Методические указания мук 2661-10
|
Скачать 0.78 Mb.
|
|
Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). В этикетке обязательно разборчиво указывается фамилия и должность отборщика пробы и представителя учреждения, на территории которого отбирались пробы. Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по исключению возможности их загрязнения. Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре около 5 град. С. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов - до 7 суток, а на яйца геогельминтов - не более 1 месяца. Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 ч. при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник. При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают жидкостью Барбагалло, или 3% раствором соляной кислоты, а затем ставят в холодильник. Перед исследованием объединенную пробу почвы рассыпают на бумаге или кальке, разминают пестиком крупные комки, выбирают из нее корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных и др. Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм. Этот материал исследуют на яйца гельминтов и на цисты простейших. 4.1.1. При обнаружении возбудителей гельминтозов определяют: - вид возбудителя; - жизнеспособность; - экстенсивный показатель загрязнения (отношение числа положительных проб к числу исследованных проб); - интенсивный показатель загрязнения (общее количество возбудителей в 1 кг или 100 г почвы); - категория загрязнения почв (чистая, умеренно опасная, опасная, чрезвычайно опасная) в соответствии с СанПиН 2.1.7.1287-03. 4.2. Исследование почвы на яйца гельминтов. Метод Романенко (1996) Ход исследования. Из объединенной пробы берут на исследование 4 порции по 25 г почвы, помещают их в центрифужные пробирки объемом 250 мл (в случае отсутствия таковых можно пользоваться пробирками объемом 80-100 мл, но помещать в них следует не более 15 г почвы) и заливают 3% раствором натриевой или калиевой щелочи (в соотношении 1:1). После этого содержимое пробирок тщательно размешивают, отстаивают в течение 20-30 мин. и центрифугируют 5 мин. при 800 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой (1-5 раз в зависимости от типа почвы: для песчаных и супесчаных - достаточно одной промывки, для глинистых, суглинистых, черноземных - от 2 до 5) до получения прозрачной надосадочной жидкости. После добавления очередной порции промывочной воды осадок на дне центирифужной пробирки тщательно перемешивают при каждом промывании. После промывки к почве добавляют насыщенный (плотность 1,38-1,40) раствор нитрата натрия. Объем насыщенного раствора зависит от величины стакана (пробирки): в 250 мл стаканы добавляют по 150 мл насыщенного раствора, в более мелкие пробирки, например, объемом 80-100 мл соответственно 45-50 мл насыщенного раствора. Почву тщательно размешивают, полученную смесь центрифугируют. Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же насыщенным раствором соли до уровня на 2-3 мм ниже краев пробирок и накрывают предметными стеклами. Яйца гельминтов всплывают и концентрируются в поверхностной пленке насыщенного раствора. Очень важно исключить какую-либо потерю поверхностной пленки. Для этого между краем пробирки и предметным стеклом оставляют пространство шириной не более 10 мм, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней стороной стекла, которое осторожно передвигают до полного покрытия центрифужной пробирки. Через 20-25 мин. отстаивания стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх, а на их место ставят другие (при необходимости и третьи). На предметные стекла с поверхностной пленкой наносят 1-2 капли 30% раствора глицерина, накрывают их покровными стеклами, а затем микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении в 80, а для определения степени их развития или деформации - в 400 раз. При необходимости приготовленные препараты можно хранить в холодильнике до 5-7 суток, не допуская подсыхания. При подсыхании препаратов по краям покровных стекол добавляют несколько капель 30% раствора глицерина. Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в 4-х порциях пробы умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы. Эффективность метода колеблется от 59,6-83,1%, в среднем - 73,0%. Для определения истинной обсемененности почвы яйцами аскарид и власоглава необходимо использовать поправочные коэффициенты для различных типов почв (табл. 2), для чего необходимо определить тип почвы, а затем умножить число обнаруженных яиц гельминтов одного вида на коэффициент для этого типа почвы и для данного вида гельминта. Тип почвы должен быть определен при отборе проб и указан в сопроводительных документах. Таблица 2 Поправочные коэффициенты для определения истинной обсемененности почв яйцами аскарид и власоглавов
Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхов, клонорхов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5% раствором йодата калия. Примечание. При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования: 1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол. 2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38-1,40). В случае нарушения указанных требований, поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, а скорость всплывания яиц гельминтов замедлится, и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки. Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси "почва с щелочью" проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго - "почвы с насыщенным раствором соли" - подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования. После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15-20 мин., затем моют в чистой воде. Стекла протирают хлопчатобумажной тканью и помещают для обеззараживания в смесь Никифорова (из расчета 1 мл смеси на 1 стекло), где они могут храниться длительное время. Извлеченные из смеси Никифорова стекла протирают хлопчатобумажной тканью, заворачивают в бумагу небольшими партиями и стерилизуют. 4.3. Исследование почвы на яйца гельминтов. Метод Васильковой и Гефтер (1955) Ход исследования. Из объединенной пробы берут навеску 50 г почвы, помещают в центрифужную пробирку емкостью 250 мл. Одновременно ведется обработка почвы из 4-х проб. Отобранные навески заливают 3% раствором щелочи (NaOH, KOH) или 1% раствором стирального порошка "Лотос" (или другим CMC) в соотношении 1:2 на 60 мин. для размягчения почвы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают стеклянными палочками или электромешалкой в течение 5 мин., а затем центрифугируют 5 мин. при 800-1000 об./мин., надосадочную жидкость сливают (при обработке черноземной, торфяной почвы или илового осадка обработку щелочью повторяют и промывают от 1 до 5 раз в зависимости от типа почвы до получения прозрачной надосадочной жидкости). К осадку добавляют насыщенный раствор азотнокислого натрия (удельный вес 1,38-1,40) в соотношении 1:2, тщательно перемешивают стеклянной палочкой 5 мин., уравновешивают и центрифугируют 5 мин. при 800-1000 об./мин. Эта процедура повторяется 3 раза. После каждого центрифугирования раствор над уплотненным осадком сливают в отдельную емкость для дальнейшего фильтрования. Раствор фильтруют через мембранные фильтры "Владипор" типа МФАС-СПА диаметром 35 мм фильтровальной установкой ПВФ-35/2. С фильтра делают соскоб осадка покровным стеклом в каплю 50% раствора глицерина и микроскопируют. 4.4. Исследование почвы на личинки гельминтов. Метод Бермана (1942) Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана. Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10-15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой. Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45-50 град. С) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой. Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 град. С. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3-4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок. 4.5. Исследование почвы на личинки гельминтов. Метод Супряга Ход исследования. В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 град. С) физиологическим раствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 мин. жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под стереоскопическим бинокулярным микроскопом. По эффективности метод Супряга не уступает методу Бермана. 4.6. Дифференциальная диагностика личинок свободноживущих и паразитических нематод. Метод Корта Принцип метода Корта заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40% раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5-8 мин., а паразитические остаются живыми в течение 15-20 мин., но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1: 25 первые гибнут через 12 мин., тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижными. 4.7. Исследование почвы на цисты кишечных простейших. Метод Падченко (1992) Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3-х раз), собирая промывные воды в одном цилиндре. Промывные воды отстаивают, через 24 ч. надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2-3 суток после его получения. Для того чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2-х месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят 0,0016-0,0018 г, 40% раствор формалина, 10,4-0,9 г 96% этилового спирта и физиологический раствор до 100 мл. Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике. Для приготовления мазков каплю исследуемой смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом полностью прокрашиваются и имеют красный цвет. Жизнеспособные накапливают краску на поверхности цисты и имеют вид светящихся колец красного цвета. 5. Исследование воды 5.1. Исследование воды питьевого и хозяйственно-бытового назначения, в том числе воды плавательных бассейнов и аквапарков Исследование воды регламентируется методическими указаниями МУК 4.2.1884-04 "Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов" и МУК 4.2.2314-08 "Методы санитарно-паразитологического анализа воды". |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
Методические указания мук 2661-10 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
|
Методические указания мук 3007-12 Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический... |
|
Методические указания мук 2429 08 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
 |
Методические указания мук 2429 08 Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия... |
|
Методические указания методические указания разработаны: Федеральной... Му 3011-12. Дезинфектология. "Неспецифическая профилактика клещевого вирусного энцефалита и иксодовых клещевых боррелиозов". Методические... |
|
Методические указания по курсовому проектированию по дисциплине «Проектирование... Электронный ресурс]: методические указания / О. Ф. Абрамова// Сборник «Методические указания» Выпуск. Электрон текстовые дан.(1файл:... |
|
Методические указания му 1891-04 Организация работы прививочного... Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и лечебно-профилактических... |
|
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Методические указания предназначены для студентов факультета заочного социально-экономического образования специальности 040101.... |
|
Методические указания doc Методические указания по выполнению лабораторно... Данные методические указания для студентов являются частью учебно-методического комплекта по пм 01. «Техническое обслуживание и ремонт... |
|
Методические указания му 2… Лабораторная диагностика, лечение и профилактика особо опасных микозов. Методические указания. 2009. 66 с |
|
Методические указания для обучающихся Методические указания рассмотрены и утверждены на заседании кафедры от 23. 03. 2015 протокол №11 |
|
Методические указания по изучению учебной дисциплины Методические указания предназначены для преподавателей русского языка и литературы профессиональных образовательных организаций |
|
Методические указания по выполнению практических работ адресованы... Методические указания для выполнения практических работ являются частью основной профессиональной образовательной программы огбоу... |
|
Методические указания по проведению практических занятий Методические указания рассмотрены и одобрены на заседании пцк по укрупненной группе 140000 Электроснабжение (нпо и спо) |
|
Методические указания к лабораторной работе Барнаул 2008 ... |
|
Методические указания му 1252-03 Методические указания предназначены для специалистов санитарно-эпидемиологической службы и лечебно-профилактических организаций,... |