Приказ Минздрава РФ от 09. 01. 1998 г №2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии" министерство здравоохранения российской федерации
|
Скачать 1.93 Mb.
|
| Для испытания применяется не менее трех образцов стандартных эритроцитов одноименной с испытуемой сывороткой группы или группы О(I), содержащих в том или ином сочетании три антигена резус: D, C и E, а также два образца резус - отрицательных (ccddee) эритроцитов. Положительный результат с резус - положительными эритроцитами и отрицательный с резус - отрицательными подтверждает наличие в сыворотке резус - антител. После этого сыворотку титруют тем же методом, которым в ней были выявлены антитела. Например, если сыворотка дала положительный результат в солевой среде, ее титруют в солевой среде; если сыворотка дала положительный результат в непрямой пробе Кумбса или в реакции с применением желатина, ее титруют, используя эти методы; если сыворотка оказалась активной при использовании обоих методов, она титруется также с помощью двух методов (методы титрования см. в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус - антител"). Сыворотку считают пригодной для дальнейшей обработки и исследования, если в ней выявляют антитела любым методом и если при этом антитела достаточно активны. Активность антител определяется их титром, который на этом этапе исследования должен быть для полных антител не ниже 1:16, а для неполных антител в непрямой пробе Кумбса не ниже 1:64, реакциями с применением желатина или полиглюкина, и в сывороточной среде на плоскости - не ниже 1:32. Сыворотки сохраняют в холодильнике при 4-8 град. С еще не менее 2 недель, после чего повторно титруют. Примечание: в тех случаях, когда сыворотка антирезус принадлежит к группе Оальфа бета(I), Абета(II) или Вальфа(III), для удобства последующего использования ее рекомендуется абсорбировать, т.е. удалить из нее групповые агглютинины, сделав таким образом ее универсальной. Если в сыворотке присутствуют слабые антитела анти-С или анти-Е, их необходимо также удалить из сыворотки путем абсорбции. После абсорбции (нейтрализации) сыворотку антирезус вновь исследуют и титруют, как сказано выше. Способы удаления или нейтрализации антител см. в Методических рекомендациях "Удаление из сыворотки антирезус-D антител другой специфичности". Повторное титрование сыворотки Повторное титрование сыворотки производят, используя метод, который дал положительный результат при первом исследовании сыворотки. Если титр антител сохранился или снизился не более чем на одну ступень, но так, что все же остался не ниже цифр, указанных в пункте 8, сыворотку можно подвергнуть стандартизации. Стандартизация сыворотки антирезус Стандартизация заключается в исследовании специфичности антител и в определении пригодности ее для практического использования. Для стандартизации сыворотку исследуют с помощью того же метода, в котором оказались активными содержащиеся в сыворотке антитела. Испытание ведется со стандартными эритроцитами одноименной группы или группы О(I), содержащими различные антигены резус, в том числе каждый из этих антигенов в отдельности: ccDee, Ccddee и ccddEe, и резус - отрицательными - ccddee. В число резус - отрицательных включают образцы эритроцитов, содержащих и не содержащих факторов Даффи (Fy) и Келл (К). Если при стандартизации сыворотка дает положительный результат со всеми образцами резус - положительных эритроцитов, независимо от их антигенной структуры, и отрицательный результат с эритроцитами Ccddee, ccddEe и резус - отрицательными - ccddee, то значит в сыворотке содержатся резус - антитела а ти-D. Если в сыворотке таким образом выявлены антитела специфичности анти-D, то ее титруют при использовании того же метода. Если сыворотка при стандартизации дает положительный результат с некоторыми образцами резус - положительных эритроцитов и с эритроцитами Ccddee или ccddEe, но дает отрицательный результат с эритроцитами ccDee и с резус - отрицательными - ccddee, то это значит, что в сыворотке содержатся резус - антитела анти-С или анти-Е. Антитела анти-С и анти-Е также титруют, используя метод, при помощи которого они были выявлены. Если сыворотка при стандартизации дает положительный результат одновременно со всеми образцами резус - положительных эритроцитов, а также с эритроцитами Ccddee и ccddEe, но отрицательный результат со всеми резус - отрицательными эритроцитами ccddee, то это значит, что сыворотка содержит антитела соответственно к двум или трем антигенам резус, т.е. анти-D+C анти-D+E или анти-D+C+E. Каждое из антител титруют отдельно теми методами, при использовании которых они оказались активными. Следует отметить, что различные резус - антитела в одной и той же сыворотке бывают полными и неполными и поэтому могут быть соответственно активными в той или иной среде. В этих случаях их титрование следует проводить, используя разные методы. Если исследуемая сыворотка дала положительный результат избирательно среди резус - отрицательных образцов, это значит, что в ней содержатся другие антитела, например, анти - Даффи или анти - Келл. Исследование и обработку таких сывороток см. в "Инструкции по изготовлению сывороток редких групп". Окончательное заключение о пригодности сыворотки Сыворотка считается стандартной и пригодной для практического использования, если она содержит одно или несколько резус - антител в любой форме (полные или неполные) с титром для анти-D: в солевой среде не ниже 1:16; в непрямой пробе Кумбса - не ниже 1:64; для реакции с применением желатина или полиглюкина Ввиду редкости антител анти-С и анти-Е допускается использование таких сывороток с более низким титром при условии хорошо выраженного положительного результата. Сыворотки, отвечающие этим требованиям, считаются стандартными сыворотками данной специфичности. Назначение сыворотки антирезус Сыворотка антирезус, признанная стандартной, может быть использована в зависимости от формы установленных в ней антител: реакцией агглютинации в солевой среде, реакцией с применением желатина, реакцией в сывороточной среде на плоскости. Кроме того, сыворотка, содержащая неполные резус - антитела, может быть использована для приготовления стандартного универсального реагента антирезус с применением 33% раствора полиглюкина. Для этого требуется ее дальнейшая обработка (см. п. 16.). Во всех случаях сыворотка и реагент, предназначенные для практического использования, должны быть расфасованы и паспортизированы. Розлив и паспортизация стандартных сывороток антирезус После стандартизации и заключения о пригодности сыворотки фильтруют и разливают в ампулы или в маленькие флаконы по 2-5 мл, в зависимости от потребности. На флаконы (ампулы) наклеиваются этикетки с наименованием учреждения-изготовителя, номера серии, обозначения группы крови по системе АВО, специфичности, формы антител антирезус и срока годности. Хранение и срок годности стандартной сыворотки антирезус Расфасованные стандартные сыворотки антирезус хранят в холодильнике при 4-8 град. С или в замороженном состоянии при -15 град. С и ниже. При хранении в замороженном состоянии сыворотка не изменяет свойств в течение 2 лет. При размораживании или хранении ее при 4-8 град. С срок годности устанавливают 4 мес. Активность резус - антител в большинстве случаев сохраняется и дольше. Поэтому по истечении срока годности сыворотки могут быть проверены (см. п. 10.) и при сохранении их специфичности и титра срок годности продлевают: для сыворотки, хранящейся в замороженном состоянии - еще на 1 год, а для сыворотки, хранившейся при 4-8 град. С - на 2 месяца. -------------------------------¬-------------------------------¬ ¦ Наименование учреждения- ¦¦ Наименование учреждения- ¦ ¦ изготовителя ¦¦ изготовителя ¦ ¦ ¦¦ ¦ ¦ Сыворотка АНТИРЕЗУС ¦¦ Сыворотка АНТИРЕЗУС ¦ L-------------------------------L------------------------------- -------------------------------¬-------------------------------¬ ¦ анти- ..... неполные антителদ анти- ....... полные антитела¦ ¦ для метода ..................¦¦ для метода ..................¦ ¦ Группа крови ........ ¦¦ Группа крови ........ ¦ ¦ Серия ........ ..... мл ¦¦ Серия ........ ..... мл ¦ ¦ Годна до ......... ¦¦ Годна до ......... ¦ L-------------------------------L------------------------------- Рисунок 1. Форма этикеток для стандартных сывороток антирезус. На этикетках группы А(II), В(III) и АВ(IV) наносят по диагонали цветные полосы: для сыворотки группы А(II) - синие; для сыворотки группы В(III) - красные; для группы АВ(IV) и специально приготовленной - универсальной - желтые. Выдача стандартной сыворотки антирезус При выдаче стандартной сыворотки антирезус к ней необходимо приложить инструкцию по использованию. Для сыворотки антирезус это особенно важно, так как сыворотки, содержащие антитела, разные по форме (полные и неполные) и приготовленные для разных методов исследования, активны только при применении определенного метода и будут неактивными или неспецифическими при неправильном их использовании. Инструкции по использованию для каждого метода см. дополнения 1, 2, 3. Изготовление стандартного универсального реагента антирезус для определения резус - принадлежности в пробирках без подогрева Стандартный универсальный реагент антирезус пригоден для определения резус - фактора крови, независимо от ее групповой принадлежности по системе АВО. Реагент готовят из сывороток, содержащих неполные резус - антитела, предварительно обработанных, исследованных и признанных пригодными как стандартные (см. п.п. 6.-11.). Для изготовления реагента отбирают сыворотки группы АВ(IV) или другой группы, но освобожденные от групповых агглютининов альфа и бета путем удаления или нейтрализации (см. Методические рекомендации "Удаление из сыворотки антирезус-D антител другой специфичности"). Для изготовления реагента пригодны сыворотки антирезус с титром не ниже, чем 1:32. Если исходные сыворотки имеют более высокий титр, допускается их разведение до титра 1:32 изотоническим раствором NaCl, сывороткой группы АВ(IV) или стандартным универсальным разводителем (см. Методические рекомендации "Приготовление сыворотки - разводителя и стандартного разводителя"). Титрование сывороток производят с применением 33% раствора полиглюкина. В штатив устанавливают 10 пробирок с обозначением 1:2, 1:4 и т.д. до 1:1024. Во все пробирки вводят по 2 капли изотонического раствора NaCl. Затем в первую пробирку вводят той же пипеткой 2 капли исследуемой сыворотки антирезус, из первой пробирки, после перемешивания содержимого, переносят 2 капли во вторую, из третьей - в четвертую и т.д. до последней, из которой 2 капли удаляют. Затем во все пробирки добавляют по 1 капле резус - положительных эритроцитов или их смеси и по 1 капле 33% раствора полиглюкина. Примечание: смесь эритроцитов готовят из крови 4-6 доноров группы О(I) резус - положительной, взятой не более, чем за 2-3 дня. Пробирки встряхивают для перемешивания содержимого, затем наклоняют почти до горизонтали и в таком положении медленно поворачивают по оси так, чтобы содержимое растеклось по стенкам пробирки. Такой контакт сыворотки с эритроцитами при поворачивании пробирок продолжают 3 минуты. Через 3-5 минут во все пробирки добавляют по 2-3 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое путем 1-2 кратного переворачивания пробирок (не встряхивать!). Результат наблюдают в проходящем свете невооруженным глазом или через лупу. Оценку результата производят по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов в виде комочков или хлопьев на фоне полностью или частично обесцвеченной жидкости. Последнее разведение, в котором имеется агглютинация эритроцитов, принимают за титр исследуемой сыворотки. Установив, что титр резус - антител в данном методе не ниже 1:32, переходят к дальнейшему исследованию, для чего готовят пробный образец реагента. Изготовление пробного образца реагента антирезус К 2 объемам сыворотки антирезус с неполными антителами добавляют 1 объем 33% раствора полиглюкина, тщательно перемешивают и далее проводят исследование в отношении специфичности и активности. Исследование на специфичность и активность Пробный образец реагента исследуют с 2-3 образцами резус - положительных эритроцитов, а также с резус - отрицательными ccddee группы О(I), А(II) и В(III). Кроме того, в исследование включают эритроциты генотипа Ccddee и ccddEe. Среди резус - отрицательных должны быть образцы, положительные и отрицательные по факторам Даффи (Fy) и Келл (К). Для исследования устанавливают ряд пробирок по числу образцов эритроцитов, пробирки маркируют. На дно пробирок помещают по 2 капли исследуемого реагента и затем, в соответствии с маркировкой, в пробирки вводят по 1 капле эритроцитов. Содержимое пробирок тщательно перемешивают, затем пробирки наклоняют почти до горизонтального положения, медленно поворачивают и т.д., как сказано выше. Трактовка результата Результат учитывают по отсутствию или наличию агглютинации эритроцитов и скорости ее наступления в каждой пробирке. Специфичность оценивают по отсутствию агглютинации с D-отрицательными эритроцитами различного фенотипа в каждой отдельной пробирке. Если агглютинация произошла во всех пробирках с резус - положительными образцами, а со всеми резус - отрицательными образцами и образцами Ccddee и ccddEe - реакция отрицательная, пробный образец считают специфическим. Активность пробного образца можно оценивать одновременно с оценкой специфичности. Если агглютинация резус - положительных эритроцитов проявилась при поворачивании наклоненной пробирки в течение 1-й минуты и через 3 минуты после добавления изотонического раствора NaCl агглютинаты образуют крупные хлопья на фоне полностью просветленной жидкости и при этом титр антител, определенный на предыдущем этапе исследования, не ниже 1:32, реагент считают пригодным для практического использования. Изготовление полного объема (серии) стандартного универсального реагента антирезус После заключения о пригодности пробного образца можно готовить стандартный универсальный реагент в полном объеме, исходя из потребности. Изготовленный реагент вновь контролируют теми же методами, т.е. титруют и исследуют на специфичность и активность и делают заключение о его пригодности. После этого реагент фильтруют, разливают по 2-5 мл во флаконы или ампулы, которые тщательно закупоривают (запаивают) и наклеивают на них этикетки с указанием учреждения, изготовившего реагент, название реагента, специфичности, номера серии и срока годности. -------------------------------------¬ ¦ Наименование ¦ ¦ учреждения - изготовителя ¦ +------------------------------------+ ¦ Универсальный реагент антирезус ¦ ¦ анти- ................. ¦ ¦для метода в пробирках без подогрева¦ ¦ Серия ......... .......... мл ¦ ¦ Годен до .............. ¦ L------------------------------------- Рисунок 2. Форма этикетки для стандартного универсального реагента антирезус. Хранение и срок годности Реагент хранят в холодильнике при 4-8 град. С. Срок годности - 6 месяцев. Активность и специфичность реагента контролируют 1 раз в месяц в лаборатории, его изготовившей. Выдача стандартного универсального реагента антирезус Реагент антирезус выдается в другие учреждения в комплекте с 33% раствором полиглюкина и с инструкцией по использованию (см. дополнение 2). Регистрация работы по изготовлению сыворотки и реагента антирезус Все этапы работы по изготовлению сывороток, предназначенных для разных методов определения резус - принадлежности, а также реагента антирезус, регистрируются в "Журнале регистрации материала, поступившего для изготовления стандартной сыворотки антирезус" и в "Журнале регистрации изготовленной стандартной сыворотки антирезус". Дополнение N 1 ИНСТРУКЦИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ СТАНДАРТНОЙ СЫВОРОТКИ АНТИРЕЗУС ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС - ПРИНАДЛЕЖНОСТИ РЕАКЦИЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЖЕЛАТИНА (Прилагается при выдаче сыворотки) Реакция с применением желатина пригодна для работы с сыворотками, содержащими неполные резус - антитела. Общие замечания. При определении резус - принадлежности необходимо учитывать групповую специфичность сыворотки антирезус по системе АВО. Сывороткой антирезус или группы АВ(IV) специально приготовленной - универсальной определяют резус - принадлежность в эритроцитах любой группы по системе АВО. Сывороткой антирезус группы О(I) определяют резус - принадлежность только в эритроцитах группы О(I), сывороткой группы А(II) - в эритроцитах группы О(I) и А(II) и сывороткой антирезус группы В(III) - в эритроцитах группы О(I) и В(III). |
Похожие:
 |
Приказ Минздрава РФ от 09. 01. 1998 г №2 "Об утверждении инструкций... В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
 |
Приказ Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии" В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
|
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
|
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
|
Приказ Минздрава России от 20. 12. 2012 n 1175н (ред от 21. 04. 2016)... Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от... |
|
И атомному надзору приказ Постановлением Правительства Российской Федерации от 6 ноября 1998 г. N 1303 "Об утверждении Положения о декларировании безопасности... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при системной красной волчанке |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ В соответствии с подпунктом 7 Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Федерального закона от 12 апреля 2010 г. N 61-фз "Об обращении лекарственных средств" и подпунктом 171 Положения о Министерстве здравоохранения... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при окклюзии центральной артерии сетчатки и ее ветвей |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи при остром приступе закрытоугольной глаукомы |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи детям при юношеском (ювенильном) артрите |
|
Приказ минздрава РФ от 26. 11. 97 №345 о совершенствовании мероприятий... Федеральной целевой программы "Безопасное материнство", утвержденной Постановлением Правительства Российской Федерации от 14. 10.... |
|
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации Верховного Совета Российской Федерации, 1993, n 33, ст. 1318; Собрание законодательства Российской Федерации, 1998, n 10, ст. 1143;... |
|
Приказ Приложение №1 Приложение №2 Приложение №3 Приложение №4 Приложение... Министерство Здравоохранения СССР. Приказ от 3 октября 1990г. №394. "Об утверждении положения о комплексном техническом обслуживании,... |
|
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации приказ Положения о Министерстве здравоохранения и социального развития Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства... |