Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии

Скачать 7.28 Mb.

Название	Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии
страница	6/46
Тип	Документы

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 46

Согласованность проводимых измерений/тестов.

(капа - статистика)

При исследовании болезней дикой птицы важно знать о согласованности результатов стандартных тестов, разработанных ранее, и новых, применяемых при эпизоотологических, клинических, патологоанатомических, серологических и других биологических тестах.

Например: В районе «А», в апреле, популяция одного из видов уток составляла 1800 голов; после заболевания 180 и гибели из них 100, а также дальнейшего перелёта 1100 голов в смежный регион в мае осталось около 600, которые были тестированы на наличие антител, например, к ортомиксовирусу подтипа Н₅N₁. Были отобраны 60 проб сывороток крови и исследованы методами РН (стандартный), ИФА и РЗГА. Выборка (n) составила 10% (60 проб сывороток крови).

Таблица 7

Согласованность результатов серологических методов РН и ИФА при обнаружении специфических антител к ортомиксовирусу.

РН	Результат	РН		Всего	p	ИФА		Всего	р
	Результат	«+»	«-»	Всего	p	«+»	«-»	Всего	р
	«+»	10	5	15	0,25	12	3	15	0,25
	«-»	5	40	45	-	10	35	45	-
Всего		15	45	60	0,25	22	38	60	0,37

Примечание: РЗГА показана далее по тексту (решение 2).

Решение 1.

пункт I. Превалентность (p) РН– 15/60=0,25; p ИФА – 15/60=0,25

пункт II. (10+40)/60=0,83, (0,83*100=83%)

пункт III. 0,25*0,25=0,062, далее (1,0-p)

пункт IV. 0,75*0,75=0,562

пункт V. 0,062*0,562=0,034

пункт VI. 0,83-0,034=0,796

пункт VII. 1,0-0,034=0,966

пункт VIII. 0,796/0,966=0,82, т.е. капа-статистика оказалась выше умеренного уровня согласованности (0,41 – 0,60) и близка к абсолютной согласованности – 83% (пункт II).

Решение 2. РЗГА тоже представляется возможным определить на согласованность со стандартным методом(РН).

пункт I. Превалентность (p) РЗГА=22/60=0,37

пункт II. (12+35)/60=0,78, (0,78*100=78%)

следующие пункты (III - VIII) решения 2 показали капа - статистику – 0,77, что выше 0,60 – верхней границы умеренной согласованности.

Выводы. С учетом положительной превалентности тестов: РН – 0,25, МФА – 0,25 и РЗГА – 0,37 в первом случае оба теста (РН+МФА) оказались позитивными для 16,6% животных, во втором – 20% (РН+РЗГА). Таким образом, все методы в сочетании могут быть использованы для выявления антител, но не напряженности иммунитета, т.е. устойчивости популяции к реинфекции. Возможность повторного заболевания определяют в экспериментальных условиях, где можно выявить и определить:

- наличие специфических антител к возбудителю в градиенте времени, используя вышеуказанные серологические тесты;

- дозу возбудителя для инфицирования, заболевания, развития признаков болезни и (или) летальности (ИД₅₀ и ЛД₅₀);

- согласованность уровня антител и дозы возбудителя для конкретного вида птицы.

- оформление некоторых рекомендаций по контролю за болезнью.

Выявление субклинических болезней, определение эпизоотологических понятий (чувствительность и специфичность), а также перекрестной классификации птицы по состоянию здоровья (больных и здоровых) и результатам теста (положительным и ложноположительным) показаны в пункте 3.4. стр.162-200 в литературном источнике (4), где, используя матрицу формата 2х2 для диагностических исследований, можно провести расчеты и оценку параметров тестов: чувствительность, специфичность, истинную превалентность, мнимую превалентность, предсказательные значения отрицательного и положительного значений теста и отношения правдоподобия к ним, а также долю правильных прогнозов (абсолютную согласованность результатов). Данный раздел биометрических расчетов необходимо применять при использовании ЭМ, ПЦР, ИФА, РГА и других молекулярно-биологических тестов с высокой разрешающей способностью.
Метод матчинг (сравнения)

Предназначен для определения антигенного соответствия (показателя r₁) между производственными штаммами и эпизоотическими изолятами вируса (или, бактерий, грибов) с целью определения наиболее родственного производственного штамма для борьбы с болезнью, вызванной конкретным эпизоотическим изолятом, выделенным по факту.

1 этап: на все участвующие в серологических реакциях агенты необходимо получить СС и рассчитать дозы изолятов и штаммов, например 100 ЭЛД₅₀/см² (ТЦД ЭЛД₅₀/см²).

В качестве референтных СС используются серии (пулы) сывороток крови от 5 особей, иммунизированных однократно моновалентными вакцинами.

2 этап: в перекрёстной серологической реакции (РН, ИФА, РСК или др.) учитывают титр референтной сыворотки крови против 100 ЭЛД производственного штамма (гомологичного вируса) и соответствующей дозы изучаемых полевых изолятов (гетерологичного вируса), т.е. титр каждой пробы сыворотки крови определяют в реакции с производственным гомологичным штаммом вируса. Титрование эпизоотического изолята проводят в диагностическом тесте с сывороткой, полученной на производственный штамм агента.

Определение активности сывороток крови

Условное обозначение положительных результатов, соответствующих разведениям сыворотки крови	Вируснейтрализующая, или, (например) КС- активность сыворотки крови
	разведения	lg
1	1:16	1,204
2	1:22	1,342
3	1:32	1,505
4	1:45	1,653
5	1:64	1,806
6	1:90	1,954
7	1:128	2,107
8	1:180	2,255
9	1:256	2,408
10	1:360	2,556
11	1:512	2,709
12	1:720	2,857
13	1:1024	3,010
14	1:1440	3,158
15	1:2048	3,311
16	1:2880	3,459

Степень антигенного соответствия (r₁) полевого изолята вируса (бактерии) и производственного штамма (аналога) в РН расчитывают по формулам:

r₁ = титр^* референтной сыворотки крови с гетерологичным вирусом / титр^* референтной сыворотки крови с гомологичным вирусом

или

где титр^* – величина обратная разведению референтной сыворотки крови, в котором она активна с данным вирусом. lg ₁ -активность референтной сыворотки крови с гетерологичным вирусом выраженная в десятичных логарифмах. lg ₂ -активность референтной сыворотки крови с гомологичным вирусом выраженная в десятичных логарифмах. При r₁ > 0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса. При r₁ < 0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не способна защищать от эпизоотического вируса.

Интерпретация значений r₁в ИФА: r₁ – 0,4-1,0 – близкое антигенное родство между полевым изолятом и вакцинным штаммом; r₁ – 0,2-0,39 – полевой изолят антигенно родственен вакцинному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма и при условии, что птица будет иммунизирована более 1 раза; r₁<0,2 – полевой изолят не родственен вакцинному штамму, который не приемлем для защиты от заражения полевым изолятом.

Учёт результатов основного опыта, например, РН.

Производственный штамм и эпизоотические изоляты вируса	Вируснейтрализующая или КС- активность референтной сыворотки		r₁
Производственный штамм и эпизоотические изоляты вируса	в разведениях	в lg	r₁
Производственный гомологичный штамм вируса	1:90	1,954	1,0
Эпизоотический изолят №1	1:45	1,653	0,5
Эпизоотический изолят №2	1:45	1,653	0,5
Эпизоотический изолят №3	1:22	1,324	0,35
Эпизоотический изолят №4	1:64	1,806	0,71

Разведение референтной сыворотки крови, в котором она активна с гомологичным вирусом (производственным штаммом) – 1:90, величина обратная разведению - 90, Разведение референтной сыворотки крови, в котором она активна с гетерологичным вирусом (эпизоотический изолят №1) – 1:45, величина обратная разведению – 45. Показатель антигенного соответствия (r₁):r₁ = 45/90 = 0,5 ≥ 0,3.

или r₁=10^{(1,653-1,954)}=10^-0,3=0,5. Разведение референтной сыворотки крови, в котором она активна с гетерологичным вирусом (эпизоотический изолят №2) – 1:45, величина обратная разведению – 45. Показатель антигенного соответствия (r₁): r₁ = 45/90 = 0,5. т.е. ≥ 0,3 или r₁=10^{(1,653-1,954)}=10^-0,3=0,5. Разведение референтной сыворотки крови, в котором она активна с гетерологичным вирусом (эпизоотический изолят №3) – 1:22, величина обратная разведению – 22. Показатель антигенного соответствия (r₁):

r₁ = 22/90 = 0,24. т.е. < 0,3 или r₁=10^{(1,345-1,954)}=10^-0,612=0,24.

Разведение референтной сыворотки крови, в котором она активна с гетерологичным вирусом (эпизоотический изолят №3) – 1:64, величина обратная разведению – 64. Показатель антигенного соответствия (r₁):r₁ = 64/90= 0,71. т.е. ≥ 0,3 или r₁=10^{(1,806-1,954)}=

10^-0,148=0,71.

Следовательно, полевые изоляты №1, №2, №4 и производственный штамм вируса являются близко родственными и вакцина из этого производственного штамма будет защищать от данных эпизоотических изолятов. Изолят №3 отличается от производственного штамма, следовательно, иммунизация птицы вакциной из производственного штамма может не оказаться эффективной против данного изолята, например, вируса и серовара бактерий.

Корректировку метода матчинг желательно подводить другими методами – контрольным заражением эпизоотическим агентом не менее трёх групп птиц – вакцинированной гомологичной (1) и гетерологичной вакциной (2) в присутствии «чистой» (3),например, при ВГУ или чуме, пастереллёзе и т.д., затем согласованности проводимых измерений и тестов, определения степени патогенности (при гриппе) и др.

1.5. Риск распространения патогена в популяции диких птиц

Предполагаются некоторые условия риска распространения патогена (вируса, бактерий, простейших, гельминтов) среди диких птиц.

Наличие патогена, способного индуцировать инфицирование, заболевание и болезнь с проявлением симптомов.
Способность агента к пассированию в восприимчивой дикой птице, сохранению в переносчиках и объектах внешней среды.
Плотность дикой птицы в популяции данной местности региона.
Отношение восприимчивых и иммунных особей.
Приуроченность болезни к определённой местности.
Циклы развития (размножения) обитателей, причастных к сохранению, репродукции, переносу патогена и воспроизведению к болезни.
Сезонность и периодичность уменьшения или увеличения численности птицы в популяции.
Видовая инфраструктура птицы, млекопитающих, земноводных, насекомых, клещей, гельминтов, простейших и т. д.
Радиоизотопное, токсическое, электромагнитное воздействие. Сезонность их влияния на виды животных.
Эффективность ранее проведённых мер по ликвидации болезней: известно, например, что при «факторных» инфекциях массовые иммунизации и убой поголовья нередко малоэффективны.
Активность проявления инфекций у птиц – иммигрантов и «аборигенов» конкретного вида, породы и возраста
Спектр растений, их калорийность и химический состав. Дефицит или перенасыщение некоторыми минеральными и витаминными ингредиентами. Поражение растений токсигенными грибами и т. д. Наличие в корме потенциальных возбудителей болезней, общих для многих видов животных (флористические графики и картирование).
Формы носительства инфекционного возбудителя: инкубационное (предшествует заболеванию), механическое (пассивное), инаппарантное (скрытое), персистентное (пожизненное), хроническое (на фоне ремиссий и рецидивов), латентное (с возможным переходом в клиническую форму) и реконвалесцентное (после перенесенного заболевания). Персистенция подобна премуниции, например при хламидиозе, и проэпизоотичиванию – скрытому инфицированию, сопровождаемому нарастанием титра антител к возбудителю.
Время постановки диагноза путём обнаружения возбудителя и идентификации его маркеров. Для бесконечно большой популяции объём выборки, позволяющий обнаружить агент в одной пробе материала, при 40% заражённости составит 6 проб; при 20% - 19; при 2% - 149, и при 0,1% - 2995 проб (следствие теоремы Биесса).
Выявление источников распространения патогена болезни, их ранжирование по частоте регистрации с применением биологических методов и подопытной птицы.
Сохраняемость возбудителя в объектах внешней среды различных ландшафтов (региона, субъекта, страны, континента).
Устойчивость патогена при технологической обработке продуктов, изделий, веществ животного, растительного и другого происхождения. Период полураспада (расчет ЭЛД₅₀, ИД₅₀ и т.д.).
Возможность выявление агента и скрытых, невидимых изменений в организме клиническиздоровых птиц при инфекциях.
Определение (идентификация) условий, при которых возбудитель способен вызвать заболевание (факторные болезни, скрытые и инаппарантные формы обитания агента и т. д.).
Превалентность болезни при экстремальных случаях - наводнениях, пожарах, землетрясениях, искусственных загрязнениях окружающей среды (свалки, поступления токсических веществ в места обитания животных, их происхождения и пути передачи).
Изучение архивных данных о регистрации болезни.
Наличие естественных и синтетических (искусственных) иммунодепрессантов в корме, водоёмах и объектах окружающей среды. Другие экологические вопросы.
Коммерческая деятельность и инфраструктура хозяйства, содержащего дикую птицу (фирмы, заповедники, птицефабрики и т. п.).
Региональная инфраструктура других животноводческих хозяйств.
Ретроспективная диагностика и показатели поствакцинального (или постинфекционного) статуса птицы. Капа-статистика (согласованность результатов, методов).
Результаты экспериментальных тестов.

Показатель вероятности развития болезни и сохранения риска возможно рассчитать по формуле:

x 100, где

«а» - количество больных птиц в популяции;

«b» - количество здоровых птиц в популяции.

Результат расчёта, приближающийся к цифре 100, показывает вероятность распространения болезни среди адекватно чувствительных членов популяции.

Другие показатели риска – показатели истинной и кумулятивной инцидентности на конкретный период времени – возможно рассчитать по формулам, показанным в литературном источнике (8), п. 3.2.1, с. 135-142, 383-384 – модель Рида-Фроста (с учётом стадного, популяционного иммунитета).

В информационно-аналитический центре (ВНИИЗЖ, 2008г.) для анализа риска заноса, распространения возбудителя и вероятности возникновения болезни применяют модели (программы):

Gamma распределения с параметрами α_с и β (Vose, 2000; DEFRA, 2004) – вероятность возникновения;
PERT распределения (значения выживания агента);
Beta распределения (нелегального ввоза агента);
Arc Map 9.2 (ESRI, 2005) (составления карт риска).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 46

	Оценка сортов и гибридов овощных культур для создания продуктов питания... Работа выполнена в гну «Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений им. И. В. Мичурина»...		Получение биодобавок для улучшения потребительских свойств дизельного топлива Работа выполнена в государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт использования техники и нефтепродуктов...
	Книга рассчитана на руководителей, специалистов хозяйств всех форм... Гну всероссийский научно-исследовательский институт зерновых культур имени И. Г. Калиненко		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...
	Российской федерации федеральное государственное учреждение «всероссийский... Перечень разработан специалистами Отдела нормативного обеспечения охраны труда Федерального государственного учреждения «Всероссийский...		Федеральное государственное унитарное предприятие всероссийский Фгуп «Всероссийский научно-исследовательский институт автоматики им. Н. Л. Духова»
	Формирование гельминтофауны, защита от гнуса и инвазионных болезней... Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и...		Паразитозы крупного рогатого скота в среднем, нижнем поволжье и новые... Фгоу впо «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (нгсха), в лаборатории иммунологии гну «Всероссийский научно-исследовательский...
	Федеральное государственное учреждение «всероссийский ордена \"знак... «всероссийский ордена "знак почета" научно-исследовательский институт противопожарной обороны»		Всероссийский научно-исследовательский институт
	Всероссийский научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники		Росгидромет Всероссийский научно-исследовательский институт гидрометеорологической информации

Гну всероссийский научно-исследовательский институт ветеринаной вирусологии и микробиологии

Похожие: