Практикум по ветеринарной микробиологии
|
Скачать 3.35 Mb.
|
Тема 4. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИСтерилизация (от лат. sterilis — бесплодие) — обеспложивание, уничтожение патогенных и непатогенных микроорганизмов, их вегетативных и споровых форм в каком-либо объекте. В лабораториях стерилизуют питательные среды, стеклянную посуду (пробирки, пипетки, колбы и др.), инструменты, перевязочный материал, халаты. Для создания специальных условий работы стерилизуют воздух и все предметы в боксах. Для стерилизации используют физические, химические или биологические средства в зависимости от стерилизуемого материала. Механизм действия при разных способах стерилизации неодинаковый, но в основе каждого из них лежит способность нарушения жизненных процессов микробной клетки: денатурация белков, угнетение функции ферментных систем и др. В практике применяют полную и неполную стерилизацию. При полной стерилизации уничтожаются вегетативные и споровые формы микроорганизмов, при неполной (частичной) —только вегетативные формы бактерий и вирусы, но с сохранением споровых форм бацилл. При этом обеспечиваются условия, предотвращающие развитие спор (резкое охлаждение). Физические методы стерилизации. Прокаливание (фламбирование). На огне пламени горелки (газовой или спиртовой) стерилизуют бактериологические петли, пастеровские пипетки, стекла, инструменты (пипетки, иглы и др.). Стерилизация сухим жаром. Стерилизация сухим нагретым воздухом осуществляется в специальном сушильном металлическом шкафу с двойными стенками (печь Пастера). Снаружи шкаф облицован теплонепроницаемым материалом. В верхней части вмонтирован термометр. Между теплонепроницаемой обшивкой и внутренним металлическим шкафом на дне находится автоматический электронагревательный элемент. Внутри шкафа на металлических сетчатых полочках размещают стерилизуемый материал. В печи Пастера стерилизуют стеклянную чистую, хорошо промытую, предварительно высушенную посуду. Колбы закрывают ватными пробками, накрывают бумажными колпачками и завязывают. Пробирки, чашки Петри и пипетки завертывают в пергаментную бумагу. При включении шкафа в электросеть воздух внутри него нагревается. По достижении заданной температуры отмечают время начала стерилизации. Режимы стерилизации: температура 155...ШГС, экспозиция 2 ч; 165...170Х - 1...1,5ч; 180'С—1ч. По истечении времени стерилизации прибор отключают; когда температура'понижается примерно до 45 °С, тогда шкаф открывают. Воспламеняющиеся вещества, жидкости, питательные среды, резиновые предметы сухим жаром стерилизовать нельзя. Стерилизация влажным жаром. Кипячение — простой, доступный способ стерилизации в специальных металлических стерилизаторах (или другой чистой посуде). Кипячением стерилизуют иглы, шприцы, пинцеты, ножницы, скальпели и другие инструменты, резиновые и стеклянные предметы, которые раскладывают в стерилизаторах на металлические решетчатые вставки, покрытые 2...3 слоями марли или тонком слоем гигроскопической ваты. Шприцы стерилизуют в разборном состоянии,  Рис. 27. Текучепаровой аппарат Коха: /— паровой котел; 2— крышка; 3 — электронагревательный блок в иглы вставляют мандрены; режущие инструменты—лезвия скальпелей, ножниц следует обертывать марлей или ватой. В стерилизатор наливают воду (желательно дистиллированную), чтобы она полностью покрывала инструменты. Для лучшей стерилизации в воду добавляют 2 % гидрокарбоната натрия (двууглекислой соды). Кипятят в течение 20...25 мин. После стерилизации воду осторожно сливают; инструменты используют только после их охлаждения. Стерилизацию текучим паром проводят в аппарате Коха (текучепаровой аппарат) (рис. 27), который представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху неплотно закрытый крышкой с отверстием посредине для термометра. На дне аппарата имеется решетчатая подставка на ножках, до уровня которой наливают воду. На подставку помещают специальное металлическое ведерко также с дном в виде решетки. В это ведерко ставят стерилизуемые питательные среды в пробирках (или маленьких колбочках). Ведерко закрывают неплотно крышкой. При нагревании образующиеся водяные пары, устремляясь вверх, проходят через отверстия в подставке и дне ведерка, обволакивают стерилизуемые пробирки со средами и нагревают их. Стерилизуют в течение 30...40 мин. Учитывая, что однократная стерилизация данным способом уничтожает только вегетативные формы бактерий, а споры сохраняются, стерилизацию текучим паром осуществляют дробно — три дня подряд. После первой стерилизации материал постепенно остывает при комнатной температуре до следующего дня. Если в культурах имелись споры, они «прорастают» в вегетативную форму. В последующие дни стерилизацию текучим паром повторяют (полная дробная стерилизация). Таким способом часто стерилизуют питательные среды с углеводами, молоко, среды с желатиной, желчью, то есть субстраты, которые не выдерживают нагревания выше 100 °С, длительного действия пара или сухого жара. Тиндализация — дробная стерилизация в водяной бане при 56..,58 "С в течение 5...6 сут: в первый день прогревают в течение 2 ч, в последующие дни — по 1 ч. Метод был предложен Тиндалем для стерилизации материалов, разрушающихся (денатурирующихся) при нагревании до температуры выше 58...60 °С (коллоидные растворы, сыворотки крови, асцитная жидкость и другие белоксо-держащие вещества).Тиндализацию можно проводить в водяной бане с регулируемой температурой (рис. 28). Пастеризация— метод неполной стерилизации, предложенный Пастером с целью сохранения питательной ценности пищевого продукта (молоко, мясные, рыбные и овощные консервы), которая снижается при кипячении (разрушаются витамины и другие нестойкие к действию высокой температуры вещества). Продукт нагревают при 80 "С в течение 30 мин, затем резко охлаждают (до4...8°С). На крупных предприятиях (молокозаводах) применяют специальные пастеризаторы с охладительной системой. Пастеризацией достигается частичная стерилизация, так как убиваются вегетативные формы бактерий, а споры сохраняются. Резкое охлаждение препятствует «прорастанию» спор и последующему размножению бактерий. Стерилизация паром под давлением(автоклавирование)~ самый эффективный метод стерилизации (температура выше 100 X). Осуществляют его в специальном аппарате—автоклаве. Принцип стерилизации основан на том, что чистый насыщенный водяной пар при высоком давлении, конденсируясь, повышает температуру внутри котла (автоклава). Уменьшение объема пара после конденсации способствует проникновению его во внутрь стерилизуемого предмета.' Вертикальный автоклав (рис. 29, А) представляет собой цилиндрической формы двустенный металлический котел, сверху закрываемый герметично крышкой. Через специальный кран с воронкой между стенками заливают воду до определенного уровня. Внутренняя стенка котла в верхней части имеет отверстия, в нижней части котла — кран, через который при нагревании воды пар вытесняет воздух из котла автоклава. Сверху на автоклав надевают металлический защитный каркас, причем между ним и самим автоклавом должно быть свободное пространство. Автоклав нагревают электричеством. После загрузки автоклава крышку и кран, через который наливают воду, закрывают, нижний кран временно остается открытым. Нагреваемая вода между стенками автоклава к  ипит, образующийся пар поднимается вверхРис. 28. Электрическая водяная баня: I — корпус; 2 — термометр-регулятор; 3 — крышка; 4— панель управления и через верхние отверстия внутренней стенки проходит во внутрь котла, толчками вытесняя воздух через нижний открытый кран. Когда воздух весь вытеснится и пар начнет выходить ровной струей, нижний кран закрывают. В результате давление пара внутри автоклава повышается. Началом стерилизации считают момент достижения показания манометра заданной величины. Нагрев регулируют на протяжении всей стерилизации, поддерживая давление на одном уровне. При чрезмерном давлении в автоклаве предусмотрен предохранительный клапан, через который избыток пара выходит наружу. Современные автоклавы снабжены автоматическим устройством, регулирующим режим работы. При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве; так, при давлении 50,6 кПа температура будет 110...И2Х, При 101,ЗкПа — 120...I21, при 151,9кПа-124...126, при 202,6 кПа - 132...133 X. Манометры регистрируют давление пара без учета окружающего атмосферного давления {760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После охлаждения при нулевом показании манометра открывают ан для спуска пара. Крышку автоклава подают осторожно на себя, не заглядывая в котел, оберегая лицо от возможного воздействия остаточного пара. До полного выхода пара открывать крышку автоклава нельзя, так как при быстром падении давления внутри автоклава стерилизуемые жидкие среды закипают, пробки из пробирок выталкиваются вместе с жидкостью. В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие нагревание выше 100 °С, стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты, помещенные в металлические биксы. Кроме того, обеззараживают использованные бактериальные культуры, посуду. В этих случаях давление пара и экспозиция стерилизации продолжительнее (151,9кПа— 1 ч), чем при стерилизации чистого материала (50,6..Л01,ЗкПа — 30...40 мин). Для проверки качества работы автоклава, соответствия показаний манометра и температуры пара используют различные вещества (бензонафтол, антипирин, сера), имеющие определенную точку плавления. Небольшое количество данного вещества смешивают с таким же количеством краски (фуксин, метиленовая синь), помешают в пробирку, запаивают ее и устанавливают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. При должной температуре вещество-индикатор плавится и окрашивается в цвет использованного красителя. Рис. 29. (Внизу)Схема вертикального и горизонтального автоклава: /( — вертикальный автоклав: /—подставка; 2 — водомерная трубка; 3— воройка; 4—предохранительный клапан; 5— манометр; й— крышка; 7—винтовые зажимы; S— котел; 9— кожух; 10— камера стерилизации; // — водопарокая камера; /2 —паровыпускной клапан. Я —горизонтальный автоклав: У —постамент; 2 — нагревательный элемент; 3 — крышка котла; 4—предохранительный клапан; J—вентиль; 6— кожух; 7—паровая камера; 8— стерили-зационная камера; 9 — манометр паровой камеры; 10 — трехходовой кран; // — сифонная трубка паровой камеры; 12 — опорное кольцо; 13 — крышка паровой камеры; 14— штурвал; /5—впускной кран; /6—манометр котелка; 17— трехходовой кран котелка; 18— сифонная трубка котелка; 19— патрубок; 20— воронка; 21 — водоуказательная колонка; 22— котелок  При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве; так, при давлении 50,6 кПа температура будет 110...И2Х, При 101,ЗкПа — 120...I21, при 151,9кПа-124...126, при 202,6 кПа - 132...133 X. Манометры регистрируют давление пара без учета окружающего атмосферного давления {760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После охлаждения при нулевом показании манометра открывают кран для спуска пара. Крышку автоклава подают осторожно на себя, не заглядывая в котел, оберегая лицо от возможного воздействия остаточного пара. До полного выхода пара открывать крышку автоклава нельзя, так как при быстром падении давления внутри автоклава стерилизуемые жидкие среды закипают, пробки из пробирок выталкиваются вместе с жидкостью. В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие нагревание выше 100 °С, стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты, помещенные в металлические биксы. Кроме того, обеззараживают использованные бактериальные культуры, посуду. В этих случаях давление пара и экспозиция стерилизации продолжительнее (151,9кПа— 1 ч), чем при стерилизации чистого материала (50,6..Л01,ЗкПа — 30...40 мин). Для проверки качества работы автоклава, соответствия показаний манометра и температуры пара используют различные вещества (бензонафтол, антипирин, сера), имеющие определенную точку плавления. Небольшое количество данного вещества смешивают с таким же количеством краски (фуксин, метиленовая синь), помешают в пробирку, запаивают ее и устанавливают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. При должной температуре вещество-индикатор плавится и окрашивается в цвет использованного красителя. Устройство горизонтальных автоклавов конструктивно отличается от вертикальных, но принцип действия остается таким же. Стерилизация фильтрованием. Осуществляется пропусканием материала через бактериологические фильтры. Фильтрация связана не только с пропусканием или задержкой фильтром мельчайших частиц (бактерий) в зависимости от величины пор фильтрующей пластинки, но и с адсорбционной способностью материала, из которого сделан фильтр. Обычно фильтруют жидкости, не выдерживающие нагревания (сыворотки, растворы антибиотиков и др.). При фильтрации  Рис. 30. Фильтр Зейтца: / — стеклянная колба Бунэена; 2 — канюля для отсасывания воздуха; 3 — металлический держатель; 4 — фильтр ные пластины из смеси асбеста с целлюлозой. Отечественные асбестовые фильтры имеют марки Ф2 и СФ. Стерилизующими являются фильтры марки СФ. Мембранные (ультра-) фильтры (колло-дийные мембраны) имеют вид тончайших листков белой бумаги. Готовят их из геми-целлюлозы, обработанной соответствующими реактивами, температурой и прессованием. Эти фильтры различают по диаметру и величине пор. Используют их для фильтрации, концентрации частиц, содержащихся в фильтруемой жидкости, а также для определения величины вирусов. Стерильность полученных фильтратов проверяют посевом на питательные среды с последующим выдерживанием в термостате несколько дней. Стерилизация ультрафиолетовым излучением (УФИ). В лаборатории источником УФ-излучения обычно служат специальные бактерицидные лампы. УФ-облуче-ние используют для обеззараживания воздуха в помещениях (боксах, операционных). Бактерицидные лампы нашли также применение в торговле и пищевой промышленности при хранении различных продуктов при температуре выше 0 °С. Ультразвук. Используют определенную частоту как физический стерилизующий фактор, например для обеззараживания соды, стерилизации молока, некоторых консервированных продуктов, кожевенного сырья. Химические методы. Для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды непригодны. Их чаще используют для консервирования некоторых субстратов, так как они в бактерицидных концентрациях парализуют ферментативную способность бактерий. В некоторых случаях для стерилизации применяют биологические МЕТОДЫ. |
Похожие:
 |
Плюс Утверждены Министерством сельского хозяйства Российской Федерации... Казань, Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии, Дагестанского научно-исследовательского... |
|
Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора Казань, Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии, Дагестанского научно-исследовательского... |
 |
Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора Казань, Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии, Дагестанского научно-исследовательского... |
|
№4: «Детоксикационная терапия в ветеринарной медицине» Цель: Изучить отравления, наиболее часто встречающиеся в ветеринарной практике, и научится применять методы их детоксикации |
|
Бакалавра Работа выполнена на кафедре микробиологии спбгу научный... Выявление представителей рода Mycobacterium в аквариумной воде, находящейся в замкнутой системе очистки |
|
Отчёт по ветеринарно-санитарной экспертизе о прохождении производственной практики «Приложение». Глвсэ является подразделением Государственной ветеринарной службы и подчинена районной ветеринарной лаборатории, находящейся... |
|
Исследования в ветеринарной офтальмологии Шиотца и электронный аппланационный тонометр Tonopen; в российской ветеринарной практике наиболее часто применяют механический аппланационный... |
|
Инструкция №29/13-и по применению дезинфицирующего средства «хорт таблетки» «Республиканский центр гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья» (гу «рцгэиОЗ» мз республики Беларусь); Государственное учреждение... |
|
Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н. Э. Баумана часть 1 Казань 2015 Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и учащейся молодежи, посвященной 85-летию зоотехнического образования... |
|
Тезисы докладов 68 научно-практической конференции студентов, аспирантов... Печатается по решению Ученого совета факультета ветеринарной медицины и факультета биотехнологии и стандартизации фгбоу впо «Казанская... |
|
Практикум Федеральное агентство по образованию рв владивостокский государственный университет Практикум «Английский язык: Читаем и говорим по-английски. Часть 2» предназначен для студентов специальностей «Международные отношения»... |
|
Практикум Министерство образования и науки Российской Федерации Владивостокский... Практикум по дисциплине «Маркетинг» предназначен для проведения практических занятий и организации самостоятельной работы студенты... |
|
Практикум ю. А. Медведев Министерство образования и науки Российской... Информационные технологии в математике: Практикум / Владим гос пед ун-т. Владимир, 2005. 96 с |
|
Учебное пособие к лабораторным занятиям по фармацевтической химии... Методическое пособие «Анализ органических лекарственных веществ» предназначено для проведения лабораторно-практических занятий у... |
|
Римское право практикум Игнатенко А. В., Чорновол Е. П. Римское право: Учебное пособие. Практикум. Екатеринбург: Изд-во Уральской академии государственной... |
|
Е. В. Ежова практикум по уголовному праву Практикум по уголовному праву. Особенная часть: Учебное пособие для студентов заочного отделения. Уфа: риц башГУ, 2013. –81 с |