Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных


Скачать 2.1 Mb.
Название Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных
страница 7/18
Тип Автореферат
rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Автореферат
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   18

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с июля 2006 по октябрь 2010 г на кафедре микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ; НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (г. Москва) и ООО «НПО «ВЕЛТ» (г. Оренбург). Эксперименты на животных проводили в ООО «Вет Био Сервис» (г. Москва), ООО «Вет Зоо Сервис» (г. Москва), КФХ «Корнево» (Истринский р-н, Московской обл.), в племенном овцеводческом хозяйстве института биотехнологии Национальной академии Кыргызской Республики, в ветеринарном Центре пос. Красково (Люберецкий р-н, Московской обл.), в СХПК «Верещаки», Новозыбковского района, Брянской обл., а также в виварии кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности.

Характеристика препарата Миковелт.

Миковелт – лекарственное противомикробное средство в форме раствора, предназначенное для лечения сельскохозяйственных, мелких домашних, зоо­парковых, лабораторных и экзотических животных, в т.ч. птиц при дермато­микозах и раневых инфекциях, а также для профилактики послеоперацион­ных осложнений и гнойной патологии.

Миковелт содержит в своем составе в качестве действующего вещества клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом (0,1±0,01%), а в ка­честве вспомогательных компонентов изопропиловый спирт (70±3,0%), мети­леновый синий (0,045±0,001%) и дистиллированную воду.

По внешнему виду Миковелт представляет собой не прозрачную жид­кость синего цвета с запахом спирта.

Действующее вещество Миковелта - клатрат дидецилдиметиламмония бромида с карбамидом обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, в т.ч. анаэробных и спорообразующих бактерий (стрептококков, стафилококков, эшерихий, протея, синегнойной палочки, бацилл, клостридий, фузобактерий и др.), а также микроскопических грибов - возбудителей кандидозов и дерматомикозов, в т.ч. трихофитии, микроспории, эпидермофитозе.

Миковелт выпускается в полиэтиленовых флаконах вместимостью 0,1, 0,25 и 0,3 дм3, в т.ч. в беспропеллентной аэрозольной упаковке.

Срок годности препарата составляет 3 года. Средство хранится при температуре от 0° до плюс 50°С.

Животные. Изучение острой и хронической токсичности препарата про­водили на белых беспородных мышах массой 202,0 г, на белых беспородных крысах массой 1905,0 г, морских свинках массой 40050 г, кроликах массой 2,50,3 кг, телятах черно-пестрой породы в возрасте 6 месяцев и собаках разных пород.

Лабораторные животные содержались в виварии кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV групп па­тогенности (лицензия № 77.01.13.001.Л.000172.07.09 от 10.07.2009 г.), на стандартном пищевом рационе в соответствии с «Инструкцией по примене­нию нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях и предприятиях системы здравоохранения» (приказ № 1179 от 10.10.83). Температура воздуха в виварии составляла 20-22С, влажность воздуха 70%. До начала эксперимента животных выдер­живали в условиях карантина в течение 14 сут.

В экспериментах по изучению лечебно-профилактической эффективности Миковелта при дерматомикозах и раневых инфекциях животных были использованы 150 белых мышей, 30 белых половозрелых крыс, 30 морских свинок, 10 кроликов, 27 телят черно-пестрой породы в возрасте 6-8 месяцев, 18 рабочих лошадей, 322 овцы тонко-рунной породы шерстно-мясного направления, 52 собаки и 28 кошек разных пород и возрастов.

Тест-штаммы микроорганизмов. Антимикробную активность препарата Миковелт изучали с использованием следующих культур тест-штаммов микроор­ганизмов:

- Escherichia coli 11229;

- Staphylococcus aureus 6538;

- Pseudomonas aeruginosa 15412;

- Bacillus cereus 10702;

- Clostridium sporogenes 272;

- Candida albicans 10231;

- Trichophyton verrucosum 480;

- Trichophyton violaceum 11;

- Trichophyton mentagrophytes 210;

- Microsporum gypseum 37;

- Microsporum canis 474;

- Microsporon lanosum 22;

- Epidermophyton rubrum 64;

- Aspergillus niger 9642;

- плесневые грибы Cladosporium spp., Mucor spp.

Штаммы микроорганизмов были получены нами из Всероссийской госу­дарственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветери­нарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ), из музея штаммов ГНУ ВИЭВ, кол­лекции штаммов Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ и музея штаммов кафедры микробиологии.

Все штаммы микроорганизмов имели типичные морфологические, био­химические и культуральные свойства.

Питательные среды. Для поддержания, освежения и культивирования тест-штаммов микроорганизмов, а также культур бактерий и грибов, выде­ленных с поверхности кожи экспериментальных животных и из содержимого ран использовали мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), агар и бульон Сабуро, сусло-агар, среду Китта-Тароцци, желточно-солевой агар, среды Эндо и Плоскирева, кровяной агар и др.

Материалы, растворы, реактивы. В работе применяли дистиллированную воду и физиологический раствор.

Концентрацию культур тест-штаммов микроорганизмов определяли с по­мощью стандарта мутности.

Исследования биохимических показателей крови животных проводили с помощью спектрофотометра марки “HUMAN”.

Методы исследований. Исследования проводили в соответствии с Руко­водством по эксперимен­тальному (доклиническому) изучению новых фарма­кологических веществ (издание второе, переработанное и дополненное, 2005), Методическими ука­заниями по изучению противогрибковой активно­сти фармакологических ве­ществ (2000), методическими указаниями «Оценка воздействия вредных хи­мических соединении на кожные пок­ровы и обосно­вание предельно допусти­мых уровней загрязнения кожи» (1980); методиче­скими рекомендациями по оценке иммунотоксических свойств фармакологи­ческих веществ (1992); ме­тодическими указаниями «Порядок экспертизы, клинических испытаний, ре­гистрации отечественных средств и субстанций» (1996); «Санитарно-эпиде­миологические правила» СП 1.3.2322-08; «Биоло­гический контроль безопас­ности лекарственных средств» (1985); «Инстру­ментальные методы химиче­ского анализа» (1989); Госфармакопея XI издания "Методы микробиологиче­ского контроля лекарственных средств"; ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасно­сти труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасно­сти; ОСТ 64-504-96. Контроль качества лекарственных средств на промышленных предприятиях и организациях. Основные положения; ОСТ 42-510-98. Правила организации производства и контроля качества лекарст­венных средств (GMP); ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарст­венных средств; Федеральный закон N 85-ФЗ «О лекарственных средствах».

Антимикробную активность Миковелта изучали in vitro и in vivo.

Антибактериальную активность Миковелта изучали методом серийных разведений в соответствующих для культур тест-штаммов питательных сре­дах и условиях культивирования, а также методом диффузии в агар.

При определении противогрибковой активности Миковелта in vitro пре­парат изучали методом двукратных серийных разведений в жидкой среде Са­буро, а также методом диффузии в агар.

При определении противогрибковой активности Миковелта in vivo эф­фективность препарата изучали на моделях дерматомикозов белых мышей, морских свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Tricho­phyton, Microsporon и Epidermophyton, а также на моделях кандидоза белых мышей и кроликов.

Результаты исследований учитывали по проявлению клинических при­знаков болезни, исследованиям соскобов кожи на наличие грибов, а также с применением люминесцентной лампы со светофильтром Вуда (лампа Вуда).

Все опыты проводили в трехкратной повторности для определения сред­нестати­стических данных.

Для определения острой и хронической токсичности препарат в различ­ных концентрациях вводили животным в желудок, внутрибрюшинно, нано­сили на кожу, на слизистые оболочки и коньюнктиву глаз, воздействовали ингаляционно. Изучали токсическое, местно-раздра­жающее, кожно-резор­бтивное, сенсибилизирующее действие и кумулятивные свойства препарата. Учитывали клинические признаки проявления воздейст­вия препарата на ор­ганизм животных, оценивали изменение гематологиче­ских и биохимических показателей крови до и после постановки опытов.

Лабораторно-экспериментальные испытания антимикробной активно­сти Миковелта in vivo проводили в отношении естественной микрофлоры кожи кроликов, а также тест-штамма E.coli 11229 при искусственной конта­минации кожных покровов животных.

Изучение фармакокинетики и сроков выведения остаточных количеств Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его курсового применения изучали, исследуя молоко коров, а также мясо коров и овец, леченных Миковелтом, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания для молочной и мясной продукции.

Противовоспалительное действие Миковелта определяли методом он­кометрии с использованием белых крыс, а также путем искусственного зара­жения кроликов суспензией культур тест-штаммов E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa 15412 и C.albicans 10231, с последующей обработкой Ми­ковелтом пораженных участков кожи.

Изучение ранозаживляющего действия Миковелта проводили с исполь­зованием белых мышей, кроликов и телят. У кроликов искусственно вызывали абс­цессы подкожной клетчатки путем введения суспензией культур тест-штам­мов E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa 15412 и C.albicans 10231, с по­следующей обработкой Миковелтом пораженных участков кожи. Белым мышам в области спины наносили глубокие царапины инъекционной иглой и втирали в раны суспензию тест-штаммов бактерий. После появления у мы­шей признаков гнойного поражения ран животных лечили Миковелтом.

Морфологию раневого процесса изучали по методу Покровской М.П. и Макарову Ж.С. (6).

Мазки-отпечатки с поверхности ран фиксировали в течение 3-5 мин в спирт-эфире и окрашивали в течение 25-30 мин. по Романовскому.

Процесс эпителизации ран определяли с помощью теста Поповой Л.Н. (75).

Эффективность обеззараживающего действия Миковелта при обра­ботке мест инъекций и операционных полей оценивали в отношении ес­тественной микрофлоры кожи собак и кошек.

Результаты клинических испытаний Миковелта при раневых инфекциях подтверждали данными бактериологических исследований отделяемого содержимого инфицированных ран и абсцессов, общего состояния животных, степени заживления ран и исчезновения признаков воспаления.

Оценку пролонгированного действия Миковелта при обработке кожи проводили в экспериментах на собаках и кошках в отношении естественной микрофлоры кожи.

Для сравнения, в каждой серии опытов формировали контрольные группы животных, которых обрабатывали физиологическим раствором или стерильной водопроводной водой, аналогично с опытными группами животных.

Лечебно-профилактическую эффективность Миковелта при дерматомикозах у животных оценивали в контролируемых опытах на телятах, лошадях, овцах, собаках и кошках. Результаты клинических испытаний Миковелта подтверждали данными микологических исследований соскобов кожи, общего состояния животных и исчезновения клинических признаков дерматомикозов.

Экспериментальные данные обрабатывали методом корреляционного, ва­риационного и факторного статистического анализа с использованием пакета компьютерных программ «Statgraphics Plus for Windous», «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву А.А. (6).
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Определение бактерицидной и противогрибковой

активности Миковелта in vitro
2.2.1.1. Определение бактерицидной активности Миковелта

в отношении тест-штаммов бактерий
Антибактериальную активность Миковелта in vitro оценивали в отноше­нии 48 - часовых культур тест-штаммов - Escherichia coli 11229, Staphylococcus aureus 6538, Pseudomonas aeruginosa 15412, Bacillus cereus 10702, Clostridium sporogenes 272.

Исследования проводили качественными методами: суспензионный, капельный и чашечный (диско-диффузный).

При использовании суспензионного метода при изучении бактерицидной активности Миковелта готовили бактериальные взвеси культур тест-штаммов бактерий с концентрацией не менее 2 млрд. микробных клеток в 1 мл суспензии по стандарту мутности. По 1 мл бактериальной суспензии вносили в пробирки с 5 мл Миковелта и выдерживали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15 и 30 мин. Для контроля взвесь тест-культуры смешивали со стерильной водопроводной водой. Через каждое время экспозиции в пробирку вносили универсальный нейтрализатор и через 10 мин. из бактериальной суспензии с Миковелтом делали посевы в МПБ, на МПА и в среду Китта-Тароцци (для клостридий). Посевы помещали в термостат при 37°С на 48 ч. Затем проводили учет результатов исследований на наличие или отсутствие роста изучаемых культур тест-штаммов бактерий.

При капельном методе определения бактерицидной активности Миковелта на МПА в чашках Петри делали газон из культуры каждого тест-штамма бактерий (для клостридий использовали глюкозно-кровяной агар и культивировали их в анаэростате). На поверхность газона в центре чашки Петри наносили 0,05 мл Миковелта, выдерживали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15 и 30 мин. Затем из места контакта газона бактерий с Миковелтом через определенное время экспозиции делали высев в МПБ с последующим пересевом на МПА (для клостридий – посев в среду Китта-Тароцци с последующим пересевом на глюкозно-кровяной агар). Посевы помещали в термостат при 37°С и проводили учет результатов исследований через 48 часов на наличие или отсутствие роста изучаемых культур тест-штаммов бактерий.

При чашечном (диско-диффузном) методе определения бактерицидной активности Миковелта изготавливали бумажные диски, которые смачивали Миковелтом и высушивали. На МПА в чашках Петри делали газон из культуры каждого тест-штамма бактерий (для клостридий использовали глюкозно-кровяной агар и культивировали их в анаэростате). На поверхность газона в центре чашки Петри наносили бумажный диск с Миковелтом. Посевы помещали на 48 часов в термостат при 37°С, затем определяли зону отсутствия роста тест-штамма вокруг бумажного диска, пропитанного Миковелтом.

Все исследования проводили в трехкратной повторности.

С помощью качественного суспензионного метода было ус­тановлено, что Миковелт вызывает полную гибель культур тест-штаммов бактерий при всех испытуемых экспозициях (табл. 6).
Таблица 6. Бактерицидная активность Миковелта по отношению

к тест-штаммам бактерий (качественный суспензионный метод)


Культура

тест-штамма

Экспери-мент

Экспозиция, мин

1

2

3

5

10

15

30

E.coli 11229

опыт

-

-

-

-

-

-

-

контроль

+

+

+

+

+

+

+

S.aureus 6538

опыт

-

-

-

-

-

-

-

контроль

+

+

+

+

+

+

+

P.aeruginosa 15412

опыт

-

-

-

-

-

-

-

контроль

+

+

+

+

+

+

+

B.cereus 10702

опыт

-

-

-

-

-

-

-

контроль

+

+

+

+

+

+

+

C.sporogenes 272

опыт

-

-

-

-

-

-

-

контроль

+

+

+

+

+

+

+

Примечание: «–» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.
Как следует из данных таблицы, эшерихии, стафилококки, синегнойная палочка, бациллы, кандиды и клостридии погибали в присутствии Миковелта уже через 1 мин. экспозиции. Во всех контрольных пробах наблюдался рост изучаемых культур тест-штаммов бактерий.

При использовании капельного метода определения антимикробной активности, Миковелт оказывал бактерицидное действие на тест-штаммы бактерий в месте контакта при экспозиции 2 мин. в отношении E.coli, S. aureus, P.аeruginosa. Гибель B.cereus и C.sporogenes наступала при 3-минутной экспозиции (табл. 7).

Таблица 7. Бактерицидная активность Миковелта по отношению
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   18

Похожие:

Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Инструкция по применению лекарственного препарата Амоксигард для...
В 1 мл лекарственного препарата в качестве действующего вещества содержится 140 мг амоксициллина (в форме амоксициллина тригидрата)...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения препарата...
Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения препарата...
Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Морфофункциональные изменения в печени при токсическом поражении и при его коррекции
Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Методические указания му 09 Издание официальное Роспотребнадзор Москва...
Организация и проведение дезинфекционных мероприятий при дерматомикозах: Методические указания. – М. Федеральное государственное...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Что делать, если скорая не едет?
Орз и гриппе, многих «детских инфекциях», при бактериальных инфекциях, в том числе при пневмониях и ангинах. Понятно, что решение...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов...
Ситуационные задачи по теме: «сестринское обследование и уход при острых кишечных инфекциях»
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Инструкция по применению препарата асд. Создатель препарата
Препарат асд является жидкостью, приготовленной из тканей животных по особой методике. Асд выпускается в 2 фракциях n 2, n 3
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Разработка и применение лекарственных средств на основе ароксиалканкарбоновой...
Разработка и применение лекарственных средств на основе ароксиалканкарбоновой кислоты
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Рекомендации по безопасному применению кордарона (амиодарона гидрохлорида) Кордарон
Вместе с тем оказалось, что переносимость препарата при его длительном применении оказалась хуже, чем у b–адреноблокаторов и антагонистов...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Инструкция по применению Тилозина 50 и Тилозина 200 при бактериальных инфекциях у животных
Лекарственная форма: раствор для инъекций. Тилозин 50 и Тилозин 200 в 1 мл содержат в качестве действующего вещества тилозина основание...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Клинические рекомендации рациональное использование антибиотиков...
Рациональное использование антибиотиков при инфекциях дыхательных путей в общей врачебной практике
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Инструкция по применению средства гемостатического «Гемоблок» ту 9391-002-68087337-2012
Сочетает гемостатические и антисептические свойства. Применяется при обработке раневых поверхностей при хирургических операциях,...
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Фармако токсикологические свойства минерал сорбента сорби и его применение...

Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Прием (осмотр, консультация) врача-специалиста
Стандарт специализированной медицинской помощи детям при хронических герпесвирусных инфекциях
Антимикробная активность препарата Миковелт и его применение при дерматомикозах и раневых инфекциях животных icon Инструкция по применению Бензилпенициллина натриевой соли для инъекций...
...

Руководство, инструкция по применению




При копировании материала укажите ссылку © 2024
контакты
rykovodstvo.ru
Поиск