При постановке ифа
|
Скачать 463.95 Kb.
|
Подготовка 1. Если в тест-системе используются компоненты, полученные из крови человека, то к таким компонентам следует относиться как к потенциально инфекционным независимо от результатов тестов, которые провел производитель тест-системы. 2. При работе с компонентами набора и исследуемыми образ- цами работать только в перчатках. По окончании работы обяза- тельно тщательно вымыть руки. 12 3. Все исследуемые образцы следует считать потенциально инфекционными. 4. При работе с таблетками ОФД следует использовать толь- ко пластиковые пинцеты или пинцеты с пластиковым покрытием, так как ОФД может реагировать с металлами, что может привести к неправильным результатам. 5. Попадание ОФД в глаза, на кожу или одежду может при- вести к раздражению или аллергической реакции. В случае по- падания ОФД на кожу следует промыть место контакта большим количеством воды. 6. ОФД является свето- и влагочувствительным. Флакон с ОФД следует хранить плотно закрытым. Перед тем, как открыть флакон с ОФД следует довести его до комнатной температуры во избежание конденсации влаги внутри флакона. Не следует ис- пользовать сломанные таблетки ОФД. 7. Для приготовления реагентов следует использовать дис- тиллированную или деионизированную воду. Эту воду следует хранить в неметаллических емкостях. 8. Не следует использовать реагенты из разных серий тест- системы. 9. Все реагенты и компоненты тест-системы должны быть дове- дены перед использованием до комнатной температуры, а после ра- боты должны храниться при температуре от 2 до 8°С. При дробном использовании набора следует сократить до минимума нахождение растворов при комнатной температуре и особенно в открытой посуде. 10. Если производитель использует осушитель, меняющий цвет при насыщении влагой (наиболее распространена смена цве- та с синего на розовый), запрещается использовать планшет в слу- чае достижения осушителем «неправильного» цвета. 11. Не следует использовать реагенты позднее указанного срока годности. 12. Следует предпринять все меры для предотвращения воз- можного перепутывания или перемешивания реагентов (напри- мер, использовать только специально предназначенные и подпи- санные емкости для приготовления реагентов). 13. Перед использованием убедитесь, что растворы и реаген- ты гомогенны. 14. Планшеты (стрипы) можно использовать для постановки ИФА только один раз. 13 15. Перед вскрытием пакета с планшетом его следует выдер- жать при комнатной температуре примерно 30 минут для предо- твращения конденсации влаги на планшете. Если планшет раз- борный, и используются не все стрипы сразу, то после вскрытия оставшиеся стрипы следует поместить в пакет, который необходи- мо закрыть. Распространенный способ – край пакета сворачивается вдвое и зажимается скрепками. Зарубежные фирмы вкладывают в наборы специальные зажимы для этих целей, эти зажимы можно использовать и для укупорки пакетов с планшетами отечественных производителей. Не следует удалять пакетик с влагопоглотителем. Постановка реакции 16. Следует убедиться в том, что исследуемый образец или реагент внесен в лунку. 17. При использовании одноканальной пипетки для внесения испытуемых образцов необходимо использовать новый наконеч- ник для каждого образца. При использовании многоканальной пипетки следует использовать новые наконечники для каждого используемого реагента. 18. Реакция связывания антител с антигенами начинается сразу после внесения сыворотки в лунку, поэтому желательно, по- возможности, уменьшить период между внесением первой и пос- ледней сывороток на планшет. В случае длительного времени вне- сения образцов (например, постановка цельного планшета) реко- мендуется перестановка сывороток, дающих оптическую плотность в ближайшем к серой зоне районе оптических плотностей. 19. Если допущена ошибка при внесении анализируемых образцов (например, 2 сыворотки внесены в одну лунку), нельзя, опорожнив эту лунку, вносить в нее новый образец. Такая лунка бракуется. 20. Не следует допускать подсыхания лунок в период между инкубациями или промывками – возможно образование плохорастворимой пленки на их поверхности. В случае необходимости длительного перерыва следует положить планшет вверх доныш- ками лунок на смоченную водой марлю или фильтровальную бу- магу, в норме – не допускать длительного перерыва. 21. Не следует касаться дна лунок – отпечатки пальцев или перчаток могут привести к неправильной регистрации оптической плотности. 14 22. При использовании стрипов следует работать с обязатель- ной фиксацией стрипов в рамке. Следует осторожно протереть до- нышки лунок с помощью мягкой, не оставляющей волокон салфет- ки (при наличии на донышках капель влаги, пылинок и других загрязнений) до регистрации оптической плотности. 23. В случае получения оптической плотности от контрольных образцов, не попадающей в интервал, описанный в соответствую- щем разделе инструкции, следует считать, что имеются ошибки при подготовке или постановке реакции, либо тест-система непри- годна к применению. 24. Если используется ридер без калибровочного фильтра на 620–630 нм, следует учитывать возможность того, что мутные или загрязненные области планшета могут быть зарегистрированы с завышенным значением реальной оптической плотности. 25. Если производитель не упоминает в инструкции об ис- пользовании калибровочного фильтра, то следует учитывать воз- можность сдвига ОПкрит при некоторых формулах расчета в случае вычета оптической плотности на длине волны калибровочного фильтра (например, если при формуле ОПкрит = ОПК– + 0,2 вычет оптической плотности на длине волны калибровочного фильтра практически не влияет на интерпретацию результатов, так как при незагрязненных донышках от всех значений оптической плот- ности исследуемых образцов и К– отнимается примерно одно и то же число и разница между оптикой К– и исследуемым образцом практически не изменяется, то при формуле ОПкрит = ОПК– × 3 при малых значениях ОПК– можно достаточно далеко отойти от резуль- тата, планируемого производителем, так как от исследуемого образ- ца оптическая плотность на длине волны калибровочного фильтра отнимается один раз, а от ОПкрит отнимается фактически 3 раза). 26. Необходимо сличать полученную распечатку оптической плотности лунок с визуальной оценкой. Возможны искажения ре- альной оптической плотности в результате попаданий соринок в лунку или загрязнений донышка лунки. Особенности работы с конъюгатом Необходимо выделить отдельную посуду и наконечники для работы с раствором конъюгата. Идеальный вариант – использова- ние посуды и наконечников однократного применения. В реальной жизни часто не имеется такой возможности. Если посуда и нако- 15 нечники используются многократно, то при подборе схемы мойки должно быть учтено сильное влияние даже следовых количеств та- ких веществ, как перекись водорода, хлорамин, азид натрия или до- бавки в синтетические моющие средства, на активность конъюгата. Рабочий раствор конъюгата желательно готовить непосредственно перед применением. Промывки Равномерность заполнения и опорожнения всех лунок план- шета контролируют, как правило, визуально в процессе промывки. В идеале – перед промывкой содержимое лунок отсасывается пипеткой или вошером, затем при промывке лунки заполняются до самого верха. При таком способе промывки резко падает вероят- ность появления неправильных результатов, связанных с загряз- нением боковых поверхностей лунок растворами сывороток или конъюгата. Особенно тщательно следует промывать планшет после инку- бации конъюгата. Случай из практики. В одной из лабораторий при работе с тест-системой «РекомбиБест антипаллидум» был слишком высок процент ложноположительных реакций. Выяснилось, что после инкубации конъюгата содержимое лунок удаляли стряхи- ванием планшета, затем проводили промывку, используя ручной вошер, заполняя лунки до уровня не более 200 мкл. При инкубации раствора ОФД в некоторых лунках наблюдалось окрашивание раствора при стекании небольших капель с боковых поверхнос- тей. Окрашивание наблюдалось в месте контакта капель с рас- твором. Переход на отсасывание растворов после инкубации вмес- то стряхивания и увеличение объема промывки до 300 мкл позво- лил избавиться от таких ложноположительных результатов. Разведение сывороток Следует учитывать, что сыворотки и типичные разводящие растворы для сывороток могут различаться по плотности и вязкос- ти. Поэтому при приготовлении разведений их следует тщательно перемешать пипетированием. Случай из практики. При работе с тест-системой ис- пользовалось рабочее разведение сыворотки 1:400. Для получения предварительного разведения 1:20 использовался вспомогательный 16 планшет, в котором 10 мкл сыворотки разводили в 190 мкл рас- твора, далее 10 мкл сыворотки в предварительном разведении переносили в лунки планшета со 190 мкл раствора. Результаты ИФА у двух лаборантов отличались по некоторым сывороткам почти в 5 раз. Выяснилось, что один из лаборантов не перемеши- вал сыворотки в лунках вспомогательного планшета. Сыворот- ка аккуратно добавлялась в раствор, после чего, через некоторое время, также аккуратно отбиралась из того же угла лунки, в который была внесена. Раствор ОФД Основные требования к подготовке раствора ОФД обычно изложе- ны в инструкциях по применению. Для работы с раствором ОФД рекомендуется выделить отде- льную посуду, которую нужно каждый раз ополаскивать 50%-ным раствором спирта и затем дистиллированной водой. Запрещается мыть посуду для ОФД растворами синтетических моющих средств. Также желательно выделить отдельные наконечники для пи- петок, которые будут применяться только для работы с раствором ОФД. Сразу после использования рекомендуется промывать такие наконечники спиртом и дистиллированной водой. Раствор ТМБ В основном требования к работе с ТМБ такие же, как и при ра- боте с ОФД, в той части, которая касается светочувствительности, использования отдельной посуды и ее подготовки, использования отдельных наконечников для дозирования растворов ТМБ в ЦФР. Кроме этого, следует соблюдать следующие правила: 1. Отбор концентрата ТМБ проводить только новыми нако- нечниками. 2. Не использовать посуду и наконечники для отбора раство- ра ТМБ в ЦФР, если они ранее применялись для растворов ОФД, так как даже следовые количества ОФД приводят к неправиль- ным результатам. 3. Составы ЦФР для ТМБ и ОФД различны, поэтому нельзя использовать для разведения ТМБ ЦФР из наборов с комплекта- цией таблетками ОФД и наоборот. 4. В тест-системах с комплектацией ТМБ нельзя использо- вать комплект ЦФР-ОФД из других наборов, это может привести 17 к неправильным результатам, поскольку все компонеты набора подобраны для системы ТМБ-ЦФР. 5. В тест-системах с ОФД и ТМБ обычно используются стоп- реагенты, отличающиеся количеством серной кислоты, поэтому нельзя использовать стоп-реагент из тест-системы с комплекта- цией ОФД для работы с тест-системой, укомплектованной ТМБ. 6. Следует учитывать, что система ТМБ-ЦФР обеспечивает примерно в 10 раз более высокую чувствительность выявления пероксидазы, чем система ОФД-ЦФР, поэтому необходима более тщательная и аккуратная работа во избежание попадания в лун- ки капель растворов, содержащих входящую в состав конъюгатов пероксидазу, с рабочих поверхностей оборудования, перчаток и спецодежды. Признаком такого нарушения правил работы явля- ется спорадическое появление на планшете лунок с более высокой оптической плотностью. Пример из практики. При постановке тест-системы, укомплектованной ТМБ, много ложноположительных результа- тов, при перестановке – то же, воспроизводимость отсутствует. При более тщательной обработке рабочих поверхностей и перча- ток водно-спиртовым раствором, эффект появления невоспроиз- водимых ложноположительных результатов исчез. Учет результатов Следует учитывать, что реакция окисления ОФД при до- бавлении серной кислоты до конца не останавливается. Поэтому нежелательно измерять оптическую плотность лунок позже, чем через 30 минут после добавления серной кислоты в качестве стоп- реагента. Если в инструкции по применению не введено понятие «се- рой зоны», то желательно учитывать возможное влияние ошибок дозирования пипеткой (5%) и измерения оптической плотности спектрофотометром (10%). Таким образом, сыворотки, оптическая плотность которых после постановки ИФА отличается не более, чем на 15% от ОПкрит, следует признавать сомнительными. 18 5. Действия во внештатной ситуации Отказ спектрофотометра Возможная ситуация: необходимо измерить оптическую плот- ность, спектрофотометр не работает, отремонтируют его только за- втра. Если оставить планшет до следующего дня, то произойдет повышение оптической плотности во всех лунках, так как даже при добавлении серной кислоты в раствор ОФД цветная реакция не останавливается полностью. Возможным выходом может стать быстрое заморажива- ние планшета после добавления серной кислоты с последующим быстрым оттаиванием перед измерением оптической плотности. Следует учитывать при этом, что оптическая плотность все-таки возрастает, а относительный прирост сигнала более высок для не- больших значений оптической плотности. На рисунках 1 и 2 приведены графики зависимости относи- тельного роста величины оптической плотности от начальной оп- тической плотности для планшета, помещенного на ночь в моро- зильную камеру бытового холодильника, и для планшета, остав- ленного в темноте на ночь при комнатной температуре. |
Похожие:
 |
Анализ причин приостановки и отказа при постановке земельных участков ... |
 |
Барометрическое нивелирование При надлежащей постановке работ с помощью барометрического нивелирования можно получить также и абсолютные высоты пунктов наблюдения,... |
|
Рекомендации по обнаружению и устранению неисправностей При постановке перемычек с провода Э301 убедиться в отсутст- вии предохранителей аб некалиброванного сечения |
|
Факультет: лпф курс: V Очень часто друзья говорят больному: Как правило, при этой постановке фразы больной за помощью не |
|
Автоматическое складывание зеркал при постановке на охрану Адаптация, в выпадающем длинном списке очень внимательно! ищем строчку (ближе к концу списка) |
|
Порядок заполнения формы «Заявление физического лица о постановке на учет в налоговом органе» Настоящий Порядок заполнения формы «Заявление физического лица о постановке на учет в налоговом органе» (далее в настоящем порядке... |
|
Неотложные заболевания пищевода Кроме того, никто из практических хирургов не скрывает, какие трудности и колебания они испытывают при постановке диагноза и выборе... |
|
Конкурсная документация К на закупку тест-систем для ифа-анализа, реактивов и расходных материалов на 2-е полугодие 2013 года |
|
Конкурсная документация К на закупку тест-систем для ифа-анализа, реагентов, реактивов и расходных материалов на 1-е полугодие 2014 года |
|
Конкурсная документация К на закупку тест-систем для ифа-анализа, реагентов, реактивов и расходных материалов на 2-е полугодие 2014 года |
|
" 21 " августа Набор Иммунофа-тс предназначен для количественного определения содержания тестостерона (ТС) в сыворотке крови человека методом твердофазного... |
|
Порядок заполнения формы Заявление о постановке на учет индивидуального... Порядок заполнения формы «Заявление о постановке на учет индивидуального предпринимателя в качестве налогоплательщика единого налога... |
|
Регламентирующие документы Распоряжение о постановке здания на балансовый учет мук "Вычегодский Дом культуры" |
|
Извещение о проведении запроса котировок на поставку ифа-реактивов Запрос котировок проводится: муз «Вторая городская больница» г. Чебоксары, ул. Гагарина, 53, тел.(8352) 23-48-01, 63-25-37 е-mаil:,... |
|
Инструкция по заполнению учетной формы n 01-тб/У "медицинская карта... ТБ/у заполняется при постановке диагноза "Туберкулез". На случай повторного лечения (рецидив; лечение после неэффективного курса... |
|
Извещение о проведении запроса котировок на поставку ифа-реактивов Запрос котировок проводится: муз «Вторая городская больница» г. Чебоксары, ул. Гагарина, 53, тел.(8352) 23-48-01, 63-25-37 е-mаil:... |