Методические рекомендации Содержание
|
Скачать 0.98 Mb.
|
|
Процедура анализа карбогидрат-дефицитного трансферрина методом капиллярного электрофореза Анализ карбогидрат-дефицитного трансферрина позволяет диагностировать употребление высоких доз алкоголя, эквивалентных 50 – 80 г и более абсолютного этилового спирта в день, на протяжении продолжительного периода времени (неделя и более) [108, 111], что согласно классификации ВОЗ соответствует хроническому злоупотреблению алкоголем с высоким риском тяжелых психических и физических нарушений и развития или наличием алкогольной зависимости. Процедура анализа состоит из следующих этапов: - Информирование, опрос пациента и заполнение опросника (Приложение 7); - Взятие образца крови, маркировка и оформление сопроводительной документации (Приложение 8); - Транспортировка образцов и документации в лабораторию для проведения анализа маркера CDT (Приложение 9); - Получение сыворотки крови (Приложение № 10); - Проведение качественной и количественной оценки маркера CDT методом капиллярного электрофореза и учет результатов; - Оформление заключения о результатах анализа (Приложение № 6). В случае несогласия освидетельствуемого с положительным результатом исследования, а также в случае получения положительного результата, количественные значения которого соответствуют «серой зоне» (1,3% ≤ CDT ≤ 1,6%), следует повторно внимательно рассмотреть возможные факторы интерференции на результат анализа (пп. 6.5-6.6) и назначить повторное исследование со свежим образцом сыворотки через 3-4 недели. По результатам анализа врачом психиатром-наркологом оформляется «Заключение медицинского учреждения о прохождении обследования на предмет хронического злоупотребления алкоголем» (Приложение № 11). 7.1. Информирование, опрос пациента и заполнение опросника В соответствии со ст. 31 Основ законодательства РФ об охране здоровья граждан от 22.07.1993 № 5487-1 до реализации анализа необходимо в полном объеме провести разъяснительную работу о целях и порядке осуществления тестирования с оформлением добровольного информированного согласия лиц старше 15 лет и родителей и/или иных законных представителей лиц в возрасте до 15 лет (Приложение 1). При отказе от обследования оформляется письменный отказ по форме, приведенной в Приложении 2. Для выявления возможных интерферирующих факторов и ограничений к исследованию, а также с целью получения данных по употреблению алкоголь-содержащих веществ проводится опрос обследуемого и заполняется опросник в соответствии с Приложением 7. При этом обследуемому в доступной форме доводится до сведения о важности предоставления полной и достоверной информации для интерпретации результатов анализа. 7.2 Взятие образца крови, маркировка и оформление сопроводительной документации Для проведения лабораторного тестирования осуществляют взятие и подготовку проб крови в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53079.4 – 2008. 7.2.1. Требования к условиям и процедуре взятия, приема и утилизации образцов крови Кровь отбирается из поверхностной вены открытым или закрытым способом в пластиковую одноразовую пробирку с плотно завинчивающейся крышкой без антикоагулянтов. Не допускается использование пробирок с ЭДТА или цитратом. Объем образца достаточный для исследования составляет 2-4 мл. При взятии образца крови оформляется «Направление на исследование образца крови методом капиллярного электрофореза на предмет злоупотребления алкоголем» (Приложение 8), а также «Справка о доставке биологических объектов на исследование методом капиллярного электрофореза» (Приложение 9). После взятия образцов крови осуществляется их кодирование с целью последующей надежной идентификации и исключения подмены. Наиболее целесообразно применение штрих-кодов, в которых отражены идентификационные признаки обследуемого. Штрих-коды изготавливают в месте взятия образца или в лаборатории, выполняющей анализ. Допустимо ручное кодирование образцов в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53079.4 – 2008. Контейнер с биопробой должен находиться под наблюдением ответственного за процедуру лица до тех пор, пока не будет кодирован и опечатан защитной самоклеющейся пленкой или отправлен на тестирование. Прием образцов крови для тестирования осуществляется уполномоченным лицом. Образцы не принимаются к исследованию в случае выявления несоответствия требованиям их взятия, хранения и транспортировки. Образцы биопроб считают потенциально опасными и утилизируют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями после истечения сроков хранения и проведения аналитических исследований согласно СанПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений». 7.2.2. Требования к условиям хранения и транспортировки образцов крови Образцы требуется как можно скорее доставлять в лабораторию, где будет проводиться дальнейшее исследование. Хранение образов крови до отправки в лабораторию и их последующая транспортировка должны осуществляться в холодильнике или специальных термоконтейнерах, поддерживающих температуру среды не выше 2-8о С. Не допускается хранение и транспортировка образцов при комнатной температуре. Транспортировку образцов и документации осуществляет лицо, уполномоченное медицинским учреждением. При необходимости длительного транспортирования в лабораторию (более часа) образцы свернувшейся крови (обычно свертывание происходит в течение 30 мин.) должны быть отцентрифугированы для получения сыворотки не позднее, чем через 1 час после взятия образца. Процедура получения сыворотки крови приведена в Приложении 10. Свежая сыворотка крови пригодна для исследования без дополнительной пробоподготовки. К анализу допускается сыворотка при хранении ее в условиях холодильника при температуре 2- 8°C не более 10 дней. При необходимости более длительного хранения образцы сыворотки крови должны быть заморожены (-18-24оС) в течение 8 часов с момента их взятия. Замороженная сыворотка пригодна для исследования в течение месяца. 7.3. Проведение качественной и количественной оценки маркера CDT методом капиллярного электрофореза Проведение качественного и количественного анализа CDT методом капиллярного электрофореза осуществляется в соответствии с Инструкциями по применению наборов реагентов для определения CDT на системах Capillarys или Minicap [10, 12] и предусматривает выполнение следующих этапов: - Настройка прибора для выполнения аналитических операций; - Помещение пробирок с образцами в штатив(ы); - Считывание штрих-кодов с пробирок с образцами и штативов для образцов (выполняется автоматически); - Разведение образцов из первичных пробирок в сегменте для разведения (выполняется автоматически); - Промывка капилляров и инжекция в них разведенных образцов (выполняется автоматически); - Разделение фракций CDT и их прямая детекция в капиллярах (выполняется автоматически); - Учет и интерпретация результатов; - Завершение работы на приборе. 7.4. Учет и интерпретация результатов После проведения анализа результаты качественного и относительного количественного определения изоформ трансферрина генерируются автоматически при помощи программного обеспечения прибора. 7.4.1. Учет результатов качественного анализа Результаты качественной оценки представляют собой электрофоретические кривые, отображающие фракции трансферрина, присутствующие в анализируемом образце сыворотки и располагающиеся в следующем порядке (слева направо): пентасиалотрансферрин, тетрасиалотрансферрин, трисиалотрансферрин, дисиалотрансферрин и асиалотрансферрин (Приложение 5, пример 1). Учет результатов качественного анализа включает обязательную визуальную оценку полученной ЭФ кривой с целью выявления на профиле аномальных помех или генетических вариантов трансферрина, присутствие которых может влиять на результаты количественной оценки CDT. Протокол исследования, содержащий графическую кривую с изображением профилей изоформ трансферрина, является обязательным приложением к заключению о результатах исследования (Приложение 6). Заключение о результатах исследования без протокола качественной оценки считаются недействительными. При наличии интерферирующих помех проведение количественной оценки фракций CDT недопустимо до их полного устранения (пп. 3.5-3.6). 7.4.2. Учет результатов количественного анализа Результаты относительной количественной оценки представляют собой автоматически скалькулированные относительные (%) концентрации изоформ трансферрина, полученные посредством прямой денситометрии фракций при 200 нм. Полученные результаты количественной оценки по каждой изоформе трансферрина, выраженные в процентах, отображаются в виде таблицы справа от графической кривой. Цвет, присвоенный той или иной фракции трансферрина в таблице, всегда соответствует цвету этой же фракции, выраженной графически (Приложение 5, пример 1). Для подсчета относительной концентрации изоформ CDT согласно текущему определению аналита программное обеспечение прибора производит суммирование значений карбогидрат-дефицитных фракций (ди-, моно- и асиалотрансферрина) и приводит итоговый результат количественного анализа в виде процентного содержания изоформ CDT слева от графической кривой (Приложение 5, пример 1). Это же значение импортируется в Протокол исследования и служит показателем наличия или отсутствия хронического злоупотребления алкоголем. Исследования Schellenberg и Wielders [109] на статистически достоверной выборке, а также клинические испытания теста, проведенные с 2011 по 2013 гг. в МНПЦ наркологии, показали, что верхнее референсное значение концентрации карбогидратдефицитного трансферрина (CDT) составляет 1,3 %. Пороговое значение, основанное на приведенном выше верхнем референсном значении с учетом погрешности измерений, составляет 1,6 %. Таким образом, в отсутствии интерферирующих факторов, значение CDT 1,6 % следует расценивать как показатель хронического алкогольного злоупотребления (положительный результат) (Приложение 5, пример 4). Значение CDT < 1,6 % при отсутствии интерферирующих помех на ЭФ профиле следует расценивать как отрицательный результат (Приложение 5, пример 2). При получении значений в диапазоне 1,3% ≤ CDT ≤ 1,6% («серая зона») рекомендуется провести повторное исследование спустя 3-4 недели с использованием образца свежей сыворотки от этого же пациента (Приложение 5, пример 3). 7.5. Факторы интерференции на результаты количественной оценки CDT и способы их устранения
К таким факторам, способным вызывать помехи на ЭФ профиле, препятствующие корректной количественной оценке CDT, относят: - образцы с признаками гемолиза; - старые, неправильно хранившиеся образцы; - образцы плазмы или неправильно подготовленная сыворотка; - образцы с ЭДТА или цитратом. В случае интерференции по причине использования образцов ненадлежащего качества (Приложение 5, пример 5) требуется провести повторный анализ с вновь взятым, свежим и правильно подготовленным образцом сыворотки от того же обследуемого.
В некоторых случаях образцы сыворотки могут содержать криоглобулины или криогель и/ или моноклональный белок (белок, синтезирующийся при ряде лимфопролиферативных заболеваний) и обладать повышенной вязкостью (особенно при хранении в замороженном состоянии). Такие образцы при проведении электрофореза могут формировать помехи в виде одной или нескольких дополнительных фракций на профиле или широкой фракции перед дисиалотрансферрином. Иногда может наблюдаться смещение электрофоретического профиля, что делает невозможным количественный анализ CDT. Для предотвращения данного вида интерференции необходимо осуществлять осмотр образцов, поступающих на исследование, и в случае обнаружения повышенной вязкости сыворотки провести их предварительную обработку при помощи раствора для обработки проб в соответствии с Инструкциями по применению наборов реагентов для определения CDT на системах Capillarys или Minicap. Такую же обработку следует провести в случае уже обнаруженной интерференции перед повторным исследованием образца (Приложение 5, пример 6).
В редких случаях у обследуемого могут быть выявлены генетические варианты трансферрина, которые затрудняют точную количественную оценку CDT. Однако в первую очередь следует различать истинные генетические варианты от «ложных». «Ложный» вариант трансферрина может формироваться в случае длительного хранения образца сыворотки при комнатной температуре. Данное нарушение приводит к разрушению С3 компонента комплемента и появлению «ложного» пика тетрасиалотрансферрина, что может быть ошибочно принято за генетический вариант. Для снятия интерференции «ложного» варианта следует повторить исследование на свежем, правильно подготовленном образце сыворотки. Истинные генетические варианты трансферрина (Приложение 5, пример 7) в большинстве случаев не препятствуют точной количественной оценке CDT. Тем не менее, сведения о наличии у обследуемого генетического варианта должны быть отражены в Протоколе исследования, а в случае получения положительных результатов, близких к пороговым, рекомендуется повторить анализ через 3-4 недели на образцах свежей сыворотки и подробнее изучить клинические данные пациента.
В литературных источниках описаны редкие случаи неполного разделения фракций ди- и трисиалотрансферрина, известные также как феномен ди-трисиало-блока (Приложение 5, пример 8). Механизм формирования блока ди-трисиалотрансферрина до конца не изучен, однако большинство авторов указывают на его взаимосвязь с органическими поражениями печени алкогольной и неалкогольной этиологии, в т.ч. алкоголь-индуцированный цирроз. Вследствие неполного разделения фракций ди- и трисиалотрансферрина корректная количественная оценка CDT невозможна. Наличие интерференции данного типа должно быть отражено в заключении о результатах исследования (Приложение 6), а пациенту назначено повторное исследование спустя 3-4 недели. 7.6 Возможные ошибки при интерпретации результатов тестирования В редких случаях положительный результат тестирования может быть вызван иными причинами, нежели хроническое злоупотребление алкоголем. Основными ошибками интерпретации результатов является неполный сбор информации, касающийся факторов способных вызывать неспецифическое повышение уровня CDT (Приложение 7). В настоящее время установлены следующие факторы, способные стать причиной завышения значений при оценке CDT: - CDG синдром – редкое наследственное нарушение гликозилирования гликопротеинов; - Первичный билиарный цирроз; - Активный хронический гепатит*; - Клеточная карцинома печени. Интерпретация результатов у пациентов с указанными состояниями может быть затруднительной и требует дополнительных подтверждающих анализов. Тем не менее, следует отметить, что рекомендованный в качестве материально-технической базы метод капиллярного электрофореза Sebia позволяет выявлять профили тяжелых хронических поражений печени (цирроз, карцинома, активный хронический гепатит), при которых CDT тестирование и корректная интерпретация полученных данных невозможны, что позволяет избежать выдачи ложных результатов (Приложение 5, пример 8). *Примечание: Активный хронический гепатит может приводить к обратному эффекту – занижению значений CDT вследствие формирования на ЭФ профиле блока «2-3- сиало». |
Похожие:
 |
Методические рекомендации по определению платы за содержание и ремонт жилых помещений Содержание Методические рекомендации по определению платы за содержание и ремонт жилых помещений (далее — Методические рекомендации) предназначены... |
|
Оформление и содержание реферата по клинической фармакологии методические рекомендации Методические рекомендации предназначены для студентов интернов и ординаторов высших учебных медицинских заведений |
 |
Методические рекомендации по дистанционному обучению в образовательных... Методические рекомендации предназначены для руководителей и заместителей образовательных организаций, для учителей, использующих... |
|
Методические рекомендации по ведению и заполнению типового реестра содержание Рекомендации по организационно-административному обеспечению формирования информационного ресурса Типового реестра 6 |
|
Методические рекомендации по использованию световозвращающих элементов... Рекомендации по выбору одежды со световозвращающими элементами и световозвращающих изделий |
|
Методические рекомендации для руководителей организаций по проведению... Методические рекомендации для руководителей организаций по проведению смотров конкурсов за лучшее содержание, использование защитных... |
|
Методические рекомендации Кемерово 2017 Содержание Особенности организации образовательной деятельности по преподаванию в начальных классах |
|
Методические рекомендации по формированию размера платы по содержанию... Тсж, жск) (далее – ук) для подготовки предложений о перечне и объемах работ, услуг, их стоимости и размере платы за содержание и... |
|
Методические рекомендации Санкт-Петербург Этиопатогенетическая терапия острых средних отитов: Методические рекомендации / Составитель св. Рязанцев. Спб.: 40 с |
|
Жилищных и коммунальных услуг и обоснованности Методические рекомендации по расчету размера платы за жилищные услуги (далее Методические рекомендации) |
|
Методические рекомендации Санкт-Петербург Принципы этиопатогенетической терапия острых фарингитов: Методические рекомендации / Составитель: С. В. Рязанцев. Спб.:, 32 с |
|
Методические рекомендации по изучению дисциплины для студентов 1... Методические рекомендации предназначены для студентов, изучающих курс «Русский язык и культура речи». Методические рекомендации включают... |
|
Методические рекомендации Предисловие Глава Методические рекомендации к разделу «Здоровье» Коррекционно-развивающее обучение и воспитание дошкольников с нарушением интеллекта |
|
Методические рекомендации по подготовке и написанию Иваново 2012 Методические рекомендации предназначены для студентов и преподавателей Ивановского фармацевтического колледжа |
|
Методические рекомендации по выполнению контрольных работ по дисциплине «Финансовый менеджмент» Методические рекомендации обсуждены и одобрены на заседании кафедры финансов и учета |
|
Методические рекомендации по подготовке и защите вкр бакалавров Основное содержание и формы проведения государственной итоговой аттестации студентов-выпускников вуза |