Методические рекомендации. Гематологические анализаторы. Интерпретация анализа крови животных. Ставрополь 2015
|
Скачать 1.14 Mb.
|
|
Эритроцитарная гистограмма Как правило, регистрируемая кривая подчиняется закону нормального (гауссова) распределения. Гистограмма должна начинаться и заканчиваться на базовой линии и между нижним и верхним дискриминатором. По горизонтали откладывается объем измеряемой клетки в фл (1 фл = 10-15 /л), вертикальная ось на графике фиксируется как 100% шкала. Нормальная эритроцитарная гистограмма имеет симметричную (куполообразную) форму. На некоторых анализаторах при уменьшении количества эритроцитов амплитуда гистограммы уменьшается. При появлении патологических или нескольких популяций эритроцитов форма гистограммы меняется. Несмотря на то, что пороговое значение для эритроцитов составляет 36 фл, дополнительная область от 24 до 36 фл позволяет выявить клетки небольших размеров. Ретикулоцитарные параметры Ретикулоциты представляют собой незрелые эритроциты, содержащие остатки РНК и образующиеся после потери нормобластами ядер. В связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов стало возможным получать, помимо классических, дополнительные информативные ретикулоцитарные параметры. Аббревиатура ретикулоцитарных показателей в анализаторах различных фирм-производителей различна. Классические параметры ретикулоцитов RET% - относительное количество ретикулоцитов (в %); RET# - абсолютное количество ретикулоцитов (х 10 9 /л);
Ретикулоцитоз с резким увеличением фракции незрелых ретикулоцитов на фоне активного эритропоэза отражает повышенную регенераторную способность костного мозга. Сохраняющийся ретикулоцитоз может свидетельствовать о продолжающемся кровотечении. Ретикулоцитопения - индикатор угнетения эритропоэза. Нормализация абсолютного количества ретикулоцитов (RET#) - показатель восстановления пролиферативной активности эритрокариоцитов Объемные MCVr (Mean Cell Volume Reticulocytes) - средний объем ретикулоцитов (фл); MSRV (Mean Sphered Reticulocyte Volume) - средний объем сферических ретикулоцитов, фл. - Низкий объем ретикулоцитов объясняет появление микроцитов в периферической крови. - Объемные показатели ретикулоцитов могут использоваться в диагностике ЖДА, мониторинге ответа на терапию железосодержащими препаратами, фолиевой кислотой, витамином В12. Характеризующие степень зрелости ретикулоцитов LFR% - популяция малых зрелых RET (87 - 99%); MFR% - популяция средних RET (2 - 12%); HFR% (1 - 2%) - популяция больших незрелых RET. MFR+HFR определяется как фракция незрелых ретикулоцитов - IRF (Immature Reticulocyte Fraction). Фракция незрелых ретикулоцитов может служить индикатором активности эритропоэза. Увеличение фракции незрелых ретикулоцитов свидетельствует об ускоренном выбросе незрелых клеток из костного мозга. Фракция незрелых ретикулоцитов повышается значительно раньше (как правило, на 2 дня) RET% и может служить наиболее чувствительным маркером в мониторинге за состоянием эритропоэтической активности костного мозга и эффективности лечения витамином В12, фолиевой кислотой, препаратами железа и ЭПО. Ретикулоцитарные индексы (RPI и CRC) В случае изменения только гематокрита рассчитывается индекс CRC (Corrected Reticulocyte Count) - скорректированный подсчет ретикулоцитов по формуле: Ht CRC = RET (%) х ----, 0,45 где: Ht - гематокрит больного; RET% - количество ретикулоцитов (%), измеренное в крови при данном гематокрите; 0,45 - идеальный гематокрит. Если у больного одновременно с низким гематокритом (Ht) в периферической крови присутствуют незрелые ретикулоциты (MFR и HFR), то рассчитывается индекс продукции ретикулоцитов RPI (Reticulocyte production index): RET (%) х Ht RPI = ---------------------------------. 0,45 х дни циркуляции Ret в крови Величина RPI широко варьирует в зависимости от степени тяжести анемии, продукции ЭПО и других факторов. Снижение данного индекса менее 2 указывает на низкую пролиферативную активность эритрокариоцитов. Расчет данных индексов позволяет дать правильную оценку характера эритропоэза и, таким образом выбрать адекватную программу лечения больных. Исследование ретикулоцитов используется для: - оценки активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей; - детекции нарушения регенераторной способности костного мозга при дефиците железа, витаминов B12, В6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии; - оценки состояния эритропоэза на фоне лечения эритропоэтином; - оценки способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга; - оценки восстановления синтеза ЭПО после трансплантации почки; Тромбоцитарные параметры PLT (platelet) - количество тромбоцитов (х 10 9/л). В отличие от ручного подсчета тромбоцитов, где проводится предварительный лизис эритроцитов, автоматические счетчики крови анализируют тромбоциты и эритроциты без предварительной обработки. Это создает проблему дифференцирования больших форм тромбоцитов (макротромбоцитов) и сравнимых с ними по объему эритроцитов (микроцитов), их фрагментов (шизоцитов), а также фрагментов цитоплазмы лейкоцитов (клеточный дебрис). Существует несколько механизмов, предупреждающих подсчет одних элементов вместо других. Например, в приборах, использующих кондуктометрический метод, анализируется не только высота электрического импульса, но и его форма. Существует система дискриминаторов, определяющих высоту электрического сигнала, пропорциональную размеру частицы, и ширину (длительность) импульсов. Все импульсы, соответствующие размерам частиц от 1,8 до 30,0 фл, подсчитываются как тромбоциты. Если доля частиц с объемами в области 30 фл превышает запрограммированный порог, то выводится на экран сообщение "Micro RBC", либо "Macro PLT". При этом достоверность определения количества тромбоцитов снижена. Таблица 8
При агглютинации или агрегации эритроцитов тромбоциты могут оказаться внутри агрегатов, что приводит к снижению количества PLT. Гипертромбоцитоз (более 1,000 x 10 9/л) может превышать допустимый порог измерения PLT, что приведет к занижению показателя PLT. Это зависит от пределов линейности конкретного прибора. Гемолизированные образцы крови содержат строму эритроцитов, что приводит к повышению показателей PLT. При взятии крови с использованием гепарина или цитрата натрия в качестве антикоагулянта отмечается более выраженная агрегация тромбоцитов, что приведет к заниженному значению PLT. Многие исследователи предлагают использовать только один стандартный антикоагулянт - К ЭДТА в концентрации 1,5 - 2,2 мг на 1 мл2 крови. Однако и это не спасает от появления артефактов. При наличии аутоантител к тромбоцитам ЭДТА индуцирует агрегацию тромбоцитов, что проявляется псевдотромбоцитопенией. Тщательно выполненный подсчет тромбоцитов методом фазово-контрастной микроскопии обычно используется в качестве референсного метода, но и он характеризуется большим коэффициентом вариации - 7 - 23%. Для большинства современных гематологических анализаторов коэффициент вариации подсчета PLT не превышает 2 - 4%. MPV (mean platelet volume) - средний объем тромбоцитов выражается в фемтолитрах (фл) или куб. мкм. "Молодые" кровяные пластинки имеют больший объем, поэтому при ускорении тромбоцитопоэза средний объем тромбоцитов возрастает. В течение первых двух часов после взятия крови с ЭДТА происходит набухание тромбоцитов с изменением их объема и соответственно увеличением MPV. При наличии макротромбоцитов порог измерения для тромбоцитов может быть превышен, и они не подсчитываются, что приводит к занижению MPV. Небольшие фрагменты эритроцитов и лейкоцитов могут препятствовать измерению MPV. Тромбоциты могут быть в агглютинатах эритроцитов, что приведет к ошибочным результатам MPV. Это можно проверить по аномальным значениям МСН и МСНС. Увеличение MPV наблюдается при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, гипертиреозе, атеросклерозе, сахарном диабете. Крупные тромбоциты с аномальной морфологией появляются при миелопролиферативных заболеваниях. Уменьшение этого показателя отмечается после спленэктомии. PDW (platelet distribution width), % - ширина распределения тромбоцитов по объему. Этот параметр определяется на основании гистограммы распределения тромбоцитов. PDW количественно отражает гетерогенность популяции этих клеток по размерам (степень анизоцитоза тромбоцитов). Увеличение PDW может быть признаком присутствия агрегатов тромбоцитов, микроэритроцитов, фрагментов эритроцитов. PDW изменяется при миелопролиферативных заболеваниях. РСТ (platelet crit - тромбокрит), % - является параметром, который отражает долю объема цельной крови, занимаемую тромбоцитами. IPF- (Immature Platelet Fraction) - фракция незрелых тромбоцитов. Фракция незрелых тромбоцитов отражает состояние костномозгового тромбоцитопоэза. IPF повышается при регенерации костномозгового гемопоэза после химиотерапии. МРС - (mean platelet component) - средний тромбоцитарный компонент. Новый параметр в гематологических анализаторах характеризует плотность и гранулярность тромбоцитов. МРС коррелирует с активностью тромбоцитарного звена и может использоваться среди других показателей в качестве предвестника острых ишемических осложнений, а также риска развития тромбоза. Тромбоцитарная гистограмма В норме тромбоцитарная кривая характеризуется унимодальностью и асимметричностью. Гистограмма должна начинаться с базовой линии в области значений менее 2 фл и заканчиваться в зоне 20 - 30 фл. Количество тромбоцитов более 20 фл невелико. Наличие в пробе патологических тромбоцитов (макро- или микро-), шизоцитов, микроэритроцитов, фрагментов лейкоцитов меняет форму тромбоцитарной гистограммы, что требует определенной корректировки получаемых результатов. Анизоцитоз тромбоцитов не влияет на результаты счета тромбоцитов. Множественные пики на тромбоцитарной гистограмме могут наблюдаться при агрегации тромбоцитов, при этом результат подсчета тромбоцитов может быть ложно занижен. Для исключения ошибочного результата рекомендуется повторить исследование с цитратом натрия, который предотвращает свертывание крови в случае несовместимости образца с ЭДТА. При выявлении патологической тромбоцитарной гистограммы следует анализировать окрашенный мазок крови. Лейкоцитарные параметры WBC (white blood cells) - количество лейкоцитов крови (х 10 9/л). Измерение лейкоцитов проводится после полного лизиса эритроцитов специальным реагентом. Все частицы размером более 35 фл считаются как лейкоциты. Тромбоциты, размер которых меньше порогового значения 35 фл, исключаются из подсчета. Коэффициент вариации (CV) при автоматическом определении этого показателя составляет 1 - 3%, в то время как при ручном подсчете 6,5 - 15% в зависимости от числа лейкоцитов. Ошибки подсчета числа лейкоцитов при автоматическом анализе возможны в сторону завышение числа лейкоцитов при наличии в крови ядерных красных клеток или устойчивых к лизису эритроцитов, агрегатов тромбоцитов, криоглобулинов или криофибриногена. Присутствие ядерных красных клеток и агрегатов тромбоцитов в исследуемых образцах крови сопровождается в большинстве современных гематологических анализаторов появлением соответствующих "сигналов тревоги" на бланках анализов ("NRBC", "Plumb"). Ложное занижение количества лейкоцитов наблюдается при разрушении клеток при длительном хранении крови (более 24 часов) или грубом перемешивании. Следует обращать внимание на изменение формы RBC гистограммы. Таблица 9
Подсчет лейкоцитарной формулы Многие современные гематологические анализаторы определяют от 6 до 10 показателей лейкоцитарной формулы с учетом относительного и абсолютного количества клеток, так называемые 3Diff или 5Diff. Гематологические анализаторы, определяющие 18 параметров крови, дифференцируют все WBC на три популяции (3Diff) и определяют как относительное, так и абсолютное их содержание: - Лимфоциты, %, - LYM% или LY%; - Лимфоциты, кл/мкл, - LYM или LY#; - Гранулоциты, %, - GRN% или GR%; - Гранулоциты, кл/мкл, - GRN или GR#; - Моноциты, %, - MON% или МО%; - Моноциты, кл/мкл, - MON или МО#. Главным преимуществом автоматического подсчета лейкоцитарной формулы является повышение точности результатов за счет измерения большого количества клеток по сравнению с микроскопическим исследованием. Ограниченное число клеток, анализируемое при подсчете мазка крови, неравномерное распределение лейкоцитов в препарате, использование нестандартных методов подсчета являются главными причинами расхождения результатов обоих методов. В то же время при микроскопическом исследовании врач дифференцирует лейкоциты не только по их размерам, но и оценивает в полном объеме морфологию клетки (ядерно-цитоплазматическое отношение, структуру распределения хроматина и особенности окраски ядра, наличие зернистости в цитоплазме), что позволяет ему с гораздо большей точностью отнести клетку к тому или иному виду лейкоцитов. Для получения наиболее точных результатов дифференциального анализа лейкоцитов рекомендуется исследование образцов крови проводить в промежуток времени от 30 минут до 5 часов после взятия материала. При использовании предварительного разведения крови - от 5 минут до 1 часа. На дифференциальный подсчет популяций лейкоцитов влияют те же факторы, что и на общее количество лейкоцитов. Появление "сигналов тревоги" указывает на наличие патологических изменений в исследуемом образце и требует микроскопии окрашенного мазка крови. Некоторые факторы, влияющие на дифференциальный подсчет лейкоцитов: LY и LY%: нормобластоз, резистентные к лизису эритроциты (например, эритроциты, содержащие малярийный плазмодий) могут быть причиной ошибочного измерения LY. MON и MON%: крупные лимфоциты, атипичные лимфоциты, бластные клетки и избыточное количество базофилов могут оказывать влияние на точность подсчета МО. GRN и GRN%: избыток эозинофилов, метамиелоцитов, промиелоцитов, бластных клеток и плазматических клеток может быть причиной ошибочного подсчета GR и GR%. |
||||||||||||||
Похожие:
 |
Методические рекомендации по лабораторному предупреждению передачи... Методические рекомендации предназначены для специалистов организаций здравоохранения, осуществляющих заготовку, переработку, хранение... |
 |
Методические рекомендации для проведения учебной практики по дисциплине «анатомия животных» I. учебная практика по анатомии животных – общие и организационные вопросы |
|
Кафедра частной зоотехнии, селекции и разведения животных очная форма... Разведение с основами частной зоотехнии: методические указания студентам по изучению дисциплины. – Ставрополь, 2015. – 17 с |
|
Триглицериды диаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов... Так как у собак, кошек, лошадей, жвачных преобладают в крови липопротеины высокой плотности (лпвп), в целом, эти животные устойчивы... |
|
Методические рекомендации Ставрополь, 2003 Методические рекомендации предназначены для студентов медицинских вузов, врачей- терапевтов, врачей общей практики, врачей-интернов-... |
|
ДиаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения... Концентрация неорганических фосфатов в плазме крови животных определяется функцией паращитовидных желез, активностью витамина Д,... |
|
Методические рекомендации методические рекомендации подготовлены... Главного управления лечебно-профилактической помощи Минздрава рсфср; сотрудниками Ленинградского нии гематологии и переливания крови;... |
|
Методические рекомендации методические рекомендации подготовлены... Главного управления лечебно-профилактической помощи Минздрава рсфср; сотрудниками Ленинградского нии гематологии и переливания крови;... |
|
Методические рекомендации Краснодар 2015 Авторы-составители: Рыженко С. К Методические рекомендации предназначены педагогам-психологам общеобразовательных организаций, студентам психолого-педагогических... |
|
Методические рекомендации Организация трансфузиологической помощи... Методические рекомендации предназначены для руководителей лечебно-профилактических учреждений, врачей-трансфузиологов, ответственных... |
|
Методические рекомендации Организация трансфузиологической помощи... Методические рекомендации предназначены для руководителей лечебно-профилактических учреждений, врачей-трансфузиологов, ответственных... |
|
Методические указания для студентов к практическому занятию на тему... Тема: ««Дифференциальная диагностика нарушений ритма и проводимости. Экг интерпретация»» |
|
Методические указания для студентов к практическому занятию на тему... Тема: ««Дифференциальная диагностика нарушений ритма и проводимости. Экг интерпретация»» |
|
Липаза диаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов для... Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения концентрации липазы в крови животных |
|
«международный институт рынка» методические рекомендации по подготовке,... Методические рекомендации по выполнению выпускных квалификационных работ / Составители: составители Д. В. Березовский, А. А. Бодров,... |
|
Дипломная работа В результате работы был реализован компилятор, включающий в себя лексический и синтаксический анализаторы, инструменты для семантического... |