Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии

Скачать 7.28 Mb.

Название	Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии
страница	8/46
Тип	Документы

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы

1 ... 4 5 6 7 8 9 10 11 ... 46

БОЛЕЗНИ

1. АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ГУСЕЙ И УТОК

Аденовирусная инфекция гусей и уток – малоизученная инфекция, характеризующаяся персистенцией вируса, истончением скорлупы, уменьшением массы яиц.

Историческая справка. Инфекция, вероятно, распространена повсеместно. Аденовирусы уток и гусей выделены во многих странах Америки, Азии и Европы. Например, в Венгрии от мускусных уток выявлен вирус, который активно размножался в клетках фибробластов эмбрионов данного вида птиц. В последние 20 лет изолировали аденовирусы от гусят 1-7-суточного возраста (D119/6, D132/2, D137/1-3, D137/6 и 7, D156, D171/2, Р27, Р29 и др.), которые удачно репродуцировали в культуре клеток гепатоцитов эмбрионов гусей (1, 3, 10, 13, 16). В недалёком прошлом (до 90-х годов ХХ века) считали, что водоплавающие болеют только синдромом снижения яйценоскости (ССЯ) кур. Тесты по выявлению специфических антител постоянно показывали контакт птицы с возбудителем ССЯ и наличие его в организме водоплавающих. У уток пекинской породы, разводимых в России и Венгрии (1999-2002 гг.) сотрудниками ВНИИЗЖ, были выявлены в высоких титрах задерживающие гемагглютинацию антитела против аденовируса ССЯ штамма В8/87 ( Рисунок 3).

Экономический ущерб. Не изучен.

Возбудитель. Аденовирус. Аденовирусы, выделенные у птиц, в настоящее время отнесены к трём различным родам (Aviadeno-, Atadeno-, Siadenovirus) семейства Adenoviridae. од Aviadenovirus включает аденовирусы уток, которые, вероятно, эволюционировали совместно с птицами. Два других рода представлены по одному вирусу, выделенному у кур (ССЯ) и индеек (THE). Они филогенетически отличаются от авиаденовирусов и предположительно появились у птиц как следствие недавней смены хозяина.

В настоящее время род Aviadenovirus включает 12 серотипов кур (FAdV – 1 - 8a, 8b - 11), 2 серотипа индеек (TАdV – 1-2), 3 серотипа гусей (GoAdV – 1-3). Кроме этого дополнительно определёны по одному серотипу мускусных уток (DAdV – 1) и одному – голубей (PiAdV – 1). Они обладают общим антигеном, специфическим для рода. FAdV разделены на 5 видов, что подтверждается филогенетическими подсчётами, в основе которых лежат частичные последовательности гена гексона.

ПЦР DAdV-2 и шести изолятов GoAdV (P29, D119/6, D137/1, D137/2, D137/6, D156) была успешной с одной, как минимум, парой праймеров. Последовательность фрагмента гена гексона в 800 пар оснований изолята D119/6 и D137/2 была идентичной, однако другие изоляты демонстрировали большую изменчивость. Филогенетическое древо содержит по одному представителю всех серотипов кур (FAdV) и изолят, выделенный у индеек (TAdV D90/2), как членов рода Aviadenovirus. Для лучшей ориентации были включены члены двух других родов - ССЯ из рода Atadenovirus и вирус геморрагического энтерита индеек (THE) из рода Siadenovirus. Изоляты, выделенные у водоплавающей птицы, составляют ветвь, явно отдельную от аденовирусов, выделенных у кур.

Рисунок 2 Филогенетическое расположение авиаденовирусов уток и гусей (отряд Anseriformes – гусинообразных)

Обозначения:

OAV287 – изолят аденовируса, выделенный у овец;

FrAdV-1 – изолят аденовируса типа 1, выделенный у лягушки;

Anseriformes – гусинообразные;

Galliformes – куринообразные.
В морфологическом отношении аденовирус уток близок к другим аденовирусам семейства и представляет собой изометрические частицы диаметром 70-90 нм с икосаэдрической симметрией, состоящие из 252 капсомеров. 12 капсомеров, находящиеся на вершине икосаэдров, несущий два отростка (фибера) длиной 10-37 нм и толщиной 2 нм. Размер сердцевины вириона составляет 58-60 нм. Она содержит инфекционную ДНК и два белка. ДНК линейная, двухспиральная, в составе капсида 12 структурных белков. У вируса плотность вирионов в CsCl 1,32-1,35 г/см³, коэффициент седиментации 560 S, молекулярная масса (170-176)х10 млн. D. Он лишен липопротеидной оболочки и устойчив к липидным растворителям (хлороформу, эфиру и др.). Максимальная устойчивость вируса в изотоническом растворе колеблется в пределах pH 6-9. Термостабилен: сохраняет инфекционную активность при 56^оС в течение 60 минут, однако разрушается за 30 минут при 80^оС в присутствии одновалентных катионов. После воздействия радиации инфекционная активность возбудителя утрачивается более быстро, чем гемагглютинирующая [18].

Фомина Н.В. (1995) уточняет, что все аденовирусы птиц обладают эпителиотропностью; сначала вызывают изменения в культурах эпителиальных клеток, а затем в фибробластах КЭ. Вирус в первично трипсинизированной культуре фибробластов КЭ индуцирует образование внутриядерных включений, выявляемых с помощью ЭМ или метода МФА. Клетки монослойных культур УЭ и индеек тоже чувствительны к аденовирусам. Фомина Н.В. (1995) сообщает, что Sharpless G.R. (1962) установил способность вируса поддерживаться в этих культурах длительное время. Аденовирус при дегенерации клеток культур на шестые сутки после заражения не освобождается от них полностью, а в культуральной жидкости его относительное содержание составляет около 6% [8].

В период с 1999 по 2002 годы во ВНИИЗЖ (Россия) Князевым В.П. были проведены тесты по выявлению специфических задерживающих гемагглютинацию антител против аденовируса штамма В 8/78 ССЯ-76 в сыворотках крови уток различных пород 4 птицефабрик России и Венгрии. Результаты РЗГА, где были применены 4 ГАЕ вируса и двукратные разведения сывороток, представлены на рисунке 3. Тесты проводились с целью выявления маркеров биологических агентов в УЭ, используемых для приготовления ВСМ при разработке вирусвакцины против ВГУ. Подобным тестам были подвергнуты желтки эмбрионов и сыворотки крови цесарок (Россия).

Рисунок 3 Динамика накопления задерживающих гемагглютинацию антител к аденовирусу штамма В 8/78 в сыворотках крови уток птицефабрик «Малая Дубна», «Новооскольская», ДППЗ «Благоварский» (Россия) и “Animal Farm Ltd.,” Dushok, (Венгрия) (1999-2002 гг.)
Обозначения:

Линии: - м - - п/ф «Малая Дубна», пекинская порода;

- в - -«Animal Farm Ltd.», Dushok, пекинская порода;

- б-м - - ДППЗ «Благоварская», мускусная порода;

- б-п - - ДППЗ «Благоварская», пекинская порода;

- б-ц - -ДППЗ «Благоварская», цветная башкирская порода;

- н-о - - п/ф «Новооскольская», пекинская порода.

Результаты РЗГА, отражённые на рисунке 3, показали, что утки пекинской, мускусной и цветной башкирской пород обладают антителами к куриному аденовирусу штамма В8/78 – от 20 до 50% общего поголовья конкретной возрастной группы. Исследования, проведённые в течение четырёх лет, удостоверили в повозрастной тенденции роста концентрации антител; до 3-месячного возраста титр находился в пределах от 1:4 до 1:32, тогда как в 150-360-суточном возрасте – от 1:512 до 1:1024, независимо от породы и местонахождения птицефабрики. Вероятно, это связано со снижением количества вируса в организме птицы в 20-40-суточном возрасте.

Примечание: обнаружение САТ в крови невакцинированных кур в титре 1:16 и выше, свидетельствует о циркуляции полевого возбудителя ССЯ – 76 и неблагополучии куриного (не утиного) хозяйства.

Эпизоотологические данные. За последнее время результаты серологических тестов и ПЦР-исследований показали вероятность постоянного возникновения аденовирусной инфекции не только у уток и гусей, но и перепелов, филинов и лебедей. В крови уток, лебедей и гусей обнаружены специфические антитела к соответствующим аденовирусам и изменения скорлупы яиц. К инфекции восприимчивы молодые индейки, из которых особи-реконвалесценты обладают антителами, ингибирующими гемагглютинацию вируса.

Резервуаром возбудителя является домашняя и дикая птица. Вирус способен длительное время персистировать в организме молодых особей, восстанавливать исходную инфекционную активность в период половой зрелости у несушек и контаминировать окружающую среду. Выделяется возбудитель болезни с фекалиями, секретами носовой и ротовой полостей; вероятно, присутствуют алиментарный и аэрогенный пути заражения.

В настоящее время вирусы птиц отнесены к 3 родам, один из них – возбудитель ССЯ-76, отнесён в отдельный – Atadenovirus.

На основании его морфологии, стратегии репликации генома и химического состава вириона он классифицирован как аденовирус. Попытки выявить у вируса ССЯ-76 группоспецифический для всех аденовирусов птиц антиген с использованием реакции иммунодиффузии, реакции иммунофлуоресценции и реакции нейтрализации не были успешными. Все известные штаммы вируса ССЯ-76 относятся к одному серотипу. Однако с использованием рестрикционного анализа генома установлены три генотипа вируса ССЯ-76. Разделение на генотипы согласуется с географическим распределением исследованных штаммов. Так первый генотип охватывает штаммы, выделенные от кур различных пород в Европе. Другой включает штаммы, выделенные от уток в Англии, и третий – штаммы, выделенные от кур с признаками ССЯ-76 в Австралии. Информация о патогенезе, вызываемом вирусом ССЯ-76 у водоплавающих птиц, является скудной, однако, имеющиеся сведения позволяют сделать вывод о том, что водоплавающие птицы тоже являются естественными хозяевами данного вируса. Исследования водоплавающих птиц, отловленных на Атлантических путях перелета в США, позволили выявить антитела к вирусу ССЯ-76 у различных видов уток (Ojamaicensis, Aythya collaris, Bucephala albeola, Aix sponsa, Aythya affinis, Anas platyrhynchos, Anas clypeata, Anas strepera, Mergus merganser). Антитела к вирусу выявляли у лысух (Fulica spp.), поганок, канадских гусей (Branta canadansis), чаек и других видов птиц (2, 4, 7, 9, 10, 14, 15, 18, 23).

Bouquet J.F. et al. (1982) изолировали аденовирус от мускусных уток и установили его 1 серотип [10]. Kruse W. et al. (1988) в Германии методами РЗГА и РН выявляли САТ в сыворотке крови гусей к вирусу ССЯ-76 и аденовирусу серотипов 1, 2 и 3.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период не определен. Течение инфекции длительное - до 6 и более недель. Наиболее характерными признаками являются наличие тонкой скорлупы, изменение физического состояния (помутнение и водянистость белка) содержимого яиц, снижение их выводимости и жизнеспособности молодняка. Отмечают взъерошенность оперения, состояние прострации, ограниченный прием корма, диарею и задержку роста.

Аденовирусная инфекция водоплавающих – болезнь латентная, не проявляющаяся в острой форме, что заметно отличает её от ССЯ кур.

При экспериментальном воспроизведении ССЯ инкубационный период составляет около 48 часов. После введения аденовируса в вену или брюшную полость у подопытных цыплят развивается диарея и гибель с летальностью до 60% в последующие 7-14 суток, тогда как у утят и уток этого не отмечают. У взрослых кур-несушек в течение 18-25 суток наблюдают кладку маловесных с мягкой скорлупой (в 49-87% случаев) или бесскорлупных (до 39%) яиц. К 5-6-недельному сроку наблюдений происходит восстановление яйцекладки.

Патогенез. Не изучен.

Патологоанатомические изменения. В естественных условиях у домашних и диких уток и гусей изменения не описаны, тогда как у других видов птиц они многообразны. Более постоянными считают атрофию яичников и сумки Фабрициуса, катаральный энтерит и гастрит, кровоизлияния в паренхиме печени и мышц, а также эрозии в зобе птицы 28-35-недельного возраста. На поверхности кожи редко обнаруживают гангренозный дерматит.

При экспериментальной инфекции утята и утки болеют без заметных аномалий во внутренних органах и летального исхода.

Парентеральное введение цыплятам “утиного” вируса – возбудителя ССЯ, в зависимости от его патогенности, может вызывать клиническое проявление болезни и их гибель. Чаще отмечают эрозии на слизистой оболочке зоба, обширные кровоизлияния в тканях печени, почек, миокарде, железистого желудка и двенадцатиперстной кишки.

В Японии (1988) проведены гистологические исследования по обнаружению изменений у голубей, погибших от аденовирусной инфекции. Выявлены базофильные и/или эозинофильные тельца-включения в клетках гепатоцитов, в эпителии мочевых канальцев и тонкого кишечника. Аденовирус, выделенный из печени, не вызывал ЦПД в культуре клеток фибробластов и изменения в хориоаллантоисной оболочке КЭ (1, 3, 5, 9).

Диагноз и дифференциальная диагностика. Постановка диагноза на аденовирусную инфекцию основывается на результатах изучения эпизоотологических данных и проведения лабораторных исследований.

Для вирусовыделения используют пробы крови (желательно лейкоцитов), носоглоточных смывов, соскобов с коньюнктивы и фекалий больных особей. От павших птиц отбирают измененные участки носовых перегородок, легких, трахеи, лимфоузлов, печени, кишечника и яйцевода. Из проб органов готовят 10-20% суспензии, обрабатывают их антибиотиками (пенициллином 10000-20000 ЕД/мл и стрептомицином 200-250 мкг/мл), осветляют при 600-800 g в течение 15-20 минут и используют для подкожного введения односуточным утятам, гусятам и цыплятам. Срок наблюдения до 5 недель. Следует иметь в виду, что наиболее высокую концентрацию аденовируса - возбудителя ССЯ, отмечают в содержимом кишечника и клоаки (в течение 12 суток), селезенке и почках (10 суток), фекалиях, легких, трахее и печени – 6-7 дней после заражения.

Оптимальный вариант вирусовыделения - заражение 8-10-суточных УЭ в аллантоисную полость, а также первичных культур фибробластов или гепатоцитов УЭ. Через 7-10 дней после заражения в аллантоисной жидкости инфекционный титр вируса может достигать 3-5 lg ЭЛД₅₀/см³, а гемагглютинирующий — 10-16 лог₂, тогда как в культуральных материалах - 4-5 lg ТЦД₅₀ и 9-10 лог₂, соответственно.

КЭ после инфицирования в желточный мешок заметно отстают в росте. Выводимость цыплят резко снижается. Результаты исследований показали, что КЭ менее чувствительны к заболеванию в сравнении с утиными. Поэтому для пассирования целесообразно использовать УЭ.

Для обнаружения вирусов кур и уток, а также их антигенов и генома применяют МФА, РН, РГА, ПЦР и РДП. Методом прямой МФА вирусный антиген может быть выявлен в культуре клеток фибробластов УЭ через 12-24 часа после заражения (2, 6, 14, 21, 23).

РН ставят с УЭ, культур клеток гепатоцитов, почки или фибробластов эмбрионов уток.

Для идентификации выделенного агента РЗГА ставят с 4 ГАЕ вируса, 1%-й взвесью эритроцитов кур на ЗФР pH 7,2-7,4, нормальной и специфической сыворотками.

Ретроспективную диагностику ССЯ кур проводят методами РН, РДП, РСК, РЗГА и ИФА. Отбирают пробы сывороток крови птиц в начале проявления симптомов болезни и через 2-3 недели у реконвалесцентов. Методами РЗГА и ИФА можно определить нарастание титра антител от нуля до 1:1024 и выше. Отмечено, что у домашних и диких уток довольно часто можно выявить только специфические антитела, тогда как у других видов: лебедей, голубей, фазанов, перепелов и гусей, при отсутствии антител наблюдают дополнительный признак - дефектность скорлупы яиц. Необходимо учитывать, что цыплята 2-3-недельного возраста, полученные из яиц кур-реконвалесцентов, содержат в крови антитела, выявляемые в РЗГА и ИФА.

В связи с тем, что комплементфиксирующий антиген определен общим для всех куриных штаммов аденовируса, РСК часто используют для диагностики болезни, выявления новых изолятов вируса и их типирования с помощью сывороток, полученных на морских свинках. Установлено совпадение результатов, полученных при использовании РСК и РДП (8).

Идентификация аденовируса, выделенного от уток и гусей, традиционно проводится методами количественной РН, ИФА, РЗГА и ПЦР.

Во ВНИИЗЖ (1997) разработаны методические указания по определению антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках птиц непрямым методом ИФА. Тест основан на взаимодействии антигена аденовируса с антителами исследуемой сыворотки крови с последующим выявлением специфического комплекса с помощью коньюгата антивидовых иммуноглобулинов, меченных пероксидазой хрена, наличие которого выявляется хромогенным субстратом. Метод используется для изучения иммунного фона поголовья. Птица считается иммунной, если у 80% кур титр антител составляет 1:800 и выше (авторы Дрыгин В.В., Волкова М.А., Мудрак Н.С. и др., ВНИИЗЖ) (8).

Во ВНИИЗЖ выпускают набор для диагностики ССЯ-76 в РЗГА на 250 проб и набор для диагностики ССЯ-76 иммуноферментным методом на 176 проб.

Волкова М.А. и др. (1977) провели сравнительную оценку непрямого метода ИФА и РЗГА для диагностики ССЯ кур, используя в качестве антигена вирус штамма В 8/78, репродуцированного в УЭ.

На полученный антиген вирусспецифическую контрольную сыворотку получали путём иммунизации СПФ-кур. Сенсибилизацию планшетов проводили концентратом антигена (1-5 мкг/см³) в 0,05 М карбонатно-бикарбонатном буфере рН 9,5-9,6. Авторы установили, что положительным тиром исследуемых сывороток необходимо считать разведения 1:200 в ИФА и 1:4 в РЗГА. Коэффициент корреляции выше 96%.

Возбудитель ССЯ постоянно выявляли в смежных России странах. Например, исследованиями, проведёнными на Украине в конце ХХ века, было подтверждено широкое распространение вируса ССЯ среди кур, не вакцинированных против данной инфекции. Титры антигемагглютинирующих антител в РЗГА составляли 1:256-512, а в ИФА – 1:800-1600 [1, 3, 8].

Фомина Н.В. (1995) сообщает, что Безрукавая И.Ю. и др. предлагают для выделения аденовирусов использовать пробы фрагментов яйцевода, яичников и кишечника с содержимым не позднее 2 часов после диагностического убоя птицы или хранения вируссодержащего диагностического материала при низких температурах. Для выделения вируса использовали культуру клеток утиных фибробластов УЭ, полученную от серонегативных по ССЯ уток, а также первичную культуру клеток почек куриных СПФ-эмбрионов, и проводили не менее трёх пассажей при ЭМ контроле.

При дифференциальной диагностике необходимо учитывать другие, невирусные, причины изменения цвета и толщины скорлупы. Например, изменение коричневого цвета скорлупы на белый происходит в течение 2 суток после приема корма с примесью никарбозина. Изменение толщины скорлупы зависит от дефицита кальция (до 3%) и витамина Д3 в корме, а также количественного показателя пестицидов внутри яйца.

Иммунитет. Не изучен. Утки и гуси как в естественных, так и в экспериментальных условиях, содержат в крови специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей, преципитирующей и антигемагглютинирующей активностью.

Утята до 2-недельного возраста, полученные от экспериментально вакцинированных уток, в 40-90% случаев содержат в сыворотке крови САТ к аденовирусу.

Лечение. Не проводится.

Профилактика и меры борьбы. При аденовирусной инфекции водоплавающих не определены. Для специфической профилактики ССЯ кур используют масляную эмульсионную формолвакцину из штаммов В 6/38, 127 или ВС-14 аденовируса, выращенных в эмбрионах уток (или культуре клеток). Вводят вакцину однократно внутримышечно или подкожно в объеме 0,5 мл (1000 ГАЕ), начиная с 18-недельного возраста. Через 14-21 сутки у птицы образуется иммунитет, показателем которого считают наличие антигемагглютинирующих антител. Максимальное накопление их выявляют через 30 дней после инъекции препарата. Затем уровень антител постепенно снижается и через 40-50 недель их не обнаруживают методом РЗГА.

В России препарат из штамма В 8/78 (производство ВНИИЗЖ) используют согласно "Временному наставлению по применению вакцины против ССЯ-76 жидкой сорбированной инактивированной" (Борисов В.В. и др., 1995).

1 ... 4 5 6 7 8 9 10 11 ... 46

	Оценка сортов и гибридов овощных культур для создания продуктов питания... Работа выполнена в гну «Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений им. И. В. Мичурина»...		Получение биодобавок для улучшения потребительских свойств дизельного топлива Работа выполнена в государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт использования техники и нефтепродуктов...
	Книга рассчитана на руководителей, специалистов хозяйств всех форм... Гну всероссийский научно-исследовательский институт зерновых культур имени И. Г. Калиненко		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Федеральное государственное унитарное предприятие всероссийский Фгуп «Всероссийский научно-исследовательский институт автоматики им. Н. Л. Духова»
	Формирование гельминтофауны, защита от гнуса и инвазионных болезней... Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и...		Паразитозы крупного рогатого скота в среднем, нижнем поволжье и новые... Фгоу впо «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (нгсха), в лаборатории иммунологии гну «Всероссийский научно-исследовательский...
	Федеральное государственное учреждение «всероссийский ордена \"знак... «всероссийский ордена "знак почета" научно-исследовательский институт противопожарной обороны»		Всероссийский научно-исследовательский институт
	Всероссийский научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники		Росгидромет Всероссийский научно-исследовательский институт гидрометеорологической информации

Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии

Похожие: