Клинико-функциональные и иммунологические особенности у больных с пролапсом митрального клапана при соединительнотканной дисплазии

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал исследования Для решения поставленных в работе задач обследовано 105 больных с пролапсом митрального клапана при соединительнотканной дисплазии, верифицированным клиническими, в том числе аускультативными, и эхокардиографическими данными. Основным критерием наличия ПМК являлось выявляемое при ультразвуковом исследовании сердца в парастернальной позиции по длинной его оси выбухание одной и/или обеих створок митрального клапана в полость левого предсердия во время систолы желудочков, превышающее 3 мм над уровнем митрального кольца. Причем, предпочтение отдавалось лицам со второй (6-9 мм) и третьей (более 9 мм) степенью пролабирования митрального клапана. Выделение основных групп исследования проводилось по степени ПМК, а также по наличию у больных иных МАС. Кроме того, всех обследованных разделили на группы по частоте заболеваемости ОРВИ в год и наличию в анамнезе хронических инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей и ЛОР-органов. Следует отметить, что все больные с сопутствующей хронической инфекционной патологией находились в стадии стойкой ремиссии. Среди обследованных лиц с ПМК было 80 мужчин и 25 женщин в возрасте от 16 лет до 32 лет (в среднем 21,78±5,7 лет). Всем наблюдаемым проводилось углубленное комплексное клиническое, инструментальное и лабораторное обследование, включавшее электрокардиографию, кардиоинтервалографию, эхокардиографию, холтеровское мониторирование ЭКГ. При этом особое внимание уделялось лабораторным иммунологическим исследованиям и впервые выполненному у этих больных методу оценки эндогенного ауторозеткообразования. Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц, среди которых было 14 мужчин и 6 женщин в возрасте от 16 до 20 лет (в среднем 17,8±1,3 года). 2.2. Методы исследования 2.2.1. Методика электрокардиографического исследования Электрокардиографическое исследование проводилось по общепринятой методике на электрокардиографе ЭК1Т – 03М2 в 12 общепринятых отведениях при калибровке записи в 1 мВ = 1 см и скорости записи 50 мм/сек. 2.2.2. Методика изучения состояния вегетативной нервной системы Оценка состояния вегетативного статуса у лиц с ПМК при соединительнотканной дисплазии проводилась с использованием методики вариационной пульсометрии. Метод регистрации кардиоинтервалограммы (КИГ) позволил изучить следующие статистические параметры сердечного ритма: Мода (Мо, с) – наиболее часто встречающееся в динамическом ряду значение RR; Амплитуда моды (АМо, %) – количество кардиоинтервалов (в %), соответствующих значению моды; определяется по отношению к общему числу зарегистрированных интервалов RR (в с) и отражает степень стабилизирующего влияния центральных механизмов регуляции сердечного ритма через симпатический отдел вегетативной нервной системы; Вариационный размах (ВР, с) – разность между максимальным и минимальным значениями RR, отражает степень синусовой аритмии и границы распределения интервалов RR; Индекс вегетативного равновесия (ИВР, у.е.) – указывает на соотношение между активностью симпатического и парасимпатического отделов. Вегетативный показатель ритма (ВПР) – позволяет судить о вегетативном балансе с точки зрения оценки активности автономного контура регуляции и преобладания парасимпатической активности. Чем выше автономная активность, т.е. меньше величина ВПР, тем в большей мере вегетативный баланс смещен в сторону преобладания парасимпатической регуляции. Показатель адекватности процессов регуляции (ПАПР) – комплексная величина оценки ВСР, позволяющая дифференцировать различные степени напряжения регуляторных систем и оценивать адаптационные возможности организма. Индекс напряжения регуляторных систем (ИН, индекс Баевского, у.е.) – интегральный показатель, отражающий напряженность регуляторных систем организма и степень централизации управления сердечным ритмом с учетом соотношения активности симпатической, парасимпатической и гуморальной регуляции. При проведении временного анализа КИГ использовались следующие показатели: Стандартное отклонение усредненных интервалов RR (SDNN) – отражает суммарный эффект воздействия на синусовый узел симпатических и парасимпатических влияний. Увеличение значений SDNN свидетельствует об усилении симпатического влияния. Показатель межинтервальных различий (rMSSD) – оценивает межинтервальные различия. Чем выше rMSSD, тем активнее звено парасимпатической регуляции. Процент случаев, в которых разница между длительностью последовательных NN интервалов превышает 50 мс, от общего количества последовательных пар интервалов NN (pNN50) – отражает частоту появления быстрых изменений ритма, характерных для преобладания парасимпатических влияний. С целью проведения спектрального анализа сердечного ритма учитывались показатели: 1. Мощность спектра низкочастотного компонента вариабельности в диапазоне 0,04-0,15 Гц (LF, мс2) – показатель абсолютного уровня активности сосудо-двигательного центра и с преобладанием преимущественно симпатической регуляции. 2. Мощность спектра высокочастотного компонента вариабельности в диапазоне 0,15-0,40 Гц (HF, мс2) – показатель абсолютной активности парасимпатического звена регуляции. 3. Отношение низкочастотной к высокочастотной составляющей в абсолютных единицах (LF/HF) – отражает баланс симпатического и парасимпатического отделов регуляции (в норме – менее 0,5). Перечисленные показатели КИГ позволили оценить нейрогуморальные механизмы регуляции сердечного ритма у обследованных лиц. 2.2.3. Методика ультразвукового исследования сердца Эхокардиографическое исследование сердца проводилось по общепринятой методике в положении больного лежа на спине в М и В-режимах с использованием доплеровского исследования. Применяемый датчик (3 МГц) помещался у левого края грудины в III-IV межреберье. При этом определялись следующие эхокардиографические параметры: Конечный диастолический размер полости левого желудочка (КДР, мм), измерявшийся от эндокардиальной поверхности задней стенки до эндокардиальной поверхности межжелудочковой перегородки под створками митрального клапана. Конечный систолический размер полости левого желудочка (КСР, мм), измерявшийся от эндокардиальной поверхности задней стенки в период ее систолического сокращения до межжелудочковой перегородки. Диастолическая толщина межжелудочковой перегородки (ТМЖП, мм), измерявшаяся между ее левой и правой поверхностями в диастолическом периоде сердечного цикла. Диастолическая толщина задней стенки левого желудочка (ТЗС, мм), измерявшаяся под створками митрального клапана от наружного слоя миокарда до внутреннего слоя эндокарда. При этом рассчитывались следующие производные параметры: Процент укорочения передне-заднего размера полости левого желудочка в систолу (фракция укорочения, ФУ,%) по формуле: ФУ=(КДР-КСР)/КДР×100% Скорость циркулярного укорочения миокардиальных волокон (Ycf, сек) по формуле: Ycf=(КДР-КСР)/(КДР×Т1), где Т1 – период изгнания крови из левого желудочка (сек.) Конечный диастолический объем полости левого желудочка (КДО, см3) по формуле L. Teichholz et al. (1972): КДО=(7/(2,4+КДР))×КДР3 Конечный систолический объем полости левого желудочка (КСО, см3) по формуле: КСО=(7/(2,4+КСР))×КСР3 Ударный объем (УО, см3) по формуле: УО=КДО – КСО Фракция выброса (ФВ, %) по формуле: ФВ=УО/КДО Масса миокарда левого желудочка (ММЛЖ, г) рассчитывали по формуле Американской ассоциации эхокардиографии в модификации Devereux R. (1986): ММЛЖ=0,8×(1,04×[(КДР+ТМЖП+ТЗСЛЖ)3 – КДР3]+0,6) Объем миокарда левого желудочка (ОМ, см3) по формуле: ОМ=1,0477×(КДР+ТЗС)3 – 1,047×КДР3 2.2.4. Методика проведения суточного мониторирования ЭКГ Холтеровское мониторирование ЭКГ осуществлялось с помощью аппарата «Кардиотехника-04-3» фирмы «Инкарт», г. Санкт-Петербург в течение суток. Запись ЭКГ производилась на электронную память кардиомонитора в течение 24 часов с последующим ее анализом. При проведении суточного ЭКГ-мониторирования оценивались следующие параметры: Средняя частота сердечных сокращений днем. Средняя частота сердечных сокращений ночью. Средняя частота сердечных сокращений при физической нагрузке. Количество фрагментов изменений сегмента ST ишемического и функционального характера. Число выпадений комплексов QRS за счет миграции водителя ритма или атриовентрикулярных блокад в среднем количестве за один час днем, в ночное время суток и во время физического напряжения. Количество наджелудочковых экстрасистол в среднем за час, днем, ночью и при физической нагрузке. Количество одиночных и групповых желудочковых экстрасистол в среднем количестве за один час днем, ночью и при физической нагрузке. Количество эктопических ритмов в течение часа и суток. Количество эпизодов тахикардий за час и сутки. Количество преходящих нарушений внутрисердечной проводимости в течение суток и их характер. 2.2.5. Клинический анализ крови Для подсчета форменных элементов крови использовали автоматический гематологический анализатор «Cobas Micros-18 ОТ» (Hoffman-La Roche, ABX). С помощью счетчика «Cobas Micros-18 ОТ» измеряли количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, концентрацию гемоглобина и другие стандартные показатели. Лейкоцитарную формулу подсчитывали на 100 лейкоцитов с использованием метода световой микроскопии. 2.2.6. Метод световой микроскопии Подсчет эндогенных ауторозеток в периферической крови проводили с помощью световой микроскопии (микроскоп «БИОЛАМ», ув. 7х90). У всех обследованных процесс внутрисосудистого ауторозеткообразования оценивался согласно методике Д.И. Бельченко, разработанной и предложенной в 1991 г. Забор капиллярной крови осуществлялся утром, натощак из 4-го пальца левой кисти с помощью игл-скарификаторов при комнатной температуре. Самотеком из безымянного пальца кровь забирали в капилляр, каплю крови наносили на край стекла. Мазок производили шлифованным стеклом под углом 450(на предметном стекле оставался ровный тонкий след, заканчивающийся в виде «усов») и высушивали при комнатной температуре. Фиксация мазков проводилась в смеси Никифорова, состоящей из равных частей этилового спирта 96% и эфира в течение 30 минут. Окраска мазков проводилась по Романовскому-Гимзе. Рабочий раствор краски готовили из расчета ½ - 2 капли готовой краски на 1 мл дистиллированной воды. Окрашивание проводили в течение 30 – 35 минут, после чего мазки промывали и высушивали на воздухе. Подсчет ауторозеток (на 200 лейкоцитов) производили в окрашенных мазках в самом тонком месте, ближе к концу мазка. За ауторозетку принимали клеточную ассоциацию, образованную нейтрофилом (микрофото 1) или моноцитом (микрофото 2) с плотно прилегающими к их поверхности тремя и более эритроцитами. Микрофото 1. Нейтрофильная ауторозетка без лизиса эритроцитов. Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув. х 100. Микрофото 2. Моноцитарная ауторозетка без лизиса эритроцитов. Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув. х 100. Учитывали ауторозетки с экзоцитарным лизисом, представляющим собой деструкцию мембраны эритроцитов и появление в них участков цитоплазмы, лишенной гемоглобина (микрофото 3). Деструкция эритроцитов наблюдалась в местах наиболее плотного контакта с розеткообразующим лейкоцитом. Микрофото 3. Нейтрофильная ауторозетка с лизисом эритроцитов. Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув. х 100. Микрофотографирование мазков крови осуществлялось с помощью цифрового компьютерного микрофотографирования через лабораторный микроскоп «БИОЛАМ С-11» с цифровой насадкой (ув.х100). Подсчет ауторозеток проводили в абсолютном количестве (109/л) и в процентах на 100 лейкоцитов (методика Д.И. Бельченко). Количество розеткообразующих клеток подсчитывали от общего числа лейкоцитов, число розеткообразующих нейтрофилов и моноцитов от их общего числа (109/л и в %). 2.2.7. Определение сывороточного уровня показателей иммунологического статуса Определение концентраций иммуноглобулинов А, М, G (IgA, IgM, IgG) в сыворотке крови выполняли методом иммуноферментного анализа (ИФА), используя тест-системы «IgA общий - ИФА – БЕСТ»,  «IgM - ИФА – БЕСТ» и «IgG общий - ИФА – БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) соответственно. Принцип теста состоит в том, что молекулы иммуноглобулинов связываются со специфичными антителами, сорбированными на поверхности лунок микропланшета. Такие же специфичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена связываются с молекулами иммуноглобулинов, захваченными первыми антителами, образуя «сэндвич»-комплекс. Субстратный раствор, содержащий тетраметилбензидин, добавляемый на следующем этапе, вызывает развитие голубого окрашивания. Ферментативную реакцию останавливают внесением стоп-раствора (серной кислоты), при этом цвет раствора меняется на желтый. Интенсивность окрашивания (оптическая плотность) реакционной смеси в лунках измеряется с помощью микропланшетного мультидетектора «Zenith 1100» (Anthos, Австрия) при длине волны 450 нм и прямо пропорциональна содержанию иммуноглобулинов в образце. Концентрацию иммуноглобулинов в образцах выражали в граммах на литр (г/л). Количественное определение интерлейкина-6 (ЛИ-6) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) в плазме крови проводили аналогично по описанному способу с помощью «сэндвич»-методики ИФА, используя набор реактивов производства Bender MedSystems® (Австрия) для определения интерлейкинов, концентрацию которых выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Исследование концентрации аутоантител к коллагенам I типа в сыворотке крови производили методом ИФА с использованием набора реактивов «Имтек» (Россия). Концентрацию аутоантител в образцах выражали в нг/мл. Определение CD-маркеров иммунокомпетентных клеток осуществлялось с помощью методики иммунофенотипирования лимфоцитов. В венозной крови, стабилизированной антикоагулянтом К3ЭДТА (этилендиаминтетраацетата калиевая соль), определяли относительное и абсолютное количество лимфоцитов, экспрессирующих CD19-, CD16-, CD3-, CD4-, CD8-антигены. Относительное количество каждой популяции клеток выражали в процентах от всех лимфоцитов, абсолютное  в ×1012 клеток/л. Процедуру иммунофенотипирования проводили по двухплатформенной безотмывочной технологии. Окрашивание лимфоцитов выполняли меченными моноклональными антителами («IOTest», Beckman Coulter, Inc.), специфичными к CD19-, CD16-, CD3-, CD4-, CD8-антигенам. Этапы фиксации и лизиса проводили с помощью набора «Partec CyLyse®Erythrocyte Lysing» (Partec GmbH, Германия). Определение относительного количества популяций лимфоцитов, несущих CD-антигены выполняли на проточном цитофлюориметре «Partec CyFlow SL®» (Partec GmbH, Германия). Лимфоцитарный гейт выделяли по физическим параметрам светорассеяния прямому  (FSC, Forward Scatter) и боковому (SSC, Side Scatter). Абсолютное число клеток каждой популяции рассчитывали, исходя из результатов определения общего количества лимфоцитов с помощью автоматического гематологического анализатора «Micros ES60» (Horiba ABX, Франция). Иммунорегуляторный индекс рассчитывали как частное относительных значений CD4+- и CD8+ клеток. 2.2.8. Методы статистического анализа Результаты исследования обработаны методами вариационной статистики с помощью специализированной компьютерной программы на базе «Microsoft Excel 06» и «Statistica 6.0». Для проверки данных, представленных в диссертационной работе, были использованы параметрические и непараметрические методы математической статистики. Для оценки статистической значимости различий двух групп по каким-либо параметрам при нормальном распределении признака использовался t-критерий Стьюдента. В случае отличия распределения признаков от нормального применялся критерий Манна-Уитни. Взаимосвязь между количественными признаками с нормальным распределением оценивалась с помощью коэффициента корреляции Пирсона. При распределении, отличающемся от нормального – путем расчета рангового коэффициента корреляции Спирмена. В работе приводились описательные статистики: среднее значение (М), стандартное отклонение (SD), доверительный интервал (ДИ).

Похожие:

	Распространенность, патогенетические механизмы и особенности ведения...		Дипломная работа на тему: Клинико-функциональные особенности гибернирующего... Клинико-функциональные особенности гибернирующего миокарда у больных кардиоренальным синдромом 2 типа
	Клинико-патогенетические особенности различных видов антисекреторной... Клинико-патогенетические особенности различных видов антисекреторной терапии у больных кислотозависимыми заболеваниями тема диссертации...		Клинико-иммунологические особенности ответа пациентов с аллергической... Работа выполнена в Учреждении рамн научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения рамн
	Послеродовой период клинико-иммунологические критерии и профилактика...		Атопический дерматит взрослых: клинико-иммунологические показатели... Работа выполнена в гоу впо «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному...
	Клинико-неврологические и нейропсихологические особенности ишемической... Работа выполнена в гоу впо «Российский государственный медицинский университет Росздрава»		Ооо «Ар-Сервис» предоставляет 3-х летнюю гарантию на предохранительный... При выходе клапана из строя покупатель обязан согласовывать свои действия (демонтаж предохранительного клапана и т п.) с продавцом....
	Клинико-диагностическое значение определения антител к тироксину... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		«Внебольничные пневмонии у больных раком легкого при проведении специфической...
	Клинико-лабораторные особенности и лечение воспалительных заболеваний... Клинико-лабораторные особенности и лечение воспалительных заболеваний пародонта у пациентов		Клинико-иммунологические критерии раннего прогнозирования рецидивов... Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ставропольская государственная...
	Подпись На тему: клинико – функциональная характеристика ремиссии у больных с первым эпизодом шизофрении		Оценка нутритивного статуса при хроническом панкреатите Iii. Оценка нутритивного статуса у больных хроническим панкреатитом по клинико-инструментальным данным на амбулаторном и стационарном...
	Нарушения мозгового кровообращения при опухолях головного мозга Клинико-диагностические особенности с кровоизлиянием в опухоль головного мозга в зависимости от её гистологической структуры 55		Современные подходы к химиотерапии больных туберкулезом легких и... Современные подходы к химиотерапии больных туберкулезом легких и возможности повышения эффективности лечения (клинико-экспериментальное...