Инструкция по применению набора реагентов для определения тромбинового времени

Скачать 62.29 Kb.

Название	Инструкция по применению набора реагентов для определения тромбинового времени
Тип	Инструкция

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Инструкция

ТОЛЬКО ДЛЯ IN VITRO ДИАГНОСТИКИ

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения

тромбинового времени

Тромбо-тест

на 50 и 400 определений

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для определения тромбинового времени при диагностике нарушений конечного этапа свертывания крови.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода. Заключается в определении времени свертывания плазмы крови под влиянием тромбина стандартной активности.

Состав набора:

на 50 определений:

Тромбин (лиофильно высушенный, 6-8 ед NIH во фл.) - 4 фл.
Контрольная плазма (нормальная, лиофильно высушенная) - 1 фл.

На 400 определений:

Тромбин (лиофильно высушенный, 500 ед NIH во фл.) - 1 фл.
Контрольная плазма (нормальная, лиофильно высушенная) - 2 фл.
Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл - 1 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения тромбинового времени - в диапазоне от 11 до 120 с.

Коэффициент вариации результатов определения тромбинового времени не превышает 10%.

Допустимый разброс результатов определения тромбинового времени в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

коагулометр; при отсутствии коагулометра - секундомер, термобаня на +37^оС;

пипетки вместимостью 0,1-1,0 мл; 10,0 мл;

пробирки стеклянные, цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

физиологический (0,9%) раствор хлорида натрия;

вода дистиллированная;

перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование - сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз, избыток цитрата натрия и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.

Внимание! При обследовании больных, получающих гепарин, рекомендуется предварительно очистить плазму от антикоагулянта (см. реагент "Гепасорб-1", производства фирмы "Технология-Стандарт").
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ

И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение тромбина

Вариант для набора на 50 определений:

В один из флаконов с тромбином внести необходимое количество дистиллированной воды (см. таблицу) и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25^оС) и легком покачивании в течение 2-3 мин. В результате получают раствор тромбина.

Свертывающая активность полученного раствора проверяется (см. ниже, а также таблицу) на свежеполученной нормальной или контрольной плазме, входящей в состав набора.
Ориентировочные значения нормы тромбинового времени

свертывания (в ручном и коагулометрическом вариантах)

Объем дистиллированной воды на флакон с тромбином, мл	Время свертывания, с
Объем дистиллированной воды на флакон с тромбином, мл	при коагулометрическом определении	при мануальном определении
2,0	11-14	12-16
3,0	15-19	17-23
5,0	20-29	24-34

Раствор тромбина рекомендуется не прогревать при температуре +37^оС и хранить при комнатной температуре (+18...+25^оС) не более 2 ч.

Б. Разведение контрольной плазмы

В один из флаконов с контрольной плазмой внести 0,5 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25^оС) и легком покачивании в течение 3 мин. Использовать для контроля активности тромбина (см. п. 1А), хранить при комнатной температуре не более 3 ч.

Вариант для набора на 400 определений:

А. Разведение концентрированного буфера

Содержимое флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочий раствор буфера.

Б. Разведение тромбина

1. Во флакон с тромбином внести 10,0 мл физиологического (0,9%) раствора хлорида натрия и развести содержимое при комнатной температуре (+18...+25^оС) и легком покачивании в течение 2-3 мин. В результате получают маточный раствор тромбина (хранится без существенной потери коагуляционной активности при температуре +2...+8^оС до 30 дней).

2. Для приготовления рабочего раствора тромбина смешать в пробирке один объем маточного раствора тромбина с 14 объемами рабочего раствора буфера. Полученный рабочий раствор тромбина при добавлении к разведенной контрольной плазме (см. Проведение анализа) должен иметь активность 15-16 с. В случае необходимости к раствору добавить небольшое количество буфера или маточного раствора тромбина для получения требуемой активности последнего.

Рабочий раствор тромбина для сохранения активности рекомендуется готовить в силиконированной или пластиковой (полистироловой) пробирке, не прогревать при температуре +37^оС и хранить при комнатной температуре (+18...+25^оС) до использования.

В. Разведение контрольной плазмы

Разводится аналогично (см. выше). Контрольную плазму во втором флаконе разводят и применяют по мере необходимости.

3. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. Поместить 0,2 мл исследуемой плазмы в пробирку, прогреть 1 мин при +37^оС. При работе на коагулометре в кювету внести и прогреть в течение 1 мин 0,1 мл плазмы.

2. Добавить 0,2 мл рабочего раствора тромбина (имеющего температуру +18...+25^оС!) и включить секундомер (в коагулометрическом варианте выполнения методики в кювету внести 0,1 мл раствора тромбина и начать отсчет времени свертывания).

В мануальном варианте анализа отметить время свертывания (образования фибрина) при периодическом покачивании пробирки.

4. ЧТЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результат выражают в секундах, сравнивают время свертывания контрольной и исследуемой плазмы. В норме тромбиновое время составляет 14-17 с. Укорочение тромбинового времени свертывания, как правило, свидетельствует о гиперфибриногенемии. Чаще при обследовании больных с патологией системы гемостаза встречается удлинение тромбинового времени, что может быть обусловлено следующими причинами:

присутствие в крови быстродействующих антикоагулянтов (гепарин и др.);

образование и накопление в кровотоке продуктов деградации фибриногена/фибрина (ПДФг/Фн), обладающих антитромбиновой активностью;

гипофибриногенемия;

дисфибриногенемия (качественный дефект фибриногена);

Полная несвертываемость плазмы под влиянием тромбина наблюдается сразу после внутривенного введения терапевтических доз (5000-10000 ед) гепарина.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор в разной комплектации рассчитан на проведение 50 или 400 анализов при расходе раствора тромбина по 0,2 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2...+8^оС в течение всего срока годности набора (18 мес. – для набора на 50 анализов и 24 мес. для набора на 400 анализов). Допускается хранение при температуре до +25^оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 1 мес с момента вскрытия его компонентов, а при дробном использовании предварительно разведенных и замороженных компонентов набора - 2 мес. (см. ниже).

Маточный раствор тромбина можно хранить при температуре +2...+8^оС не более 30 дней. Для увеличения срока годности маточного раствора тромбина с 1 до 2 мес рекомендуется сразу после разведения разделить маточный раствор тромбина на 2 равные части, одну из которых в герметично закрытом виде хранить при температуре

-8...-20^оС.

Рабочий раствор тромбина можно хранить при комнатной температуре (+18...+25^оС) не более 2 ч или не более 6 ч при температуре +2...+8^оС.

Контрольную плазму после разведения можно хранить при температуре +18...+25^оС не более 3 ч.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2...+8^оС не более 1 месяца. Для увеличения срока годности рабочего раствора буфера с 1 до 2 мес. рекомендуется сразу после разведения разделить этот раствор на 2 равные части, одну из которых в герметично закрытом виде хранить при температуре -8...-20^оС.

ЛИТЕРАТУРА:

Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: "Ньюдиамед-АО", 2001. - 296 с.

Похожие:

	Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения тироксина Набор реагентов «Тироидифа-тироксин-01» предназначен для количественного определения концентрации тироксина в сыворотке крови человека...		Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения свободного тироксина Набор реагентов Тироидифа-свободныйТ4 предназначен для количественного определения содержания свободного тироксина (Т4) в сыворотке...
	Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения... Рекомендована Комиссией по наборам реагентов для иммуноферментного (неинфекционные), радиоиммунологического и других видов иммунохимического...		Инструкция по применению наборы реагентов для определения соматических... Набор реагентов для определения соматических мутаций в гене egfr «Therascreen® egfr rgq pcr kit (24)» на 24 образца
	По применению набора реагентов для количественного определения общей... Набор «ожсс uts» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ		Инструкция по применению Наборы реагентов для определения соматических... Набор лабораторных реагентов для определения соматических мутаций в гене braf «braf rgq pcr kit (24)»
	Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Набор «глюкоза uts» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ		Инструкция по применению набора реагентов для определения активности... Набор реагентов «щф-uts» предназначен для определения активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке или плазме крови человека в...
	Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Набор реагентов «креатинин uts» предназначен для количественного определения содержания креатинина в сыворотке или плазме крови и...		Инструкция по применению набора реагентов для бактериологических исследований Питательная среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным...
	Инструкция по применению «Набора реагентов для определения групп... «Набора реагентов для определения групп крови человека систем аво, Резус и KelI» (Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-ав, анти-А1, анти-Асл,...		Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения... Набор реагентов Иммунофа-igg-впг-1 предназначен для качественного и полуколичественного определения иммуноглобулинов класса g (IgG)...
	Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения... Немецким обществом Клинической Химии (dgkc) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний...		Инструкция по применению набора реагентов для бактериологических исследований Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллёза сухой...
	Инструкция по применению набора реагентов для бактериологических исследований «in vitro», а также для культивирования туляремийного микроба для научных работ		Инструкция по применению «Набора реагентов для определения антигенов... Стандартная сыворотка для пробы Кумбса содержит специфические гетероиммунные антитела против белка крови человека и предназначена...

Руководство, инструкция по применению