Методические указания мук 2661-10
|
Скачать 0.78 Mb.
|
|
Если поместить яйца тениид в 1% раствор натрия сульфида или 20% раствор натрия гипохлорида, или же в 1% раствор хлорной воды при 36-38 град. С, зрелые и живые зародыши освобождаются от оболочек и не изменяются в течение 1 суток. Незрелые и мертвые онкосферы сморщиваются или набухают и резко увеличиваются, а затем "растворяются" в течение 10 мин. - 2 ч. Живые зародыши тениид также активно двигаются в смеси 1% раствора натрия хлорида, 0,5% раствора натрия гидрокарбоната и желчи при 36-38 град. С. Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня наиболее проста методика Иониной Н.С.: у живых яиц медианная пара эмбриональных крючьев или параллельна латеральным, или последние образуют с медианной угол у основания меньше 45 град. У мертвых яиц латеральные пары образуют у основания угол с медианной парой больше 45 град. или же крючья беспорядочно разбросаны (утрачивается их парное расположение); иногда наблюдается сморщивание зародыша, образование зернистости. Более точен метод, основанный на появлении движений онкосферы при резкой смене температур: от 5-10 град. до 38-40 град. С. Определение жизнеспособности незрелых яиц нематод следует изучать во влажной камере (чашках Петри), помещая яйца аскарид в 3% раствор формалина, приготовленный на изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 24-30 град. С, яйца власоглавов в 3% растворе соляной кислоты при температуре 30-35 град. С; яйца остриц в изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 37 град. С. Чашки Петри следует открывать 1-2 раза в неделю для лучшей аэрации и снова увлажнять фильтровальную бумагу чистой водой. Наблюдения за развитием яиц гельминтов ведут не реже 2 раз в неделю. Отсутствие признаков развития в течение 2-3 месяцев свидетельствует о их нежизнеспособности. Признаками развития яиц гельминтов являются сначала стадии дробления, деление содержимого яйца на отдельные бластомеры. В течение первых дней развивается до 16 бластомеров, которые переходят во вторую стадию - морулу и т.д. Яйца анкилостомид культивируют в стеклянном цилиндре (высотой 50 см и диаметром 7 см), закрытом пробкой. Смесь из равных объемов стерильного песка, древесного угля и испражнений с яйцами анкилостомид, разведенную водой до полужидкой консистенции, наливают осторожно на дно цилиндра при помощи стеклянной трубки. В течение 1-2-суточного отстаивания в темноте при температуре 25-30 град. С из яиц вылупляются рабдитовидные личинки, а через 5-7 суток они становятся уже филяриевидными: личинки выползают вверх по стенкам цилиндра, где видны даже невооруженным глазом. Яйца трематодного типа, естественно развивающиеся в воде, например, описторхов, лентецов, фасциол и других, помещают на часовое стекло, чашку Петри или в другой сосуд, наливают небольшой слой обычной воды. При культивировании яиц фасциол следует учесть, что они развиваются быстрее в темноте, при этом в живых яйцах при температуре 22-24 град. С через 9-12 суток формируется мирацидий. При микроскопировании развивающихся яиц трематод хорошо заметны движения мирацидия. Мирацидий фасциолы и корацидий лентецов из оболочек яйца выходят только на свету. Жизнеспособность адолескариев фасциол, собранных на растениях и других объектах водоемов, проверяют исследованием их на предметном стекле в физиологическом растворе под микроскопом с нагревательным столиком. При подогревании личинки трематоды, находящиеся в цисте, начинают двигаться. 15.2. Определение жизнеспособности личинок анкилостомиди и стронгилид. Метод Фюллеборна Личинки анкилостомид и стронгилид культивируют на агаре в чашке Петри с животным углем. После выдерживания в термостате при температуре 25-30 град. С в течение 5-6 часов личинки расползаются по агару, оставляя за собой дорожку из бактерий. 15.3. Определение жизнеспособности личинок анкилостомид и стронгилид. Метод Харада и Мори В пробирки, помещенные в штатив, добавляют 7 мл дистиллированной воды. Деревянной палочкой берут 0,5 г испражнений и делают мазок на фильтровальной бумаге (15x150 мм) в 5 см от левого края (эту операцию проводят на листе бумаги, чтобы защитить поверхность лабораторного стола). Затем полоску с мазком вставляют в пробирку так, чтобы свободный от мазка левый конец достигал дна пробирки. Накрывают верхний конец куском целлофана и плотно обхватывают резинкой. На пробирке пишут номер, фамилию обследуемого. В таком состоянии пробирки хранят 8-10 суток при температуре 28 град. С. Для изучения личинок снимают и удаляют целлофановую крышку и извлекают пинцетом полоску фильтровальной бумаги. При этом следует проявлять осторожность, так как небольшое количество инвазионных личинок может передвигаться к верхнему концу фильтровальной бумаги или к стенке пробирки и проникать под поверхность целлофана. Пробирки помещают в горячую водяную баню при температуре 50 град. С на 15 мин., после чего содержимое их встряхивают и быстро переливают в пробирку емкостью 15 мл для осаждения личинок. После центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении. Для дифференциального диагноза филяриевидных личинок необходимо пользоваться данными табл. 5. Таблица 5 Дифференциальная диагностика филяриевидных личинок А. duodenale, N. americanus, S. stercorals, Trichostrongylus sp.
15.4. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов методом окрашивания Мертвые ткани в большинстве случаев воспринимают краски быстрее, чем живые. Эти особенности используют в гельминтологии для определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов. Однако в отдельных случаях некоторые краски лучше воспринимаются живыми тканями, чем мертвыми. Для дифференциального определения живых и мертвых яиц и личинок применяют следующие краски и способы. Для окраски живых и мертвых тканей часто используют лейкобазу метиленового синего. Живая клетка или ткань редуцирует метиленовый синий в бесцветную лейкобазу, мертвая ткань не обладает такой способностью, поэтому приобретает окраску. Критерием состояния яйца является окрашивание зародыша, но не оболочки. Такая его способность связана с условиями гибели яйца. В тех случаях, когда волокнистая оболочка в мертвом яйце не теряет свойств полупроницаемости, она не будет пропускать красители, следовательно, мертвый зародыш не будет окрашиваться. Окрашенный зародыш всегда свидетельствует о гибели яйца. Для окраски яиц аскарид можно использовать метиленовый синий в растворе молочной кислоты с едкой щелочью (метиленового синего 0,05 г, едкого натра 0,5 г, молочной кислоты 15 мл). Живые яйца окраску не воспринимают; окрашиваются в синий цвет зародыши мертвых яиц. Окрашивание личинок аскарид основным раствором краски бриллианткрезилового синего в концентрации 1:10000 осуществляют следующим образом: на предметное стекло наносят каплю жидкости с яйцами аскарид и каплю основного раствора краски. Препарат накрывают покровным стеклом, которое плотно прижимают к предметному стеклу при легком постукивании препаровальной иглой. Под микроскопом наблюдают количество вышедших личинок и степень их окрашиваемости; после чего этот же препарат просматривают повторно через 2-3 ч. Живыми считаются только недеформированные личинки, не окрасившиеся в течение 2 ч. Мертвые личинки или не выходят из яиц или окрашиваются при разрыве скорлупы (частично или полностью). При определении жизнеспособности яиц аскаридат птиц возможна окраска препаратов 5%-м спиртовым раствором йода. При его нанесении на препарат зародыши мертвых яиц аскаридат в течение 1-3 с. окрашиваются в оранжевый цвет. Мертвые яйца описторхов и онкосферы бычьего цепня окрашиваются раствором толуидинового синего (1:1000), а мертвые онкосферы бычьего цепня - раствором бриллианткрезилового синего (1:10000). При этом приобретают цвет зародыши и оболочки как мертвых, так и живых яиц. Поэтому после окраски яйца и онкосферы отмывают в чистой воде и дополнительно окрашивают их сафранином (в разведении 1:10000 спирта). Спирт удаляет краску с оболочек, а сафранин окрашивает в красный цвет. В результате живые яйца окрашиваются в красный цвет; яйца с мертвыми зародышами - в синий, а оболочка остается красной. Мертвые зародыши онкосфер бычьего цепня быстро, в течение нескольких минут, окрашиваются в ярко-красный или розовый цвет сафранином или в синий цвет бриллианткрезиловым синим в разведении 1:4000, или индигокармином в разведении 1:1000-1:2000. Живые зародыши не изменяются под влиянием этих красок даже спустя 2-7 ч. Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня рекомендуется использовать следующие краски: 1. Бриллианткрезиловый синий (1:8000) - через 1 ч. у мертвых яиц особенно ярко окрашивается онкосфера, которая резко выделяется на бледном или бесцветном фоне остальной части яйца. 2. Сафранин (1:8000 при воздействии в течение 2 ч. и 1:5000 - в течение 3-5 ч.). 3. 50% раствор пирогалловой кислоты в разведении 1:2 при воздействии в течение 1 ч. при температуре 29-30 град. С (чем ниже температура, тем продолжительнее процесс окрашивания). 15.5. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов люминесцентным методом Люминесцентная микроскопия дает возможность дифференцировать живые и мертвые объекты без повреждения яйца. Для флюоресценции используются не ультрафиолетовые лучи, а сине-фиолетовая часть видимого света, с обычным микроскопом и предметными стеклами; к осветителю микроскопа добавляют специальный набор цветных фильтров. Живые и мертвые яйца аскарид, остриц, карликового цепня, бычьего цепня, лентецов и других гельминтов люминесцируют неодинаково. Это явление наблюдается как при первичной люминесценции без применения красителей, так и при окраске флюорохромами (акридиновый оранжевый, корифосфин, примулин, аурамин, сульфат берлерина, трипафлавин, риванол, акрихин и др.). Неокрашенные, живые несегментированные яйца аскарид светятся ярко-зеленым светом с желтоватым оттенком; у мертвых яиц оболочка излучает зеленый свет значительно ярче, чем темно-зеленая зародышевая часть; у яиц аскарид с личинкой проявляется только оболочка, а у мертвых - и оболочка, и личинка ярко-желтого цвета. Непигментированные и несегментированные живые яйца остриц и карликовых цепней излучают зеленовато-желтый свет, у мертвых яиц интенсивно люминесцирует оболочка на фоне темно-зеленой зародышевой массы. При вторичной люминесценции (при окраске акридиновым оранжевым в разведении 1:10000 и 1:50000 от 30 мин. до 2 ч.) оболочка живых и мертвых нематод, трематод и цестод люминесцирует неодинаково. Скорлупа живых и мертвых яиц аскарид, токсокар, остриц, карликового, крысиного, бычьего цепней, лентецов окрашивается в оранжево-красный цвет. Зародыши живых яиц аскарид, токсаскарид, крысиного цепня, широкого лентеца и онкосферы бычьего цепня люминесцируют тусклым темно-зеленым или серо-зеленым цветом. Мертвые зародыши яиц этих гельминтов излучают "горящий" оранжево-красный цвет. Живые личинки остриц и токсокар (освобожденные от скорлупы яйца) излучают тусклый серо-зеленый свет, при их гибели цвет изменяется от головного конца в "горящий" светло-зеленый, затем желтый, оранжевый и, наконец, в ярко-оранжевый. При окраске флюорохромами - корифосфилом, примулином у мертвых яиц аскарид и власоглавов наблюдается свечение от лилово-желтого до медно-красного цвета. Жизнеспособные яйца не люминесцируют, а окрашиваются в темно-зеленый цвет. Живые яйца трематод (парагонимов и клонорхов) не люминесцируют после окраски акридиновым оранжевым, а от мертвых яиц исходит желтовато-зеленый цвет. Метод люминесценции может быть применен и для определения жизнеспособности личинок гельминтов. Так, обработанные раствором акридинового оранжевого (1:2000) личинки стронгилят, рабдитат светятся: живые - зеленым (с оттенком), мертвые - ярко-оранжевым светом. Живые мирацидии, вышедшие из оболочки, излучают тусклый голубоватый свет с еле заметным светло-желтым венчиком ресничек, но спустя 10-15 мин. после гибели проявляются ярким "горящим" светло-зеленым, а затем - оранжево-красным светом. 15.6. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов методом биологической пробы Биологическая проба - определение жизнеспособности инвазионных яиц гельминтов посредством их скармливания лабораторным животным. Это наиболее точный метод. Личинками гельминта заражают соответствующего промежуточного или окончательного хозяина, можно использовать также лабораторных животных, которым скармливают зрелые яйца или личинки паразитов. Например, для определения жизнеспособности яиц аскаридат (аскариды свиные, человека, токсокары, токсаскарисы и др.) на одно животное (морские свинки, мыши) необходимо не менее 100-300 яиц с развившейся личинкой. Яйца аскаридат в изотоническом растворе натрия хлорида вводят пипеткой через рот мыши или морской свинке. Через 6-7 суток животное забивают, вскрывают и исследуют его печень и легкие в отдельности на наличие личинок аскаридат. Для этого печень и легкие измельчают ножницами на мелкие кусочки и исследуют их по методу Бермана или Супряги. Если животных заражали живыми инвазионными яйцами, то при вскрытии в печени и легких обнаруживают мигрирующие личинки аскаридат. Для определения жизнеспособности адолескариев фасциол, собранных на растениях в биотопах малого прудовика - промежуточного хозяина паразита, используют мышей, морских свинок или кроликов, которым скармливают эти личинки или вводят их пипеткой через рот. В случае заражения яйца фасциол в фекалиях лабораторных животных можно обнаружить у кроликов через 2 месяца, у морских свинок - через 50 суток, у мышей - через 35-40 суток. Для более быстрого получения ответа лабораторных животных вскрывают через 20-30 суток и исследуют печень на наличие молодых фасциол. Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня также рекомендуется их скармливание незараженным ими ранее белым мышам с последующим вскрытием животных через 92-96 ч. и выявлением цистицеркоидов в кишечных ворсинках или цестод в просвете кишечника. 15.7. Определение жизнеспособности яиц описторхов. Метод Германа и Беэра (1984) Метод основан на физико-химической активации железы вылупления мирацидия и стимуляции двигательной активности личинки, что приводит к открыванию крышечки яйца и активному выходу мирацидия. |
Похожие:
 |
Методические указания мук 2661-10 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
|
Методические указания мук 3007-12 Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический... |
|
Методические указания мук 2429 08 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
 |
Методические указания мук 2429 08 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
|
Методические указания методические указания разработаны: Федеральной... Му 3011-12. Дезинфектология. "Неспецифическая профилактика клещевого вирусного энцефалита и иксодовых клещевых боррелиозов". Методические... |
|
Методические указания по курсовому проектированию по дисциплине «Проектирование... Электронный ресурс]: методические указания / О. Ф. Абрамова// Сборник «Методические указания» Выпуск. Электрон текстовые дан.(1файл:... |
|
Методические указания му 1891-04 Организация работы прививочного... Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и лечебно-профилактических... |
|
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Методические указания предназначены для студентов факультета заочного социально-экономического образования специальности 040101.... |
|
Методические указания doc Методические указания по выполнению лабораторно... Данные методические указания для студентов являются частью учебно-методического комплекта по пм 01. «Техническое обслуживание и ремонт... |
|
Методические указания му 2… Лабораторная диагностика, лечение и профилактика особо опасных микозов. Методические указания. 2009. 66 с |
|
Методические указания для обучающихся Методические указания рассмотрены и утверждены на заседании кафедры от 23. 03. 2015 протокол №11 |
|
Методические указания по изучению учебной дисциплины Методические указания предназначены для преподавателей русского языка и литературы профессиональных образовательных организаций |
|
Методические указания по выполнению практических работ адресованы... Методические указания для выполнения практических работ являются частью основной профессиональной образовательной программы огбоу... |
|
Методические указания по проведению практических занятий Методические указания рассмотрены и одобрены на заседании пцк по укрупненной группе 140000 Электроснабжение (нпо и спо) |
|
Методические указания к лабораторной работе Барнаул 2008 ... |
|
Методические указания му 1252-03 Методические указания предназначены для специалистов санитарно-эпидемиологической службы и лечебно-профилактических организаций,... |