Скачать 1.93 Mb.
|
Оценка результатов определения групп крови перекрестным методом при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы и стандартных эритроцитов ---------------------------------------¬ ---------------------------------------¬ ¦ Изогемагглютинирующие ¦ ¦ Изогемагглютинирующие ¦ ¦ сыворотки группы ¦ ¦ сыворотки группы ¦ +----------------T---------T-----------+ +----------------T---------T-----------+ ¦Оальфа бета(А+В)¦Абета(II)¦Вальфа(III)¦ ¦Оальфа бета(А+В)¦Абета(II)¦Вальфа(III)¦ ¦Анти-(А+В) ¦ Анти-В ¦Анти-А ¦ ¦Анти-(А+В) ¦ Анти-В ¦Анти-А ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------------+---------+-----------+ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------------+---------+-----------+ ¦ Стандартные эритроциты ¦ ¦ Стандартные эритроциты ¦ +----------------T---------T-----------+ +----------T---------T-----------------+ ¦ О(I) ¦ А(II) ¦ В(III) ¦ ¦ О(I) ¦ А(II) ¦ В(III) ¦ ¦ - ¦ + ¦ + ¦ ¦ - ¦ - ¦ + ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------+---------+-----------------+ ¦Исследуемая кровь группы О(I) ¦ ¦Исследуемая кровь группы А(II) ¦ L--------------------------------------- L--------------------------------------- ---------------------------------------¬ --------------------------------------¬ ¦ Изогемагглютинирующие ¦ ¦ Изогемагглютинирующие ¦ ¦ сыворотки группы ¦ ¦ сыворотки группы ¦ +----------------T---------T-----------+ +----------------T---------T----------+ ¦Оальфа бета(А+В)¦Абета(II)¦Вальфа(III ¦ ¦Оальфа бета(А+В)¦Абета(II)¦Вальфа(III¦ ¦Анти-(А+В) ¦ Анти-В ¦Анти-А ¦ ¦Анти-(А+В) ¦ Анти-В ¦Анти-А ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------------+---------+----------+ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ ¦ + ¦ + ¦ + ¦ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ ¦ + ¦ + ¦ + ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------------+---------+----------+ ¦ Стандартные эритроциты ¦ ¦ Стандартные эритроциты ¦ +----------------T---------T-----------+ +----------T---------T----------------+ ¦ О(I) ¦ А(II) ¦ В(III) ¦ ¦ О(I) ¦ А(II) ¦ В(III) ¦ ¦ - ¦ + ¦ - ¦ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +----------------+---------+-----------+ +----------+---------+----------------+ ¦Исследуемая кровь группы В(III) ¦ ¦Исследуемая кровь группы АВ(IV) ¦ L--------------------------------------- L-------------------------------------- "Инструкцию по определению групп крови системы АВО при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток", утвержденную Министерством здравоохранения СССР 07 сентября 1990 г. N 05-14/27, считать утратившей силу с момента утверждения данной инструкции. Начальник Управления организации медицинской помощи населению Минздрава РФ А.И.ВЯЛКОВ Приложение N 4 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998 г. N 2 ИНСТРУКЦИЯ <*> ПО ПРИМЕНЕНИЮ ЦОЛИКЛОНОВ АНТИ-А, АНТИ-В И АНТИ-АВ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЖИДКИХ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ЧЕЛОВЕКА СИСТЕМЫ АВО (АНТИТЕЛА МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИ-А, АНТИ-В, АНТИ-АВ) ТУ 9398-205-27575295-94 -------------------------------- <*> Составители инструкции: профессор И.Л.Чертков, директор ТОО "Гематолог" Г.Ю.Митерев, научные сотрудники Л.Н.Леменева, Н.И. Оловникова, Е.В.Белкина. 1. Назначение Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. 2. Характеристика и основные свойства цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами. 3. Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов Определение производится в нативной крови, взятой в консервант: в крови, взятой без консерванта, в том числе взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: и на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25 град. С. 3.1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. 3.2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). 3.3. Смешайте кровь с реагентом. 3.4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, но наблюдение следует вести три минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. 3.5.Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 3.6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице. ----------------------------------T---------------------------¬ ¦ Результат реакции <*> ¦ ¦ ¦ с Цоликлоном: ¦ Исследуемая кровь ¦ +----------T---------T------------+ принадлежит к группе <**>¦ ¦ анти-А ¦ анти-В ¦ анти-АВ ¦ ¦ +----------+---------+------------+---------------------------+ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ О(I) ¦ +----------+---------+------------+---------------------------+ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ А(II) ¦ +----------+---------+------------+---------------------------+ ¦ - ¦ + ¦ + ¦ В(III) ¦ +----------+---------+------------+---------------------------+ ¦ + ¦ + ¦ + ¦ АВ(IV) ¦ L----------+---------+------------+---------------------------- -------------------------------- <*> Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации. <**> Окончательно АВО принадлежность устанавливается только по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке. 4. Контроль специфичности реакции агглютинации В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведение контроля с растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости одну каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе. 5. Форма выпуска Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5-10 мл. Цоликлон анти-А - красного цвета, анти-В - синего и анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%. 6. Хранение Срок хранения - два года при температуре 2-8 град. С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8 град. С в закрытом виде в течение одного месяца. 7. Рекламация Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флакона, наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями. При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным. Необходимо также приложить протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона с Цоликлоном данной серии. Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель. "Инструкцию по применению Цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ диагностических жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ)", утвержденную Управлением научных исследований Минздравмедпрома России 17 марта 1995 года, считать утратившей силу с момента утверждения данной инструкции. Начальник Управления организации медицинской помощи населению Минздрава РФ А.И.ВЯЛКОВ Приложение N 5 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от 09.01.1998 г. N 2 ИНСТРУКЦИЯ ПО ИЗГОТОВЛЕНИЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК И РЕАГЕНТА АНТИРЕЗУС Стандартные сыворотки антирезус служат для определения резус - принадлежности крови людей и приготавливаются из крови лиц, сенсибилизированных к резус - фактору, содержащих в крови активные резус - антитела. Источники получения сыворотки антирезус Кровь (плазма) для изготовления сывороток антирезус может быть получена: а) от женщин, сенсибилизированных к резус - фактору во время беременности; б) от больных, перенесших трансфузионные реакции или осложнения, которым производят кровопускание в процессе их лечения (обменные трансфузии, плазмаферез) и от тех же лиц после их излечения; в) от доноров, дающих кровь для переливания больным, в тех (редких) случаях, когда у них обнаружены в крови резус - антитела; г) от лиц, специально иммунизированных антигеном резус. (см. Метод. рекоменд. "Иммунизация доноров для получения сывороток и иммуноглобулина антирезус"). Выявление женщин, сенсибилизированных к резус - антигену и содержащих в крови резус - антитела Наиболее часто сенсибилизация к резус - антигену происходит у женщин во время беременности. Выявление таких лиц производится персоналом женских консультаций и родильных домов. Кровь резус - отрицательных женщин исследуют на наличие антител. При выявлении резус - антител сведения о таких лицах передаются в учреждения Службы крови. Учет лиц, в крови которых содержатся резус - антитела В тех случаях, когда устанавливается сенсибилизация к резус - антигену, т.е. наличие в крови у женщин резус - антител, таких женщин регистрируют и заводят на них карту "Учета изоиммунных лиц". Карты заполняются персоналом родильных домов, в женских консультациях и в учреждениях Службы крови. Привлечение к донорству лиц, в крови которых содержатся резус - антитела У женщин, в крови которых содержатся резус - антитела, может быть взята кровь для изготовления стандартной сыворотки. Привлечение таких лиц к донорству требует особого подхода. Следует учитывать, что большинство из них перенесло тяжелую психическую травму в связи с болезнью, а иногда и смертью ребенка. Желательно рассказать женщине, что из ее крови будет приготовлена сыворотка - реактив, которую необходимо использовать при лечении детей с таким же заболеванием. При согласии женщины дать кровь необходимо обследовать состояние ее здоровья и установить возможность и дозы взятия крови. В дальнейшем, но не ранее, чем через полгода после родов и по окончании периода лактации, желательно привлечение женщин, иммунизированных во время беременности, к систематическому донорству, а при падении титра антител - к реиммунизации, в соответствии с "Методическими рекомендациями по иммунизации доноров для получения сыворотки и иммуноглобулина антирезус". Показатели пригодности крови для изготовления из нее стандартной сыворотки антирезус Показателем пригодности крови для приготовления из нее стандартной сыворотки является ее активность, т.е. титр резус - антител. Ввиду возможного снижения титра антител при обработке сыворотки следует привлекать к донорству лиц, в крови которых содержатся антитела анти-D с титром, превышающим окончательные требования, предъявляемые к стандартным сывороткам. Для полных антител титр должен быть не ниже, чем 1:32, для неполных антител при исследовании их в непрямой пробе Кумбса - не ниже, чем 1:128, а при исследовании реакцией с применением желатина в пробирках или реакцией в сывороточной среде на плоскости - не ниже 1:64. Исходный титр резус - антител при изготовлении стандартного универсального реагента должен быть не ниже 1:32. Методы и дозы взятия крови Взятие крови от лиц, сенсибилизированных к резус - антигену предыдущими беременностями или трансфузиями крови, а также от искусственно иммунизированных доноров, состояние здоровья которых соответствует требованиям инструкции, предъявляемым к донорам, дающим кровь для переливания больным, допускается в дозах, предусмотренных этой инструкцией. Плазму, содержащую резус - антитела, рекомендуется получать также методом плазмафереза, однако только вне периода беременности. Оплата на усиление питания лицам, из крови которых изготавливается сыворотка антирезус, при любом методе взятия крови и последующего отделения сыворотки или плазмы, производится в тройном размере. Первичная обработка сыворотки и плазмы При получении плазмы из крови донора методом плазмафереза плазма не позже, чем через 2-3 дня, должна быть дефибринирована. Для этого плазму переливают из пластикатного мешка во флакон, добавляют в нее 20% раствор хлорида кальция из расчета 3 мл на 100 мл плазмы и содержимое флакона тщательно перемешивают. Через несколько минут после этого, а затем еще раз через 30 минут флакон с плазмой встряхивают для отделения свертка от стенок флакона и оставляют на 2 часа при комнатной температуре, после чего помещают в холодильник при температуре 4-8 град. С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют борной кислотой из расчета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азидом натрия - 1 г на 1 л. Если кровь берут обычным путем в сухой флакон, то через несколько минут после взятия крови, а затем еще раз через 30 минут флакон встряхивают для отделения свертка от стенок и оставляют на 2 ч. при комнатной температуре, после чего помещают в холодильник при температуре 4-8 град.С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют. При высоком титре резус - антител можно получить дополнительное количество сыворотки антирезус путем приготовления смывов со свертка. Для этого сверток измельчают (разрезают на много частей) и заливают его до половины объема изотоническим раствором NaCl или сывороткой группы АВ(IV) с высокими конглютинирующими свойствами, стандартным разводителем или альбумином. Флакон со свертком, залитым жидкостью, плотно закрывают пробкой и несколько раз переворачивают для того, чтобы лучше вымыть из свертка сыворотку антирезус, а затем помещают в холодильник при температуре 4-8 град. С. На следующий день сыворотку - смыв сливают в другой сосуд и оставляют в холодильнике до полного оседания эритроцитов, после чего переливают в другой сосуд и полученный смыв исследуют на активность резус - антител. Если титр соответствует требованиям, изложенным в пункте 11, смыв соединяют с первоначально полученной сывороткой или обрабатывают далее отдельно, предварительно добавляя в него борную кислоту из расчета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азид натрия - 1 г на 1 л. Приготовление смыва можно повторить. Изотонический раствор NaCl применяется для смывов в тех случаях, когда предполагается последующее использование сыворотки антирезус реакцией агглютинации в солевой среде (в маленьких пробирках) или реакцией конглютинации с применением желатина или полиглюкина. После такой первичной обработки сыворотку хранят при 4-8 град. С не менее 2-3 недель и затем приступают к дальнейшим исследованиям. Исследование сыворотки Исследование сыворотки следует производить через 2-3 недели после ее заготовки и консервирования ввиду того, что в этот период может происходить снижение титра антител. Исследование начинают с проверки групповой принадлежности сыворотки по системе АВО. Полученные результаты сверяют с паспортными записями на флаконе с сывороткой. Следует учесть, что если исследуется смыв со свертка, полученный сывороткой группы АВ(IV) или стандартным разводителем группы АВ(IV), то может произойти нейтрализация групповых антител альфа и бета. Если это будет установлено, то делают соответствующие изменения в паспортных записях. Далее определяют в сыворотке присутствие полных и неполных антител с помощью методов, описанных в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус - антител". |
Приказ Минздрава РФ от 09. 01. 1998 г №2 "Об утверждении инструкций... В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
Приказ Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии" В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
||
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
||
Приказ Минздрава России от 20. 12. 2012 n 1175н (ред от 21. 04. 2016)... Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от... |
И атомному надзору приказ Постановлением Правительства Российской Федерации от 6 ноября 1998 г. N 1303 "Об утверждении Положения о декларировании безопасности... |
||
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при системной красной волчанке |
Министерство здравоохранения российской федерации приказ В соответствии с подпунктом 7 Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства... |
||
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Федерального закона от 12 апреля 2010 г. N 61-фз "Об обращении лекарственных средств" и подпунктом 171 Положения о Министерстве здравоохранения... |
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при окклюзии центральной артерии сетчатки и ее ветвей |
||
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи при остром приступе закрытоугольной глаукомы |
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи детям при юношеском (ювенильном) артрите |
||
Приказ минздрава РФ от 26. 11. 97 №345 о совершенствовании мероприятий... Федеральной целевой программы "Безопасное материнство", утвержденной Постановлением Правительства Российской Федерации от 14. 10.... |
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации Верховного Совета Российской Федерации, 1993, n 33, ст. 1318; Собрание законодательства Российской Федерации, 1998, n 10, ст. 1143;... |
||
Приказ Приложение №1 Приложение №2 Приложение №3 Приложение №4 Приложение... Министерство Здравоохранения СССР. Приказ от 3 октября 1990г. №394. "Об утверждении положения о комплексном техническом обслуживании,... |
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации приказ Положения о Министерстве здравоохранения и социального развития Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства... |
Поиск |