Приказ Минздрава РФ от 09. 01. 1998 г №2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии" министерство здравоохранения российской федерации
|
Скачать 1.93 Mb.
|
| б. Кровь для исследования берут из места укола мякоти пальца или мочки уха. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят сухой стеклянной палочкой на пластинку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается). в. Другой стеклянной палочкой перемешивают каплю крови с сывороткой группы Оальфа бета[анти-(А+В)] до тех пор, пока смесь не окрасится равномерно в красный цвет. Другой стеклянной палочкой перемешивают следующую каплю крови с сывороткой группы Абета(анти-В) и так же поступают с сывороткой Вальфа(анти-А). При использовании двух серий сывороток так же делают во втором ряду. Можно перемешивать кровь с сывороткой одной и той же палочкой, но в этом случае необходимо после размешивания каждой капли промывать палочку в стакане с водой и насухо ее вытирать. г. После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят на менее пяти минут. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, наблюдение следует вести и далее - до пяти минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например, с эритроцитами группы А2(II). д. По мере наступления агглютинации, но не ранее, чем через три минуты, в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения пяти минут. Трактовка результатов реакции при определении группы крови при помощи стандартных сывороток Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд от начала перемешивания в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие комочки постепенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка полностью или почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции жидкость все время (5 минут) остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких агглютинатов. Результаты реакций в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать. Результаты с сыворотками трех групп: Оальфа бета[анти-(А+В)], Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А) могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см. табл. 1). а. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е. все смеси остались равномерно окрашенными в красный цвет без признаков агглютинации, это значит, что кровь не содержит агглютиногенов А и В, т.е. принадлежит к группе О(I). б. Если сыворотки групп Оальфа бета[анти-(А+В)] и Вальфа(анти-А) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Абета(анти-В) - отрицательную, это значит, что кровь содержит агглютиноген А, т.е. принадлежит к группе А(II). в. Если сыворотки групп Оальфа бета[анти-(А+В)] и Абета(анти-В) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вальфа(анти-А) - отрицательную, то исследуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. принадлежит к группе В(III). г. Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что исследуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе АВ (IV). Однако в этих случаях для исключения неспецифической агглютинабельности исследуемых эритроцитов необходимо провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо(IV). Для этого на пластинку наносят большую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АВо(IV) (контроль) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, после чего наблюдают за результатом в течение 5 минут при покачивании пластинки. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле, при наличии ее в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп Оальфа бета[анти-(А+В)], Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ(IV). Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов а. Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемой крови при помощи стандартных сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов. б. Для определения группы крови перекрестным способом кроме стандартных сывороток используют стандартные эритроциты группы О(I), А(II) и В(III). в. Кровь для исследования берут из вены или места укола пальца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для отделения сыворотки (для лучшего отделения сыворотки через 3-5 минут следует отделить сверток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой). г. Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: Оальфа бета[анти-(А+В)], Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А). На верхнем крае надписывают фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. д. Под соответствующими обозначениями групп крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При использовании стандартных сывороток двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оальфа бета[анти-(А+В)], Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А). е. На правую часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: О(I), А(II) и В(III). ж. Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекают сыворотку (острожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой (0,1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0,01 мл) капле рядом с каждой каплей подготовленной стандартной сыворотки. з. Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами (сухой стеклянной палочкой), пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят не менее пяти минут. Агглютинация в каплях со стандартной сывороткой обычно начинается быстро (10-30 секунд). Агглютинация в каплях, в которых сыворотку крови испытывают со стандартными эритроцитами, может наступить поздно (к концу пятой минуты), в связи с возможностью низкого титра содержащихся в исследуемой сыворотке агглютининов. и. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения пяти минут. Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом Учет реакции производится путем сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов (см. табл. 2). Результаты реакций, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов, должны совпадать, т.е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови. Эти результаты могут быть выражены в четырех различных комбинациях. а. Реакция со стандартными сыворотками указывает на отсутствие групповых агглютиногенов, т.е. на принадлежность исследуемой крови к группе О(I) (см. раздел IV, а). При этом сыворотка исследуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами группы О(I) и положительную - с эритроцитами групп А(II) и В(III). Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов альфа и бета, т.е. подтверждает принадлежность исследуемой крови к группе Оальфа бета(I). б. При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногена А (см. раздел IV, б). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О(I) и А(II), но положительную с эритроцитами группы В(III). Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина бета, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе Абета(II). в. При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови определяется наличие агглютиногена В (раздел IV, в). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О(I) и В(III), но положительную с эритроцитами группы А(II). Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина альфа , т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе Вальфа(III). г. При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногенов А и В, а исследование с контрольной сывороткой группы АВ(IV) подтверждает специфичность реакции (см. раздел IV, г). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами всех трех групп, что указывает на отсутствие агглютининов в исследуемой крови, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе АВо(IV). Причины ошибок и меры их предупреждения Отступление от изложенных правил может привести к ошибочным заключениям о групповой принадлежности исследуемой крови. Отступлением от правил могут явиться: ошибочный порядок расположения стандартных сывороток или эритроцитов в штативах, ошибочный порядок нанесения их на пластинку, неправильное соотношение количества сыворотки и эритроцитов, несоблюдение времени, необходимого для проведения реакции (5 минут), не использование контрольной реакции с сывороткой группы АВо(IV), загрязнение или применение мокрых пипеток, пластинок, палочек, а также использование недоброкачественных стандартов, например, сыворотки с истекшим сроком годности (недостаточно активной), загрязненной или частично высохшей сыворотки, которая может вызвать неспецифическую реакцию агглютинации и т.д. Эти отступления и связанные с ними ошибки могут привести к неправильной оценке результата реакции в целом и в каждой отдельной капле. Последнее может заключаться в следующем: Лицо, определяющее группу крови, считает, что агглютинации не произошло, в то время как она фактически есть или должна появиться. Лицо, определяющее группу крови, предполагает, что произошла агглютинация, в то время как она фактически отсутствует. Первая ошибка, т.е. учет реакции как отрицательной при фактическом наличии агглютинации, может произойти: а) в тех случаях, когда агглютинация начинается поздно или бывает слабо выражена. Это может зависеть от того, что стандартные сыворотки мало активны, или от того, что эритроциты исследуемого лица обладают слабой агглютинабельностью. При одновременном наличии этих двух причин агглютинация может совсем не появиться, например, если малоактивная сыворотка группы Вальфа(анти-А) не дает агглютинации с эритроцитами группы А(II), если агглютинабельность последних низкая, например, подгруппа А2. Во избежание этой ошибки необходимо наблюдать за ходом реакции не менее пяти минут и особенно внимательно за теми каплями, в которых еще не наступила агглютинация, а также работать только с активными сыворотками, агглютинирующая способность которых проверена, соответствует требованиям инструкции и в пределах срока ее годности; б) при избытке крови, если взята слишком большая капля. Во избежание этой ошибки следует соблюдать соотношение объема исследуемой крови и стандартной сыворотки (или стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки) приблизительно 1:10; в) при высокой температуре (выше 25 град. С) окружающего воздуха, например, в жаркую погоду (см. раздел II, а). Во избежание этой ошибки пластинку, на которой определяется группа крови, следует охладить. Вторая ошибка, т.е. учет реакции как положительной при фактическом отсутствии агглютинации, может произойти: а) когда эритроциты испытуемой крови складываются в "монетные столбики", которые невооруженным глазом можно принять за агглютинаты. Во избежание этой ошибки необходимо добавление изотонического раствора NaCl (см. раздел III, д) с последующим покачиванием пластинки,что, как правило, уничтожает "монетные столбики"; б) когда исследуемые эритроциты дают феномен ауто- или панагглютинации. Во избежание этой ошибки необходимо не допускать определения групп крови при температуре ниже 15 град. С (см. раздел II, а) и обязательно использовать контрольные сыворотки группы АВо(IV) (см. раздел IV, г); в) при использовании недоброкачественной сыворотки, дающей неспецифическую агглютинацию. Во избежание этой ошибки следует просматривать ампулы (флаконы) со стандартной сывороткой и не использовать ее, если в ней имеются помутнение или признаки высыхания; г) когда пластинку со смесью эритроцитов и сыворотки не покачивают. В этом случае эритроциты, оседая на дно, могут образовать отдельные скопления, симулирующие агглютинацию. Во избежание этой ошибки необходимо периодически покачивать пластинку, на которой проводится определение (см. раздел III, г и раздел V, з). Однако и при правильной оценке реакции в каждой отдельной капле можно сделать неправильное заключение о групповой принадлежности, если спутать порядок расположения стандартов в штативе или на пластинке. Поэтому каждый раз в начале работы по определению групповой принадлежности следует тщательно проверять расположение в штативах пробирок со стандартными эритроцитами, а также всех ампул (флаконов) с сывороткой, их групповую принадлежность, номер серии и дату годности. Во всех случаях нечеткого или сомнительного результата необходимо повторное определение группы крови при помощи стандартных сывороток других серий. Если результаты также остаются неясными, а определение проводилось только при помощи стандартных сывороток, то следует определить группу крови также и перекрестным способом. Примечание 1. При определении групповой принадлежности крови больных в лечебных учреждениях могут встретиться трудности, вызванные изменением свойств крови при различных патологических состояниях. Это может выразиться в неспецифической агглютинабельности эритроцитов, например, при аутоиммунной гемолитической анемии, у новорожденных с гемолитической болезнью, у больных циррозом печени, с ожогами, при гнойно - септическом состоянии. При некоторых заболеваниях, например, при лейкозах, наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, особенно группы А(II), а также снижение активности групповых агглютининов. В таких случаях определение групповой принадлежности крови больного должно производиться повторно с использованием стандартных сывороток более высокой активности, желательно в лабораторных условиях. Примечание 2. При использовании для определения групп крови системы АВО моноклональных антител следует руководствоваться специальной инструкцией, которая прилагается к комплектам моноклональных антител при их выдаче. Таблица 1 Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы ---------------------------------------T----------------------¬ ¦Изогемагглютинирующие сыворотки группы¦ ¦ +--------------T---------T-------------+ Исследуемая кровь ¦ ¦Оальфа бета(I)¦Абета(II)¦ Вальфа(III) ¦ принадлежит к группе ¦ ¦Анти-(А+В) ¦ Анти-В ¦ Анти-А ¦ ¦ +--------------+---------+-------------+----------------------+ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ О(I) ¦ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ +--------------+---------+-------------+----------------------+ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ А(II) ¦ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ ¦ +--------------+---------+-------------+----------------------+ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ В(III) ¦ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ ¦ +--------------+---------+-------------+----------------------+ ¦ + + + ¦ ¦ ¦ + + + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Контроль с сывороткой группы АВо(IV) ¦ АВ(IV) ¦ ¦ - ¦ ¦ L--------------------------------------+----------------------- Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие ее. Таблица 2 |
Похожие:
 |
Приказ Минздрава РФ от 09. 01. 1998 г №2 "Об утверждении инструкций... В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
 |
Приказ Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии" В целях совершенствования системы обеспечения иммунологической безопасности переливания крови и ее компонентов, профилактики посттрансфузионных... |
|
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
|
Приказ от 23 декабря 1998 г. N 213 об утверждении типовых инструкций... Методическими указаниями по разработке правил и инструкций по охране труда, утвержденными Постановлением Министерства труда Российской... |
|
Приказ Минздрава России от 20. 12. 2012 n 1175н (ред от 21. 04. 2016)... Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от... |
|
И атомному надзору приказ Постановлением Правительства Российской Федерации от 6 ноября 1998 г. N 1303 "Об утверждении Положения о декларировании безопасности... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при системной красной волчанке |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ В соответствии с подпунктом 7 Положения о Министерстве здравоохранения Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Федерального закона от 12 апреля 2010 г. N 61-фз "Об обращении лекарственных средств" и подпунктом 171 Положения о Министерстве здравоохранения... |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при окклюзии центральной артерии сетчатки и ее ветвей |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи при остром приступе закрытоугольной глаукомы |
|
Министерство здравоохранения российской федерации приказ Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи детям при юношеском (ювенильном) артрите |
|
Приказ минздрава РФ от 26. 11. 97 №345 о совершенствовании мероприятий... Федеральной целевой программы "Безопасное материнство", утвержденной Постановлением Правительства Российской Федерации от 14. 10.... |
|
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации Верховного Совета Российской Федерации, 1993, n 33, ст. 1318; Собрание законодательства Российской Федерации, 1998, n 10, ст. 1143;... |
|
Приказ Приложение №1 Приложение №2 Приложение №3 Приложение №4 Приложение... Министерство Здравоохранения СССР. Приказ от 3 октября 1990г. №394. "Об утверждении положения о комплексном техническом обслуживании,... |
|
Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации приказ Положения о Министерстве здравоохранения и социального развития Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства... |