Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g к вирусу простого герпеса 1 типа в сыворотке крови (Иммунофа-igg-впг-1)
|
Скачать 139.03 Kb.
|
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА G К ВИРУСУ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА 1 ТИПА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ИммуноФА-IgG-ВПГ-1) 1. НАЗНАЧЕНИЕНабор реагентов ИммуноФА-IgG-ВПГ-1 предназначен для качественного и полуколичественного определения иммуноглобулинов класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 типа (ВПГ-1) в сыворотке крови человека методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Набор рассчитан на проведение 96 определений, включая контрольные образцы.Вирус простого герпеса (Herpes simplex virus, HSV) относится к семейству герпесвирусов, включающему также вирус опоясывающего герпеса, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр и др. Течение болезни при герпетической инфекции очень разнообразно, в ряде случаев оно настолько смазано, что инфекцию распознать невозможно. Основными клиническими состояниями, ассоциированными с герпетическими инфекциями, являются гингивостоматит, кератит и конъюнктивит, пузырчатые высыпания на коже, асептический менингит, энцефалит, инфекции половых органов и герпес новорожденных. Возбудители герпетической инфекции относятся к двум серотипам – ВПГ-1 и ВПГ-2, неотличимым морфологически, но различающимся по антигенным, биологическим и биохимическим свойствам, а также по клиническим и эпидемиологическим проявлениям. ВПГ 1 типа передается главным образом неполовым путем (воздушно-капельным или контактным). За исключением неонатального герпеса большинство герпетических инфекций в детском возрасте вызываются ВПГ-1. ВПГ 2 типа вызывает большую часть герпесов половых органов, герпес новорожденных и герпетические заболевания кожных покровов и слизистых оболочек нижней части тела. Инфекции, вызванные ВПГ-2, редко встречаются до начала половой активности, что обусловлено механизмом распространения вируса герпеса этого типа. Основная часть населения в большинстве популяционных групп заражена вирусом простого герпеса к 20 годам. Инфицированность взрослого населения вирусами ВПГ-1 и ВПГ-2 составляет около 80–90%. Иммуноглобулины класса G сохраняются в организме в течение всей жизни, поэтому выявление в сыворотке крови антител к ВПГ любыми серологическими тестами не дает информации о времени заражения. Исключение составляет анализ на специфические антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, характерным для острой стадии инфекции. В ответ на проникновение вируса ВПГ в организм начинается выработка антител. Выявление иммуноглобулинов класса M становится возможным в среднем на 4–6 день после инфицирования, их уровень достигает максимального значения на 15–20 сутки, а затем падает в течение 1–2 месяцев до очень низких или неопределяемых значений. Продукция специфических IgG начинается с 10–14 дня и нарастает в течение 4-6 недель. IgG сохраняются в организме человека в течение всей жизни. Диагностическое значение при первичной инфекции имеет выявление IgM и/или четырехкратное увеличение титра специфических IgG в парных сыворотках крови (полученных от больного с интервалом в 10–12 дней). При вторичном инфицировании титр IgG обычно повышается и сопровождается выраженными клиническими проявлениями. Иммуноглобулины класса M при реактивации инфекции обнаруживаются в острой стадии заболевания лишь у 10-30% людей. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода В основу метода положена схема непрямого иммуноферментного анализа. Антитела класса G к ВПГ-1, присутствующие в исследуемом образце, связываются с антигеном, сорбированным на поверхности лунок полистиролового планшета, а затем - с конъюгатом антител к IgG человека с пероксидазой. Количество связавшегося конъюгата определяют с помощью раствора субстрата (тетраметилбензидин с добавлением перекиси водорода). Интенсивность окраски продукта окисления субстрата прямо пропорциональна концентрации антител к ВПГ-1, содержащихся в анализируемом образце. 2.2. СОСТАВ НАБОРА В состав набора входят следующие компоненты: - планшет 96-луночный полистироловый, сенсибилизированный очищенным антигеном инактивированного вируса простого герпеса 1 типа, готовый для использования - 1 шт.; - положительный контрольный образец (К+), содержащий IgG к ВПГ-1, инактивированный, готовый для использования – 1 фл. (1,2 мл); - отрицательный контрольный образец (К-), не содержащий IgG к ВПГ-1, инактивированный, готовый для использования – 1 фл. (1,2 мл); - пороговый контрольный образец (Кпор), содержащий IgG к ВПГ-1 в пороговом титре, инактивированный, готовый для использования – 1 фл. (1,2 мл); - конъюгат антител поликлональных к IgG человека с пероксидазой, готовый для использования – 1 фл. (12,5 мл); - раствор для разведения сывороток (РРС), готовый для использования – 1 фл. (50 мл); - фосфатно-солевой буферный раствор с детергентом (ФСБР), концентрат 20-кратный, допускается выпадение кристаллов – 1 фл. (30 мл); - раствор субстрата на основе тетраметилбензидина (ТМБ) с добавлением перекиси водорода, готовый для использования – 1 фл. (12,5 мл); - стоп-реагент, готовый для использования – 1 фл. (15 мл); - пленка для заклеивания планшета - 1 шт. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Специфичность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. Чувствительность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИПотенциальный риск применения набора - класс 2а (ГОСТ Р 51609-2000, приказ Минздравсоцразвития России № 735 от 30 октября 2006 г.). Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента, в используемых концентрациях являются нетоксичными. Стоп-реагент действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раздражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы его следует немедленно тщательно смыть большим количеством проточной воды. При работе с набором и утилизации отходов следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - термостат суховоздушный поддерживающий температуру +(371)оС; - пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 2-20 мкл, 50-200 мкл, 200-1000 мкл; - пипетка полуавтоматическая многоканальная с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объем жидкости 50-300 мкл; - стакан химический мерный или колба мерная вместимостью 1000 мл; - вода дистиллированная; - бумага фильтровальная или салфетки марлевые; - перчатки резиновые или пластиковые. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Сыворотка крови. До исследования возможно хранение образцов до 48 часов при температуре +(2-8)оС. Допускается более длительное хранение образцов (до 3 месяцев) при температуре не выше минус 20 оС. Подготовка исследуемых образцов По 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС (разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием. Полученные растворы следует использовать в течение дня. 7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ 7.1. Приготовление рабочего раствора фосфатно-солевого буфера (ФСБР). Содержимое флакона с концентратом ФСБР перенести в мерный стакан вместимостью 1000 мл, дважды ополоснуть флакон дистиллированной водой, все промывные воды объединить с разведенным ФСБР и довести общий объем раствора до 600 мл дистиллированной водой. Полученный рабочий раствор ФСБР можно хранить в закрытой емкости при температуре +(2-8)оС не более 7 суток. Примечание. При хранении концентрата ФСБР могут образовываться кристаллы, поэтому при необходимости отбора аликвоты ФСБР необходимо слабо подогреть флакон с буферным раствором до полного растворения кристаллов, поместив его в водяную баню или термостат на температуру +37оС. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Внимание! Компоненты набора перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре +(18-25оС) не менее 30 минут. 8.1. Вставить в рамку необходимое количество лунок для контрольных и исследуемых образцов. Неиспользованные стрипы после вскрытия упаковки необходимо тщательно заклеить пленкой для заклеивания планшета и хранить в упаковке при температуре +(2-8)оС в течение 1 месяца. 8.2. Внесение реагентов следует проводить согласно схеме на рис. 1.
Рис. 1. Схема заполнения лунок планшета. Внести: по 100 мкл К+ - в лунки А1, В1; по 100 мкл К- - в лунки С1, D1; по 100 мкл Кпор - в лунки E1, F1. В оставшиеся лунки внести в дубликатах по 100 мкл подготовленных исследуемых образцов (ИС) (см. п. 6). Закрыть планшет крышкой или пленкой для заклеивания планшета. Инкубировать 30 минут при температуре +(371)оС. 8.3. Простым вытряхиванием удалить образцы из лунок. Затем 5 раз промыть планшет. Для этого в каждую лунку планшета внести не менее 300 мкл рабочего раствора ФСБР (см. п. 7.1), перемешать пятью-шестью круговыми движениями планшета по поверхности стола, после чего удалить содержимое лунок декантированием. Процедуру повторить еще 4 раза. После этого тщательно удалить остатки влаги из лунок, несколько раз резко вытряхнув планшет о марлевую салфетку или фильтровальную бумагу. 8.4. Во все лунки планшета внести по 100 мкл конъюгата, закрыть планшет крышкой или пленкой и инкубировать 30 минут при температуре +(371)оС. 8.5. Простым вытряхиванием удалить конъюгат из лунок. Затем 5 раз промыть планшет (см. п. 8.4). По окончании промывки удалить влагу из лунок, несколько раз резко вытряхнув планшет о марлевую салфетку или фильтровальную бумагу. 8.6. Во все лунки планшета внести по 100 мкл раствора субстрата, поместить планшет в защищенное от света место и инкубировать 15 минут при температуре +(371)оС. 8.7. Во все лунки планшета внести по 100 мкл стоп-реагента и тщательно (осторожным постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок. 8.8. Измерить оптическую плотность (ОП) в лунках планшета при длине волны 450 нм. Нулевой уровень («бланк») задать по воздуху. Процедура измерения оптической плотности не должна превышать 15 минут. 9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Рассчитать средние арифметические значения показателей оптической плотности контрольных образцов и исследуемых образцов. Оценку результатов анализа проводят при следующих условиях: Значение ОПК+(ср) - не ниже 1,0. Рассчитывают как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПА1 + ОПВ1)/2. Значение ОПК-(ср) - не выше 0,15. Рассчитывают как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПС1 + ОПD1)/2. Значение ОП к пор(ср) - не ниже 0,2. Рассчитывают как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПЕ1 + ОПF1)/2. При несоблюдении этих условий анализ необходимо выполнить заново. 9.2. Интерпретация результатов анализа. Качественная оценка результатов. При качественной оценке результат анализа исследуемых образцов следует считать: положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgG к ВПГ-1), отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgG к ВПГ-1). Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор являются сомнительными, в этом случае необходимо провести повторное исследование вновь полученных сывороток. Полуколичественная оценка результатов. Полуколичественная оценка результатов основана на определении титра антител в исследуемых положительных образцах сыворотки крови. При полуколичественной оценке результатов на бланке с полулогарифмической системой координат отложить значения титров К+ (указан на этикетке флакона) и Кпор (1:100) по оси абсцисс, а соответствующие им значения оптических плотностей – по оси ординат. Соединить две точки прямой линией. Титр исследуемого образца найти, отложив на полученной прямой значение оптической плотности и опустив перпендикуляр на ось абсцисс. 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 10.1. Набор должен храниться в упаковке предприятия при температуре +(2-8)оС в течение всего срока годности - 12 месяцев. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре +(2-8)оС. Допускается транспортирование при температуре до +25 оС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается. 10.2. Неиспользованные стрипы после вскрытия упаковки необходимо тщательно заклеить пленкой для заклеивания планшета и хранить в упаковке при температуре +(2-8)оС в течение 1 месяца. 10.3. Контрольные образцы и конъюгат после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +(2-8)оС в течение 2 месяцев, остальные компоненты набора – в течение всего срока годности. 10.4. Компоненты набора перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре +(18-25оС) не менее 30 минут. 10.5. Рабочий раствор ФСБР в закрытой посуде можно хранить при температуре +(2-8)оС не более 7 суток. 10.6. До проведения анализа возможно хранение образцов сыворотки крови до 48 часов при температуре +(2-8)оС или в замороженном состоянии при температуре минус 20оС до 3 месяцев. Исключается использование для анализа гемолизированных и мутных образцов сыворотки крови. 10.7. Для отбора и добавления реагентов необходимо использовать полуавтоматические пипетки со сменными наконечниками, аттестованные на точность по значению средней дозы и воспроизводимость результатов пипетирования. 10.8. Не допускается использование РРС, ФСБР, раствора субстрата и стоп-реагента из наборов, производимых другими фирмами. 10.9. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора ИммуноФА-IgG-ВПГ-1, следует обращаться в ЗАО «НВО Иммунотех», почтовый адрес: 119991, Москва, Ленинские Горы, д. 1, стр. 11 «А», тел. 939-46-83, факс 932-88-96; электронный адрес: support@immunotek.ru; http://www.immunotek.ru; ИммуноФА-IgG-ВПГ-1   Титр (Титр К+ 1:2000, титр Кпор 1:100) |
Похожие:
 |
Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения тироксина Набор реагентов «Тироидифа-тироксин-01» предназначен для количественного определения концентрации тироксина в сыворотке крови человека... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения свободного тироксина Набор реагентов Тироидифа-свободныйТ4 предназначен для количественного определения содержания свободного тироксина (Т4) в сыворотке... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения... Рекомендована Комиссией по наборам реагентов для иммуноферментного (неинфекционные), радиоиммунологического и других видов иммунохимического... |
 |
Инструкция по применению «вич-1,2 аг/ат комботест» Набор реагентов «вич -1,2 аг/ат комботест», далее по тексту – Набор, предназначен для одновременного выявления антител к вич 1 типа,... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для определения активности... Набор реагентов «щф-uts» предназначен для определения активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке или плазме крови человека в... |
|
SpermMar Test IgG Асат класса IgG. Тем не менее, спермальные антитела класса IgA редко существуют без антител класса IgG. Поэтому тестирование спермальных... |
|
" 21 " августа Набор Иммунофа-тс предназначен для количественного определения содержания тестостерона (ТС) в сыворотке крови человека методом твердофазного... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Набор реагентов «креатинин uts» предназначен для количественного определения содержания креатинина в сыворотке или плазме крови и... |
|
Инструкция по применению «Набора реагентов для определения групп... «Набора реагентов для определения групп крови человека систем аво, Резус и KelI» (Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-ав, анти-А1, анти-Асл,... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Набор «глюкоза uts» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ |
|
Инструкция по применению «Набора реагентов для определения антигенов... Стандартная сыворотка для пробы Кумбса содержит специфические гетероиммунные антитела против белка крови человека и предназначена... |
|
Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Немецким обществом Клинической Химии (dgkc) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний... |
|
Ддс creatinine fs* Набор реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) в клинико-диагностических... |
|
По применению набора реагентов для количественного определения общей... Набор «ожсс uts» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ |
|
Инструкция по применению набора реагентов для определения тромбинового времени Набор предназначен для определения тромбинового времени при диагностике нарушений конечного этапа свертывания крови |
|
Набор реагентов для определения содержания альбумина в сыворотке и плазме крови человека Набор предназначен для количественного определения альбумина в сыворотке или плазме крови человека колориметрическим методом с бромкрезоловым... |