Инструкция
по применению набора реагентов для количественного определения содержания креатинина в сыворотке или плазме крови и моче человека
«КРЕАТИНИН-UTS»
Набор реагентов «КРЕАТИНИН-UTS» разрешен к производству, продаже и применению на
территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05456
Информация для заказа набора «КРЕАТИНИН-UTS»
Кат. №
|
Комплектация
|
Количество определений
|
КР-09-011-100
|
Р1 (50 мл) + Р2 (50 мл) + калибратор (1 мл)
|
100/v*
|
КР-09-011-400
|
Р1 (200 мл) + Р2 (200 мл) + калибратор (4 мл)
|
400/v
|
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «КРЕАТИНИН - UTS» предназначен для количественного определения содержания креатинина в сыворотке или плазме крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Креатинин – конечный продукт распада креатина, компонента мышечной ткани, который может трансформироваться в АТФ, являющуюся источником высокой энергии клетки и играющую важную роль в энергетическом обмене мышечной и других тканях. Образование креатинина зависит от состояния мышечной массы и меняется очень незначительно. Экскретируется почками посредством клубочковой фильтрации. Повышение уровня креатинина является показателем почечной недостаточности, также может наблюдаться при сахарном диабете, кишечной непроходимости, ожогах и других заболеваниях[1,2]. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество проведения результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Метод основан на реакции, описанной Яффе. Креатинин в щелочной среде взаимодействует с пикриновой кислотой с образованием окрашенного комплекса.
2.2. Фотометрическое определение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 510 (500 - 520) нм, образованного молекулами комплекса красного цвета [1]. Увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски и, следовательно, прямо пропорционально содержанию креатинина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Поскольку рабочий реагент, содержащий все компоненты для обеспечения химической реакции креатинина с пикриновой кислотой, нестабилен, набор реагентов «КРЕАТИНИН-UTS» поставляется в виде двух реагентов Р1, Р2 и раствора калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование
|
Состав
|
Концентрация
|
Реагент 1 (Р1)
|
Пикриновая кислота
|
40 ммоль/л
|
Реагент 2 (Р2)
|
Борат/Фосфатный буфер
|
300 ммоль/л
|
Калибратор
|
Раствор креатинина
|
177 мкмоль/л
|
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения содержания креатинина в диапазоне от 10 до 1760 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 10 мкмоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 2,5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 мкмоль/л = 1мг/1дл × 88,4.
4.5. Нормальные величины содержания креатинина в сыворотке или плазме взрослого человека [2]:
у мужчин, 55–96 мкмоль/л
у женщин, 40–66 мкмоль/л
в моче:
у мужчин, мкмоль/кг/сутки 124–230
у женщин, мкмоль/ кг/сутки 97–177
4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение содержания креатинина, приведены в обзоре [3].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент 1 содержит пикриновую кислоту, реагент 2 - щелочь. Следует избегать попадания реагентов на кожу и в глаза. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки, необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению содержания креатинина с применением набора реагентов «КРЕАТИНИН–UTS» рекомендуется использовать фотометр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение поглощение оптической плотности при длине волны 510 (500-520) нм (кинетический режим).
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Сыворотка или (гепаринизированная, ЭДТА-плазма) крови без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание креатинина, стабильны 7 дней при +(2-8) ОС и 3 месяца при -20 ОС.
7.8. Образцы мочи стабильны при 2-8 ОС в течение 5 суток. Значение рН в образцах мочи должно составлять <4.
7.9. Суточную мочу перед определением следует развести дистиллированной водой в 50 раз.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Приготовление рабочего реагента. Смешать Реагент 1 и Реагент 2 в соотношении 1:1.
8.2. Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8 ОС не более 1 месяца или при комнатной температуре в темном месте не более 1 недели.
8.3. Оптическая плотность рабочего реагента при 510 нм должна составлять 0,20,9 ед. опт. плотн.
(при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм).
8.4. Анализ проводить при комнатной температуре (18-25 ОС) или при 37 ОС, прогрев до соответствующей температуры рабочий реагент и кюветное отделение фотометра.
8.5. Калибратор и исследуемые образцы прогреть до комнатной температуры.
Проведение ручного анализа с использованием фотометра.
8.6. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Внести в кювету, мкл
|
Холостая проба
|
Калибровочная проба
|
Анализируемый образец
|
Рабочий реагент
|
1000
|
1000
|
1000
|
Калибратор
|
-
|
100
|
-
|
Сыворотка, плазма крови или разведенная моча
|
-
|
-
|
100
|
Вода дистиллированная
|
100
|
-
|
-
|
8.7. Анализируемые образцы перемешать и включить секундомер.
8.8. Измерить оптическую плотность калибровочной пробы (Акал1) против холостой пробы через 30 секунд. Повторно измерить оптическую плотность калибровочной пробы (Акал2) через 90 секунд.
8.9. Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Аобр1) против холостой пробы через 30 секунд. Повторно измерить оптическую анализируемого образца (Аобр2) через 90 секунд.
8.10. Рассчитать изменение оптической плотности в минуту (∆Акал=Акал1-Акал2) для калибровочной пробы и (∆Аобр= Аобр1- Аобр2) для анализируемого образца.
8.11. Содержание креатинина в сыворотке крови в мкмоль/л определить по формуле:
где: С – содержание креатинина в анализируемом образце, мкмоль/л;
∆Аобр – изменение оптической плотности анализируемого образца в минуту, ед.опт.плотн;
∆Акал – изменение оптической плотности калибратора в минуту, ед.опт.плотн;
177- концентрация креатинина в калибраторе, мкмоль/л.
8.12. Если полученное содержание креатинина в образце выше 1760 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.13. Содержание креатинина в суточной моче (в ммоль/сутки) определить по формуле:
где: Ссут – содержание креатинина в анализируемом образце мочи, ммоль/сутки;
ΔАобр – изменение оптической плотности анализируемой пробы в минуту, ед. опт. плотн;
ΔАкал – изменение оптической плотности калибровочной пробы в минуту, ед. опт. плотн;
V – количество мочи, собранной за сутки, л;
177 – содержание креатинина в калибраторе, мкмоль/л;
50 – коэффициент разведения мочи.
8.14. Если результат измерения содержания креатинина выше 1760 мкмоль/л, следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза, повторно провести измерение, полученный результат умножить на 2.
Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.15. Установить программу определения концентрации креатинина согласно таблице:
Наименование параметра
|
Значение
|
Метод измерения
|
Кинетика
|
Длина волны, нм
|
510 (500-520)
|
Измерение против
|
дист. вода
|
Температура реакции
|
(18-25 ОС), или 37 ОС
|
Единица измерения
|
мкмоль/л
|
Число знаков после запятой
|
1
|
Максимум изменения оптической плотности, ед.опт.плотн.
|
0,5
|
Соотношение реагент/проба
|
10:1
|
Концентрация калибратора, мкмоль/л
|
177
|
Время лаг-фазы, сек
|
30
|
Время измерения, сек
|
60
|
Количество измерений
|
2
|
Границы линейности, мкмоль/л
|
10-1760
|
Минимум нормы, мкмоль/л
|
55*
|
Максимум нормы, мкмоль/л
|
96*
|
*- Нормальные величины концентрации креатинина в сыворотке или плазме крови мужчин.
8.16. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав набора калибратора креатинина.
8.17. Концентрация креатинина в анализируемом образце рассчитывается в мкмоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.18. Если полученная концентрация креатинина в анализируемом образце выше 1760 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1, повторно измерить и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «КРЕАТИНИН –UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ОС в течение всего срока годности, указанного на упаковке. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Реагенты Р1 и Р2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.
9.3. Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2-8 ОС не более 1 месяца при условии достаточной герметичности флакона.
9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
9.5. Правильность определения можно проверить по контрольным сывороткам, аттестованным по содержанию креатинина методом Яффе.
Список литературы
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Murray R.L. Creatinine. Caplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1261-1266. and 418.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «КРЕАТИНИН –UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31, Факс: (495) 564-86-41.
E-mail: office@unimedao.ru;
http://www.unimedao.ru
|
