" 21 " августа
|
Скачать 124.66 Kb.
|
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ИммуноФА-ТС) Регистрационное удостоверение № ФСР 2007/01391 от 10 декабря 2007 г. 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор ИммуноФА-ТС предназначен для количественного определения содержания тестостерона (ТС) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). ТС является наиболее важным андрогенным и природным анаболическим гормоном мужчин и женщин. У мужчин основная часть ТС образуется в семенниках клетками Лейдига, меньшее количество вырабатывается клетками сетчатого слоя коры надпочечников и при трансформации из предшественников в периферических тканях. У женщин этот гормон секретируется яичниками и корой надпочечников, являясь промежуточным продуктом стероидного обмена. Нормальная секреция ТС необходима для поддержания репродуктивной функции у мужчин. ТС контролирует сперматогенез, функцию предстательной железы и потенцию. У женщин секреция ТС зависит от фазы менструального цикла – максимальное значение достигается в лютеиновой фазе и в период овуляции. Секреция ТС надпочечниками резко снижается у обоих полов после 50-60 лет. У мужчин недостаток андрогенов может вызвать замедленное половое созревание, бесплодие и импотенцию. У девочек избыток ТС в организме всегда является следствием нарушения функции надпочечников, а гиперсекреция у женщин может быть причиной гирсутизма с вирилизмом разной степени, часто в сочетании с олигоменореей, аменореей и бесплодием. Количественное определение содержания тестостерона в сыворотке крови человека может быть использовано для оценки функционального состояния репродуктивной системы, а также при некоторых заболеваниях, связанных с гормональными нарушениями. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 41 неизвестного образца, 6 калибровочных проб и 1 пробы контрольной сыворотки, всего 96 определений. 2. ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА Принцип метода основан на конкуренции тестостерона из измеряемой пробы и тестостерона, меченного пероксидазой, за центры связывания специфичных к тестостерону антител, иммобилизованных на поверхности лунок полистиролового планшета. Количество связавшегося конъюгата тестостерон-пероксидаза выявляют с помощью раствора субстрата (тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода). Интенсивность окраски продукта окисления субстрата обратно пропорциональна концентрации тестостерона, содержащегося в анализируемом образце. 3. СОСТАВ НАБОРА: - планшет 96-луночный полистироловый, стрипованный, сенсибилизированный моноклональными антителами к тестостерону, готовый для использования - 1 шт.; - калибровочные пробы на основе сыворотки крови теленка, содержащие известные количества тестостерона: 0; 1,0; 3,0; 10; 30 и 60 нмоль/л; концентрации ТС в калибровочных пробах могут незначительно изменяться от серии к серии, точные значения концентраций указаны на этикетках флаконов, готовые для использования – 6 фл. (по 0,5 мл); - контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с известным содержанием тестостерона, готовая для использования - 1 фл. (0,5 мл); - конъюгат тестостерона с пероксидазой, готовый для использования - 1 фл. (12,5 мл); - фосфатно-солевой буферный раствор с добавлением твин-20, рН 7,0+0,5, концентрированный - 1 фл. (15 мл); - раствор субстрата на основе 3,3`,5,5`-тетраметилбензидина (ТМБ) с добавлением перекиси водорода, готовый для использования - 1 фл. (12,5 мл); - стоп-реагент, готовый для использования - 1 фл. (15 мл); - пленка для заклеивания планшета - 1 шт. 4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Специфичность. Перекрестная реакция антител к тестостерону с другими стероидами приведена в таблице.
Чувствительность. Минимальная концентрация тестостерона, определяемая с помощью набора, составляет не более 0,2 нмоль/л. Воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации результатов определения содержания тестостерона в одном и том же образце сыворотки крови не превышает 8%. Точность. Процент "открытия" составляет 90-110%. Линейность. Линейность определения в диапазоне концентраций 1,0-60 нмоль/л составляет 90-110 %. Клиническая проверка набора. Концентрация тестостерона, исследованная с помощью набора ИммуноФА-ТС, в сыворотке крови здоровых женщин составила менее 4,0 нмоль/л, в сыворотке крови здоровых мужчин: 8,5 - 30 нмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить значения концентраций ТС, соответствующие нормальным для обследуемого контингента. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 2а. Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента, в используемых концентрациях являются нетоксичными. Стоп-реагент действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раздражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы следует его немедленно тщательно смыть большим количеством проточной воды. При работе с набором и утилизации отходов следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ: - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - термостат суховоздушный, поддерживающий температуру +(37+1)оС; - секундомер; - шейкер; - пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 2-20 мкл, 50-200 мкл, 200-1000 мкл; - пипетка полуавтоматическая многоканальная с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объем жидкости 50-250 мкл; - стакан химический или колба мерная вместимостью 300 мл; - бумага фильтровальная; - вода дистиллированная; - перчатки резиновые или пластиковые. 7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ Перед проведением анализа компоненты набора и исследуемые образцы сыворотки крови следует выдержать при комнатной температуре (+20-250С) в течение времени не менее 30 мин. Построение калибровочной кривой необходимо проводить для каждой серии анализов. 7.1. Приготовление рабочего раствора фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР). Содержимое флакона с концентратом фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР) перенести в мерный стакан вместимостью 300 мл, дважды ополоснуть флакон дистиллированной водой, все промывные воды объединить с разведенным ФСБР и довести общий объем раствора до 300 мл дистиллированной водой. Полученный рабочий раствор ФСБР можно хранить в закрытой емкости при температуре +(2-8)оС не более 7 дней. Примечание. При хранении ФСБР могут образовываться кристаллы, поэтому перед отбором аликвоты ФСБР необходимо слабо подогреть флакон с буферным раствором, поместив его в водяную баню или термостат при температуре +37оС до полного растворения кристаллов. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 8.1. Вставить в свободную рамку необходимое количество лунок для калибровочных проб, исследуемых образцов и контрольной сыворотки для постановки в дубликатах. Неиспользуемые стрипы необходимо тщательно заклеить пленкой для заклеивания планшетов и хранить в упаковке при температуре +(2-8)оС в течение всего срока годности набора.
Рис. 1. Схема заполнения лунок планшета. 8.2. В два ряда лунок планшета внести в дубликатах по 20 мкл калибровочных проб (КП), начиная с минимальной концентрации. 8.3. Внести в две лунки планшета по 20 мкл контрольной сыворотки (КС). 8.4. В оставшиеся лунки внести в дубликатах по 20 мкл исследуемых образцов сывороток крови (ИС). Процедуру внесения образцов следует выполнять как можно быстрее. 8.5. Во все лунки планшета внести по 100 мкл конъюгата. Конъюгат вносить в лунки планшета в той же последовательности, что и калибровочные пробы, контрольную сыворотку и исследуемые образцы. Продолжительность операции не должна превышать 15 минут. 8.6. Тщательно перемешать содержимое лунок, поместив планшет на шейкер, при комнатной температуре +(20-25оС) в течение 2-3 минут. 8.7. Закрыть планшет крышкой или пленкой для заклеивания планшета и инкубировать при температуре +37оС в течение 1 часа, избегая попадания прямого солнечного света. 8.8. Содержимое лунок удалить декантированием. Затем отмыть планшет. Для этого в каждую лунку планшета внести по 250 мкл рабочего раствора ФСБР (см п. 7.1), встряхнуть на шейкере в течение 1 минуты, после чего удалить содержимое лунок декантированием. Процедуру повторить еще 2 раза. При автоматической промывке необходимо вручную удалить содержимое лунок планшета, только после этого приступить к отмывке с помощью прибора, внося в каждую лунку планшета 300–350 мкл рабочего раствора ФСБР. По окончании промывки тщательно удалить остатки жидкости из лунок, несколько раз резко вытряхнув планшет о марлевую салфетку или фильтровальную бумагу. 8.9. Во все лунки планшета внести по 100 мкл раствора субстрата в той же последовательности, что и конъюгат. Инкубировать планшет при температуре +37оС в течение 10-15 минут, избегая попадания прямого солнечного света. Примечание. При внесении раствора субстрата рекомендуется всегда использовать новые наконечники. 8.10. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор субстрата, по 100 мкл стоп-реагента. Тщательно перемешать содержимое лунок, поместив планшет на шейкер, при комнатной температуре в течение 1 минуты. 8.11. Измерить оптическую плотность в лунках планшета при длине волны 450 нм. Длительность процедуры измерения оптической плотности не должна превышать 15 минут. 9. РАСЧЕТЫ 9.1. Построить калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации тестостерона в калибровочных пробах. Образец калибровочного графика приведен на рис. 2. Р  ис.2. Типичный калибровочный график, полученный с использованием набора ИммуноФА-ТС. 9.2. Рассчитать средние арифметические значения показателей оптической плотности контрольной сыворотки и исследуемых образцов и по калибровочному графику определить концентрацию тестостерона. 9.3. При построении калибровочного графика и определении содержания тестостерона в исследуемых образцах с помощью автоматического анализатора иммуноферментных реакций рекомендуется использовать кусочно-линейный метод аппроксимации. 9.4. Для выражения концентрации тестостерона в мкг/л значения, полученные в нмоль/л, следует умножить на коэффициент пересчета 0,288. 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 10.1. Набор реагентов ИммуноФА-ТС должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +(2-8)оС в течение всего срока годности - 12 месяцев. Допускается хранение набора при температуре до +25оС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается. 10.2. Компоненты набора перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре +(20-25оС) в течение времени не менее 30 минут. 10.3. Неиспользованные стрипы после вскрытия упаковки необходимо тщательно заклеить пленкой для заклеивания планшета и хранить в упаковке при температуре +(2-8)оС в течение всего срока годности набора. 10.4. Калибровочные пробы, контрольную сыворотку и конъюгат после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +(2-8)оС не более 2 месяцев, остальные компоненты набора – в течение всего срока годности. 10.5. Рабочий раствор промывочного буфера можно хранить при температуре +(2-8)оС в закрытой емкости не более 7 дней. 10.6. В случае дробного использования набора построение калибровочного графика необходимо проводить для каждого независимого эксперимента, а также рекомендуется определение концентрации ТС в контрольной сыворотке. 10.7. После постановки анализа необходимо убрать флаконы с оставшимися калибровочными пробами, контрольной сывороткой и конъюгатом в темное место (холодильник). 10.8. До проведения анализа возможно хранение образцов сыворотки крови при температуре +(2-8)оС не более 3 дней или в замороженном состоянии при температуре минус 20оС не более 2 месяцев. Допускается только однократное замораживание и размораживание образцов сывороток крови. 10.9. Исключается использование для анализа гемолизированных и мутных образцов сывороток крови. 10.10. Для отбора и добавления реагентов и анализируемых проб необходимо использовать полуавтоматические пипетки со сменными наконечниками, аттестованные на точность по значению средней дозы и воспроизводимость результатов пипетирования. 10.11. Не допускается использование раствора субстрата и стоп-реагента из наборов, производимых другими фирмами. 10.12. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора ИммуноФА-ТС, следует обращаться в ЗАО «НВО Иммунотех», почтовый адрес: 119991, Москва, Ленинские Горы, МГУ, д. 1, строение 11 А, тел. 939-46-83, факс 932-88-96; электронный адрес: support@immunotek.ru; http://www.immunotek.ru. и в Институт стандартизации и контроля лекарственных средств ФГУ «НЦЭСМП» Росздравнадзора по адресу: 117246, Москва, Научный проезд, д.14а, тел. 120-60-95. |
Похожие:
 |
Отчет о самообследовании принят на заседании педагогического совета... Определению соответствия критериям показателей государственной аккредитации, образовательным целям и социальным гарантиям |
|
Мониторинг сми с 22 августа по 26 августа 2016 г Установлены тарифы на коммунальные услуги для населения Кандалакши и Зеленоборского |
 |
Микрофинансирование мониторинг сми 04 августа 2017 Официальный сайт огв ставропольского края (stavregion ru), Ставрополь, 2 августа 2017 |
|
«рассмотрено» «согласовано» «утверждаю» Протокол № от «30» августа 2016г. «30» августа 2016 г. Приказ №1/2 от «01» сентября 2016г |
|
Российские сми о мчс мониторинг за 26 августа 2009 г События 26 августа (риа новости Горячая линия (информационная лента новостей), 25-08-2009) 6 |
|
Инструкция об охране геодезических пунктов (гкинп-07-11-84) Главным управлением геодезии и картографии при см СССР 2 августа 1984 г и Министерством обороны 22 августа 1984 г |
|
Инструкция об охране геодезических пунктов (гкинп-07-11-84) Главным управлением геодезии и картографии при см СССР 2 августа 1984 г и Министерством обороны 22 августа 1984 г |
|
«06» августа 2015 г. Пдо №303-cc-2015 От «17» августа 2015г. Руководителю предприятия Оао «Славнефть-янос» приглашает вас сделать предложение (оферту) на поставку хозяйственных товаров |
|
«06» августа 2015 г. Пдо №303-cc-2015 От «17» августа 2015г. Руководителю предприятия Оао «Славнефть-янос» приглашает вас сделать предложение (оферту) на поставку хозяйственных товаров |
|
Мониторинг сми за 9 августа 2017 года Представители мчс предупредили жителей Петербурга и Ленинградской области о тумане, который ожидается ночью и ранним утром в среду,... |
|
Программа подготовки трактористов категории «В» «С» Тракторист-машинист сельскохозяйственного производства, утвержденного приказом Министерства образования и науки Российской Федерации... |
|
«рассмотрено» «согласовано» «утверждаю» Протокол № от августа 2015г августа 2015г. Приказ № от сентября 2015г |
|
Основная образовательная программа начального общего образования... Рассмотрена на заседании педагогического совета (протокол №1 от 28 августа 2015г.) Утверждена и введена в действие приказом директора... |
|
Справка о наличии приборов учета энергоресурсов в мбоу сош №22 № п/п ... |
|
Микрофинансирование мониторинг сми 03 августа 2017 Московский Комсомолец # Екатеринбург. Урал (eburg mk ru), Екатеринбург, 2 августа 2017 |
|
Микрофинансирование мониторинг сми 11 августа 2017 Московский Комсомолец # Вологда. Череповец (vologda mk ru), Вологда, 10 августа 2017 |