78
		Средний	2-4	78	34,67
		Длинный	От 5	71	31,56
Длительность эпизодического употребления (мес)	Длительность эпизодического употребления наркотика	короткая	До 1	63	28,00
		Промежуточая	2-6	106	47,11
		Длительная	От 7	56	24,89
Скорость злоупотребления (годы)	Период между знакомством с наркотиком и началом систематического злоупотребления	Короткая	0	104	46,22
		Промежуточная	1-3	81	36,00
		Длительная	От 4	40	17,77
Скорость АС2 (годы)	Общая длитель-ность периода формирования АС с момента знаком-ства с наркотиком	Короткая	0	89	39,56
		Средняя	1-3	93	41,33
		Затяжная	от 4	43	19,11
Качественные параметры
Резистентность (баллы)	Нормированная терапевтическая резистентность *	Малая	До 5	45	20,00
		Средняя	5-15	126	56,00
		Высокая	От 15	54	24,00
Ремиссия (дни)	Средняя длитель-ность терапевти-ческой ремиссии (выборка РЕЦИДИВ (n=143)	Без ремиссий	До 44	35	24,48
		Короткие ремиссии	45-211	74	51,75
		Длительные ремиссии	От 211	34	23,78
Уровень первич-ной эйфории (категориальный параметр-вне метода квартилей)	Оценка уровня эйфории при первых приемах наркотика(n=218)	Выраженная эйфория		156	71,56
		Нейтральная реакция		15	6,8
		Выраженная негативная реакция		47	21,56

*Нормированная терапевтическая резистентность: (K1+0,5*К2)/возраст больного (К1-количество госпитализаций, К2-количество амбулаторных обращений)
Генотипирование. У всех участников исследования проводился забор венозной крови в объеме до 5 мл. Для изучения были выбраны 10 полиморфных локусов шести генов ДА системы (Таб.5). Выбор генов определялся в рамках концепции молекулярно-генетического профиля зависимости от ПАВ, выбор локусов полиморфизма проводили на основе литературных данных, отбирая локусы, по которым получено максимально большое количество валидных данных о связи с болезнями зависимости от ПАВ.

Образцы ДНК пациентов, полученных из венозной крови путем фенол-хлороформной экстракции, генотипировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим рестрикционным анализом с использованием эндонуклеаз рестрикции (СИБЭНЗИМ, Россия). Рестрикцию проводили согласно рекомендациям производителя. Для амплификации использовали амплификатор "Терцик 2" (ДНК-технология, Россия). Результаты анализировали методом гель-электрофореза в 1.5-2% агарозном либо 8% полиакриламидном геле, с последующей визуализацией на трансиллюминаторе. Для гена ТН проводили анализ в денатурирующем 6% полиакриламидном геле и дополнительную окраску серебром. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили в стандартных условиях: общий объем – 25-50 мкл, MgCl2 = 1,5 mM, dNTP=2,5mM, праймеры=250-500 μmol, Taq-полимераза = 0.5 ед.а, 94oC-3’; (94oC 30’’- 60oC30’’- 72oC 1’ – 30-35 циклов); 72oC 3’

Перечень изученных локусов полиморфизма, их международные наименования и идентификаторы (ID) в базах данных Национального Центра Биотехнологической информации США (National Center for Biotechnology Information, NCBI) и системы оценки результатов приведены в Таб.5. Дизайн олигонуклеотидных праймеров был разработан нами самостоятельно (Таб.6), синтез праймеров проводился ООО «Литех» и ООО «ДНК-синтез» (Россия).

Таблица 5. Характеристика изученных полиморфных локусов

Ген, хромо- сомный локус	Локализация, тип полиморфизма, NCBI ID, обозначение в тексте	ЭР *	Полиморфные аллели
Дофаминовый рецептор типа 2
DRD2 11q23	SNP в 3‘-области гена* (С32806Т). ANKK1 exon 8 Lys713Glu. rs1800497 C/T. В тексте: Taq	Taq I	A1-нет сайта узнавания, А2- есть сайт узнавания
DRD2 11q23	SNP в экзоне 7 гена H(cat)313H(cac); cat->cac, ,exon 7 (rs 6275 C/T His313His). В тексте: NcO	Nco I	N1- нет сайта узнавания; N2- есть сайт узнавания
Дофаминовый рецептор типа 4
DRD4 11р15.5	VNTR: 48 н.п повторы в экзоне 3 гена (exon 3 48 bp VNTR). В тексте: V48	-	Согласно количеству повторов: 2-11
DRD4 11р15.5	VNTR: 120 н.п. повторы в 5’-области гена (5' 120 bp duplication; rs4646984). В тексте: V120	-	S (короткий)-1 повтор, L (длинный)-2 повтора (дупликация)
Переносчик (транспортер)дофамина
SLC6A3 (DAT1) 5р15.3	VNTR: 40 н.п. повторы в 3’ - области гена. В тексте: V40	-	А7-А11,по числу повторов: 210-570 н.п.
SLC6A3 (DAT1) 5р15.3	SNP в 3’ - область гена : Замена С/Т (rs 2702). В тексте: Msp	Мsp I	С (138 п.н. и 76 п.н.) Т (214 п.н.)
Дофамин-бета-гидроксилаза
DBH 9q34	SNP в экзоне 2 гена, 444 A->G (rs 17851478). В тексте: 444	BstEN I	A,G
DBH 9q34	SNP в 5’-области гена, -1021С->Т (rs 1611115). В тексте : -1021	Fau I	С,Т
Катехол-орто-метилтрансфераза
COMT 22q11.2	SNP в экзоне 3 гена,(gtg->atg)(rs 4680). В тексте V158M.	Fat I	L (метионин),есть сайт узнавания , H (Валин) - нет сайта узнавания
Тирозингидроксилаза
ТН 11р15.5	VNTR: 4 п.н.повторы в интроне 1 гена ТН (intron 1 (TCAT)n tetranucleotide repeat HUMTH01-VNTR	-	Согласно количеству повторов: А6-А11

*-ЭР-эндонуклеаза рестрикции
Таблица 6. Последовательности олигонуклеотидных праймеров для

генотипирования полиморфных локусов

Ген,	Полиморфный локус	Последовательность праймеров
DRD2	Taq IA	5’- CCA CGG CTG GCC AAG TTG TC-3’, 5’- CAC CTT CCT GAG TGT CAT CAA C-3’
DRD2	NcO	5’- CAG TGA GAT GGG TGG CTG ATG-3’, 5’-GCA GCC ATG GTT AGG AAG GAC-3’.
DRD4	V48	5’- CTG CAG CGC TGG GAG GTG GC-3’, 5’- CAG GAC CCT CAT GGC CTT GCG-3’
DRD4	V120	5’-gAA CTC TAA gCC gAC Cag Ag-3’, 5’-gTg AgC CTC Aca ggA CAA g -3
DAT1	V40	5’-CTT GTG GTG TAQ GGA ACG GCC-3’, 5’- GAT GTG GCA CGC ACC TGA GAG-3’
DAT1	Msp	5’-CGC CGT GTC TTG TGT TGC TG-3’, 5’- GGA TTC TCA GCA GGT GCG TC-3’.
DBH	444	5’- GAG CCC AGT GCT TGT CTC TG-3’, 5’- CAT GAT ACA CGC AGC CCA CG-3’.
DBH	-1021	5’- GTG GAG CTG GAG GGA TCA AG-3’, 5’- CTG GCC TGA ATT TGA AGC CTC-3’.
COMT	V158M	5’- GCT ACT CAG CTG TGC GCA TG-3’, 5’- CTG ACA ACG GGT CAG GCA TG-3’
ТН	HUMTH01-VNTR	5'- ATT CAA AGG GTA TCT GGG CTC TGG-3',5'- GTG GGC TGA AAA GCT CCC GAT TAT-3'.

Статистическая обработка. Статистическая обработка данных производилась с использованием статистического пакета SPSS for Windows.

Частоты аллелей, генотипов и гаплотипов. В качестве анализируемых показателей использовали частоты встречаемости аллелей, генотипов и гаплотипов по полиморфным локусам изученных генов в контрольной группе и группах пациентов. Для выявления различий частот аллелей использовалась статистика 2 с доверительным интервалом 5% для таблицы 2х2. При анализе частот генотипов и гаплотипов применяли метод иерархической агломеративной кластеризации частот, позволяющий выделить в итоге 2 группы генотипов с максимально сходными частотами (кластеры генотипов) для последующего анализа с помощью статистика 2 для таблицы 2х2. Для коррекции множественных сравнений, возникающих в процессе кластеризации, использовали инвертированный вид поправки Бонферрони путем умножения значений р, полученных при сравнении двух итоговых кластеров на n(число сравнений). Полученные значения вероятности далее обозначались как Р и различия признавались достоверными при Р< 0,05. Относительный риск (отношение шансов, OR, odds ratio) при сравнении групп оценивали как вероятность попадания носителя того или иного аллеля/генотипа в одну из групп сравнения с 95% доверительным интервалом (CI 95%).

Клинические параметры. Для сравнения долей представленности (частот встречаемости) каждого из диапазонов значений клинического параметра среди больных с разной степенью отягощенности использовали статистику 2 с доверительным интервалом 5%. Относительный риск (OR) при сравнении групп больных и контроля оценивали как вероятность попадания пациента с определенном диапазоном значений клинического параметра в одну из групп сравнения с 95% доверительным интервалом (CI 95%). Анализ значений показателя "итоговый балл отягощенности" проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа (непараметрический критерий Краскела-Уоллеса).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Похожие:

	Выбор метода молекулярно-биологического типирования генов системы...		Сравнительный эколого-генетический анализ микроспоридий и их хозяина... Сравнительный эколого-генетический анализ микроспоридий и их хозяина – байкальской амфиподы gmelinoides fasciatus
	Руководство пользователя программа «Профиль» Программа «Профиль» предназначена для автоматического вычерчивания продольных профилей наружных подземных инженерных сетей		Дипломной практики «Методы и средства проектирования прикладных интеллектуальных систем» Фгос во с учетом рекомендаций и Прооп во по направлению 02. 04. 02 «Фундаментальная информатика и информационные технологии»....
	Инструкция по использованию индивидуального цветового профиля при... Перед запуском Photoshop необходимо установить цветовой профиль на компьютер. Для этого необходимо лишь дважды кликнуть по выбранному...		Исследование системы межбанковских расчетов ОАО «Лето-Банк» Профиль: Программное обеспечение средств вычислительной техники и автоматизированных систем
	Молекулярно-генетическое исследование гена лейцинбогатой киназы 2... Молекулярно-генетическое исследование гена лейцинбогатой киназы 2 (lrrk2) у лиц с болезнью паркинсона		Вход в «Профиль дилера» Вход раздел «Профиль дилера» осуществляется через высланную Вам ссылку по электронной почте
	Документация об открытом аукционе в электронной форме на поставку... Федеральное государственное бюджетное учреждение «Селекционно – генетический центр «Смена»		Решение зс амр от 25. 03. 2010г. №159 «Об утверждении целевой комплексной... Использование бюджетных средств, выделенных из бюджета Александровского муниципального района на реализацию цкп «Профилактика наркомании,...
	Учебно-методический комплекс дисциплины: «Международные стандарты... Профиль подготовки: «Международная практика и системы регулирования бухгалтерского (финансового) учета и аудита»		Цкп «Генетический полиморфизм» обн ран Разработка тест-систем для определения пола и идентификации особей амурских тигров по любому биологическому материалу методом пцр...
	Методические указания му 2634-10 Ая и молекулярно-генетическая оценкА воздействия наноматериалов на представителей микробиоценоза		Ип торговцев В. А коммерческое предложение по обслуживанию систем видеонаблюдения При необходимости, специалист вносит предложения по модернизации системы. В этом случае, при Вашем согласии, будет проведен детальный...
	Сведения об учебно-методической и иной документации, разработанной...		Техническое задание Разработка компонент молекулярно диагностических... Разработка компонент молекулярно диагностических систем для выявления клинически значимых маркеров генетических, онкологических и...

Руководство, инструкция по применению