Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
23 июля 2010 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.2661-10
1. Подготовлены авторским коллективом в составе: д.м.н. [Н.А.Романенко], д.м.н. В.П.Сергиев, к.м.н. А.И.Чернышенко, к.м.н. Г.И.Новосильцев, к.б.н. О.П.Зеля, Г.Р.Байрамгулова (ИМПиТМ им. Е.И.Марциновского ММА им. И.М.Сеченова); д.м.н. В.Д.Завойкин, к.б.н. Т.В.Старкова (кафедра паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И.М.Сеченова); к.м.н. Т.М.Гузеева (Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.); к.м.н. Т.Г.Сыскова, к.б.н. Т.А.Семенова, (ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора); д.б.н. С.А.Беэр (Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции имени А.Н.Северцова РАН); д.м.н. Ю.И.Вассерин, к.м.н. Е.П.Хроменкова, к.м.н. Л.Л.Димидова, д.м.н. Т.Н.Твердохлебова, Л.В.Шишканова, А.В.Пригодин (Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора); Н.И.Тимошенко, к.м.н. М.В.Гузеева, к.б.н. Т.Н.Цыбина, И.А.Шестопалова, Л.В.Аляутдинова (ФГУЗ ЦГиЭ в г. Москве); д.в.н. А.А.Черепанов, д.б.н. В.В.Горохов (ВИГИС); д.б.н. Н.С.Малышева (Курский государственный университет); Н.А.Остапенко, О.В.Моськина (ФГУЗ ЦГиЭ в Ханты-Мансийском автономном округе); Т.Ю.Державина (ФГУЗ ЦГиЭ в Тульской области).
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 июля 2010 г.
3. Введены взамен методических указаний "Методы санитарно-паразитологических исследований" МУК 4.2.796-99.
1. Назначение и область применения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы лабораторного контроля за объектами окружающей среды (почва, вода, бытовые и ливневые стоки, их осадки, навоз и навозные стоки, предметы обихода и другие), а также для проведения сертификационных испытаний приборов, установок отечественного и импортного производства (например, биотуалеты, водоочистные устройства индивидуального и коллективного пользования и другие) по паразитологическим показателям и определения эффективности средств и методов дезинвазии.
Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих санитарно-паразитологический контроль факторов внешней среды, а также могут быть использованы лабораториями организаций, осуществляющих производственный контроль и научных учреждений, занимающихся изучением особенностей эпидемиологии паразитарных болезней и научно обосновывающих мероприятиях по охране окружающей среды от загрязнения и защите здоровья населения.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 "Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании".
2.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 30 июня 2004 г. N 322 "Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека".
2.4. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней" и дополнение СП 1.3.2518-09.
2.5. СанПиН 3.2.1333-03 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".
2.6. СанПиН 2.1.7.573-96 "Гигиенические требования к использованию сточных вод и их осадков для орошения и удобрения".
2.7. СанПиН 2.1.7.1287-03 "Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы".
2.8. МУ 3.2.1756-03 "Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями".
2.9. МУ 2.1.7.730-99 "Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест".
2.10. ГОСТ Р 17.4.3-01.83 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб".
2.11. ГОСТ Р 17.4.4.02-84 "Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического анализов".
2.12. ГОСТ Р 17.4.3.07-2001 "Охрана природы. Почвы. Требования к свойствам осадков сточных вод при использовании их в качестве удобрений".
3. Оборудование, расходные материалы,
лабораторная посуда, реактивы
3.1. Оборудование
Шкаф вытяжной универсальный, обеспечивающий биологическую и химическую защиту.
Холодильник электрический бытовой.
Термостат электрический (ТС-80 или аналогичный).
Центрифуги для исследования почвы, иловых осадков, сточных вод, смывов напольные и (или) настольные.
Световые микроскопы современного поколения со сменными объективами (в том числе, для иммерсионного микроскопирования - х90, х100) и окулярами.
Стереоскопический микроскоп (типа МБС).
Люминесцентный микроскоп "ЛЮМАМ" или его аналог.
Осветитель к микроскопу ОИ-19 или другой аналогичный.
Столик нагревательный к микроскопу.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, максимальный предел взвешивания 200 г.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, максимальный предел взвешивания 1 кг.
Аппарат для встряхивания.
Денсиметры (ареометры типа I (A1) с пределами измерения от 1,000 до 1,600 кг/куб. м ГОСТ 1300-74.
Приборы вакуумного фильтрования ПВФ-142/Э или ПВФ-142/ЭМ, отборник флотанта фильтрующий "ОФФ-25" или эквиваленты.
Пробоотборник-концентратор.
"ПробоКонГ-СЭС" или эквивалент.
Пылесос, электрощетка.
Моющий пылесос.
Аппарат Бермана.
Термовлагобарометр БМ-2.
Часы песочные на 3 и 5 мин., или часы сигнальные.
Дозаторы пипеточные П 1-0,1; П 1-0,5; П-1,0 мл или аналогичные со сменными наконечниками ТУ 64-339-81.
3.2. Расходные материалы
Пинцеты анатомические.
Кисти жесткие (из щетины) и мягкие (из волоса белки, колонка или соболя) для живописи N 12-18.
Штативы лабораторные для пробирок ТУ 61-1-707-80.
Иглы препаровальные.
Совки, шпатели, ложки, лопаты, бур Некрасова.
Пластиковые мешки и пакеты.
Мембранные фильтры с размером пор 1-4 мкм и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтродержателя фильтровального устройства.
Трековые мембраны с размером пор от 0,5 до 5 мкм.
Ситечки с металлической или капроновой сеткой (размер ячеек 0,25-0,3 мм).
Резиновые груши разных размеров.
Скальпели анатомические.
Ножницы анатомические разных размеров.
Счетная камера (для количественного учета яиц гельминтов).
Маркер (карандаш) по стеклу.
Лейкопластырь.
Скотч.
Клеенка и фартук клеенчатый.
Перчатки резиновые.
Весы для уравновешивания центрифужных пробирок.
Кюветы эмалированные разных размеров и почкообразные.
Корнцанги.
Пинцеты глазные.
Штатив Бунзена.
Треножник.
Горелки газовые.
Трубки резиновые.
Сложная петля.
Поплин, перкаль, сатин.
Ножи почвенные.
Сита почвенные с сеткой 0,25; 0,5; 1; 3 мм.
Шпатели металлические.
Шпатели пластмассовые.
Калька и пергамент.
Коробки картонные.
Другие расходные материалы, в том числе перевязочные (вата, марля, разовые полотенца, салфетки и пр.).
3.3. Лабораторная посуда
3.3.1. Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50-100 мл ГОСТ 10394-63.
Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл, 50, 100 и 250 мл ГОСТ 1770-64.
Стекла предметные размером 25x75 мм; 60x120 мм.
Стекла покровные размером 18x18; 24 x 24 мм ГОСТ 6672-99.
Чашки биологические (Петри) ГОСТ 25336-82.
Емкости для отбора проб воды, осадков, навоза и навозных стоков из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые емкостью 1; 2; 5; 20 и 25 л; стеклянные бутылки; фляги металлические емкостью 30-35 л; эмалированные бидоны; ведра 8-10 л; тазы, пластмассовые фляги емкостью 20-40 л или пластмассовые баки емкостью 50 л с диаметром более 40 см.
Цилиндры измерительные с носиком 1-00, 1-25, 1-500 ГОСТ 1770-74.
Колбы 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 ГОСТ 1770-74.
Капельница для многократной дозировки по Манну ГОСТ 9876-61.
Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100; 500; 1000; 2000 мл с притертыми или завинчивающимися крышками.
Спиртовки лабораторные стеклянные.
Цилиндры градуированные с носиком на 1,5-2,0 л.
Стеклянные воронки разных размеров.
Часовые стекла разных размеров.
Стеклянные палочки.
Пипетки градуированные от 1 до 10 мл.
Банки стеклянные с притертыми или резиновыми пробками разных размеров до 500 мл.
Банки стеклянные широкогорлые до 2 л.
Банки фарфоровые без крышек 500 мл.
Бутыли (1-5 л) с тубусом для дезинфицирующих растворов.
Пробирки химические.
Кружки фарфоровые с ручками разных размеров.
Ступки и пестики фарфоровые разных размеров.
Мензурки на 100; 250; 500; 1000 мл.
Кристаллизаторы стеклянные.
3.4. Химические реактивы
Натрий едкий.
Нитрат натрия, ч.д.а.
Нитрат калия (калиевая селитра).
Нитрат аммония или гранулированная селитра (аммиачная).
Хлорид цинка.
Нитрат свинца.
Формальдегид 40%-й.
Кислота соляная с массовой долей 3%.
Масло касторовое.
Сульфат железа.
Сульфат меди.
Спирт этиловый ректифицированный технический.
Сульфат цинка семиводный, х.ч.
Сахароза, ч.д.а.
Сульфат магния, ч.д.а.
Тиосульфат натрия.
Вода дистиллированная.
Натрий хлористый, х.ч.
Изотонический раствор натрия хлористого с массовой долей 0,85% (физиологический раствор, жидкость Барбагалло).
Йод кристаллический, х.ч.
Калий йодистый, х.ч.
Эозин сухой, х.ч.
Метиленовый синий сухой, х.ч.
Кислота молочная, х.ч.
Панкреатин.
Пепсин (возможен искусственный).
Трипсин.
Натрий двууглекислый, ч.д.а.
Сульфат алюминия.
Хлорное железо.
Хлористоводородная кислота.
Глицерин.
Раствор Люголя.
Ацетон.
Бензол.
Ксилол.
Бриллианткрезилблау синий (1:10000).
Известь хлорная.
Серная кислота.
Калий двуххромовокислый.
Иммерсионное масло.
Хромпик.
Метиленовый синий.
Молочная кислота.
Раствор йода спиртовой 5%-й.
Толуидиновый синий (1:1000).
Сафранин (1:10000 спирта 10 град. С).
Индигокармин
Раствор пирогалловой кислоты 50%.
Нейтральрот (1:1000).
Акридиновый оранжевый.
Корифосфин.
Примулин.
Аурамин.
Сульфат берлерина.
Трипафлавин.
Риванол.
Акрихин.
Мертиолят.
3.5. Насыщенные растворы
3.5.1. Для методов флотации используют насыщенные растворы с заданной плотностью, которые следует готовить непосредственно перед применением (табл. 1). Количество солей на 1 л воды для различных насыщенных растворов приводится в табл. 3. В случае хранения готовых насыщенных растворов перед проведением исследований необходимо проверять их плотность ареометром (денсиметром). Насыщенные растворы с плотностью ниже требуемой не использовать.
Таблица 1
Насыщенные растворы, используемые для методов флотации
Насыщенный раствор
|
Плотность
|
Состав раствора
|
количество солей
|
количество
воды
|
Раствор нитрата натрия
|
1,38-1,40
|
нитрат натрия
1000 г
|
1 л
|
Раствор нитрата аммония,
или гранулированной
аммиачной селитры
|
1,3
|
нитрат аммония
1500 г
|
1 л
|
Раствор Брудастова
|
в свежем растворе:
1,47-1,48; через
24 часа снижается
до 1,40
|
натриевая селитра
- 900 г,
калиевая селитра
- 400 г
|
1 л
|
Раствор тиосульфата
натрия (гипосульфита
натрия)
|
1,4
|
1750 г
Na2S2O3 x 5H2O
|
1 л
|
3.5.2. Для приготовления насыщенных растворов насыпают соль в эмалированное ведро с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости (бутыли). О насыщенности раствора судят по наличию на дне сосудов кристаллов соли и (или) измеряют ареометром его плотность. Образующийся на дне сосуда осадок используют при следующем приготовлении насыщенного раствора.
4. Методы исследования почвы
4.1. Отбор проб, транспортировка, хранение
и подготовка к исследованию
Периодичность (частота) санитарно-паразитологического исследования почвы зависит от цели лабораторного контроля.
Количество и размер пробных площадок на обследуемой территории закладывается с учетом эпидемиологической значимости объекта и его общей площади.
Отбор проб почвы для паразитологических анализов с целью оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения проводят не менее 1 раза в год.
Отбор проб почвы на территории детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха проводят не менее 2 раз в год - весной и осенью.
При изучении динамики самоочищения почвы от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца наблюдений еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.
Так, на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5x5 м. При оценке качества почв сельскохозяйственных угодий учитываются характер источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности: на каждые 0,5-20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10x10 м.
С каждой пробной площадки отбирается 1 объединенная проба весом 200 г, состоящая из 10 точечных проб массой 20 г каждая. Точечные пробы отбирают на пробной площадке методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа. Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова послойно с поверхности и глубины 10-20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40-60 см) слоев почвы послойно. Объединенную пробу составляют путем смешивания 10 точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.
|
