Лекарственно-индуцированные поражения печени у больных туберкулезом легких: оптимизация лечения и профилактики
|
Скачать 2.09 Mb.
|
3.3.2. Контрольная группаКонтрольную группу на третьем этапе исследования также составили 20 пациентов гастроэнтерологического отделения МУЗ «Городская клиническая больница скорой медицинской помощи №25» г. Волгограда с синдромом раздраженной кишки. Среди них 8 (40,0%) женщины и 12 (60,0%) мужчин в возрасте от 18 до 59 лет, средний возраст которых составил 37,1916,46 лет (M). Обследованные соматически были практически здоровы, не включались в исследование пациенты с заболеваниями почек и печени, сахарным диабетом, злокачественными новообразованиями, инфекционными заболеваниями и алкоголизмом. Таким образом, под наблюдением находились достаточно большие группы больных туберкулезом легких, представленные пациентами с различными вариантами течения заболевания. Больные обследованы в сравнении с контрольными и группами сравнения, что было необходимо для решения задач и достижения целей, поставленных в настоящем исследовании. Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 4.1. Определение концентрации цитокинов ФНО-α и ИЛ-4, ИЛ-10 в сыворотках кровиНаряду с общепринятым обследованием, всем участникам исследования дополнительно проводили определение «базального» уровня ФНО-α и ИЛ-4, ИЛ-10 в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. Для исследования образцы крови забирались у пациентов утром натощак, до первого приема лекарственных препаратов. В дальнейшем путем центрифугирования получали сыворотку, которую и использовали для постановки анализов. Сыворотку допускалось хранить в замороженном виде при температуре -40°С не дольше 6 месяцев, повторное использование однажды размороженной сыворотки не допускалось. 4.1.1. Методика определения концентрации ФНО-αКонцентрация ФНО-α в сыворотке крови определялась с использованием набора реагентов для количественного определения ФНО-α в биологических жидкостях и культуральных средах человека производства ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, РФ. В принципе метода лежит «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа, в котором используются два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ФНО-α. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе, второе коньюгировано с биотином. На первой стадии ФНО-α из калибровочных и исследуемых проб связывается с антителами, иммобилизированными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии иммобилизированный ФНО-α взаимодействует с антителами, меченными биотином. Количество связавшегося коньюгата прямо пропорционально количеству ФНО-α в исследуемом образце. Чувствительность метода - 2 пг/мл. Диапазон измерения 0-250 пг/мл. Перед постановкой проб набор реагентов и образцы сывороток размораживались и нагревались до 18-25°С окружающим воздухом в течение 30 минут. В лунки вносили по 100 мкл предварительно разведенные буферным раствором в соотношении 1:1 контрольные образцы и исследуемые сыворотки, которые инкубировались в течение 120 минут при комнатной температуре в автоматическом шейкер-инкубаторе (Elmi, Латвия) при 700 RPM. После инкубации стрипы 5-кратно промывались с помощью автоматического промывающего устройства BioRad 300 мкл моющего раствора фосфатно-солевого буфера с добавлением твина 1:25, как рекомендовано производителем набора реагентов. Далее в лунки вносился раствор конъюгата №1 – 100 мкл биотинилированных антител к ФНО-α. Инкубация планшетов проводилась под пленкой в течение 60 минут при комнатной температуре в шейкере при 700 RPM. Промывка осуществлялась пятикратно 300 мкл моющего раствора фосфатно-солевого буфера с добавлением твина. На следующем этапе в каждую лунку вносилось по 100 мкл раствора конъюгата №2 – стрептавидин-пероксидазы хрена. Инкубация осуществлялась в шейкере при 700 RPM при комнатной температуре в течение 30 минут. Промывка проводилась пятикратно 300 мкл моющего раствора фосфатно-солевого буфера с добавлением Твина. Затем в каждую лунку вносилось по 100 мкл раствора тетраметилбензоата, с добавлением субстратного буферного раствора в концентрации, указанной производителем. Планшеты инкубировались в защищенном отсвета месте при комнатной температуре в течение 30 минут. Остановка реакции производилась добавлением 100 мкл раствора стоп-реагента и измерялась оптическая плотность растворов в лунках с помощью спектрофотометра «Униплан» вертикальным лучом с длиной волны 450 нм в течение 15 минут после остановки реакции относительно воздуха. Построение калибровочной кривой осуществлялось по значениям оптической плотности раствора в контрольных лунках (ось ординат). В качестве контролей использовались растворы с заданной концентрацией ФНО-α: 0 пг/мл, 5 пг/мл, 12,5 пг/мл, 25 пг/мл, 62,5 пг/мл, 125 пг/мл и 250 пг/мл (ось абсцисс). Используя калибровочную кривую, в дальнейшем по значениям оптической плотности определяли концентрацию ФНО-α в исследуемых образцах сыворотки крови. |
Похожие:
 |
Современные подходы к химиотерапии больных туберкулезом легких и... Современные подходы к химиотерапии больных туберкулезом легких и возможности повышения эффективности лечения (клинико-экспериментальное... |
|
Инструкция по химиотерапии больных туберкулезом проект изменений... Проект изменений «Инструкции по химиотерапии больных туберкулезом» приложения №6 к Приказу мз РФ №109 от 21 марта 2003 года «О совершенствовании... |
|
Международный Совет Медсестер Руководящие принципы тб контроля для... ... |
|
Оптимизация диагностики и лечения больных хроническим гнойным средним отитом Современное состояние вопроса диагностики и лечения больных хроническим гнойным средним отитом (обзор литературы) |
|
Оптимизация режимов лечения больных с бластным кризом хронического... Оптимизация режимов лечения больных с бластным кризом хронического миелолейкоза с учетом лекарственной чувствительности бластных... |
|
Закон калужской области n 84-оз от 27. 06. 2005 "О порядке обеспечения... Приказ минэкономразвития Калужской обл. N 522-п от 16. 06. 2005 "Об утверждении методических рекомендаций по организации закупок... |
|
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации Цель дисциплины приобретение студентами теоретических знаний и практических навыков для раннего распознавания, лечения и профилактики... |
|
Инструкция по заполнению учетной формы n 01-тб/У "медицинская карта... ТБ/у заполняется при постановке диагноза "Туберкулез". На случай повторного лечения (рецидив; лечение после неэффективного курса... |
 |
Паспорт и инструкция по эксплуатации содержание Кровать функциональная механическая Armed rs104-Dпредназначена для использования как в лечебных учреждениях для ухода, диагностики... |
|
Паспорт и инструкция по эксплуатации введение Кровать функциональная электрическая Armed rs101-b-a предназначена для использования как в лечебных учреждениях- для ухода, диагностики... |
|
Паспорт и инструкция по эксплуатации Кровать функциональная механическая Armed rs112-a с принадлежностями предназначена для использования как в лечебных учреждениях для... |
|
Паспорт и инструкция по эксплуатации Кровать функциональная электрическая Armed с принадлежностями fs3220W предназначена для использования как в лечебных учреждениях... |
|
Паспорт и инструкция по эксплуатации содержание Кровать функциональная электрическая ArmedRS305 с принадлежностями предназначена для использования как в лечебных учреждениях для... |
|
Российской федерации утверждаю Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2010 г. №1235 «О финансовом обеспечении за счет средств федерального бюджета мероприятий,... |
|
Российской федерации утверждаю Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2010 г. №1235 «О финансовом обеспечении за счет средств федерального бюджета мероприятий,... |
|
Оптимизация хирургического лечения больных миомой матки. Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Национальный медико-хирургический Центр имени Н. И. Пирогова»... |