М.В. Мнихович, М.М. Тернов.
ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОКОРТИКОИДОВ НА МОРФОЛОГИЮ, ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ И СОСТАВ ПОПУЛЯЦИИ ФИБРОБЛАСТОВ ОКОЛОПРОТОКОВОЙ СТРОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова
При исследовании влияния глюкокортикоидов на пролиферацию фибробластов в зависимости от условий эксперимента результаты получились различные. Имеются данные о тормозящем влиянии глюкокортикоидов на пролиферацию фибробластов in vitro [5.6.8.10]. Вместе с тем есть данные о том, что гидрокортизон, дексаметазон и другие глюкокортикоиды и их синтетические аналоги in vitro не влияют на репликационный потенциал и численность популяции культивируемых фибробластов или даже усиливают пролиферацию фибробластов [1, 2, 7, 10].
Реакция фибробластов, как и других клеток, на глюкокортикоиды зависит от многих факторов, таких как возраст организма, степень дифференцировки клетки, функциональное состояние ткани и других [3, 4, 7, 8, 9].
В настоящее время показано, что неоднозначность реакции фибробластов на воздействие глюкокортикоидов может быть связана с гетерогенностью этих клеток. Гетерогенность может зависеть от органной специфичности, но даже в одном органе можно выделить линии фибробластов, обладающих разной чувствительностью к глюкокортикоидам [7]. Установлено, что гидрокортизон в физиологических концентрациях стимулирует пролиферацию трех линий фибробластов легких человека, а двух других линий фибробластов легких тормозит. В отношении связывания дексаметазона фибробластами легких и кожи человека проявляется органная специфичность [8, 10].
Нами проведено исследование по изменению состава популяции, ультраструктуры и фиброгенетической активности фибробластов молочной железы молодых и половозрелых белых беспородных самок крыс под влиянием различных доз гидрокортизона, вводившегося 3 раза в неделю от рождении животного до забоя. Экспериментальные животные были разделены на 2 серии: I серия эксперимента - ведение гидрокортизона в дозе 5 мг на 1 кг массы тела и 10 мг/кг массы тела — II серия. После истечения указанных сроков длительности опыта крыс выводили из опыта согласно «Правил проведения работы с использованием экспериментальных животных» и приказу «О гуманном обращении с экспериментальными животными.
Для электронно-микроскопического исследования кусочки паренхимы молочной железы префиксировали в 2,5 % растворе глутарового альдегида, рН 7,3 - 7,4 в течение 4 часов. Постфиксацию проводили в 1% растворе ОsО4 на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4). Дегидратацию материала проводили в батарее с возрастающей концентрации этанола и ацетона. Образцы заключали в заливочную среду, состоящую из смеси аралдита, аралдита М и эпона- 812. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по E. S. Reynolds и просматривали в электронном микроскопе.
У молодых животных (в возрасте 2 нед.) под влиянием высокой дозы гидрокортизона общее число фибробластов достоверно снижается по сравнению с контролем. У животных, получавших горной в дозе 5 мг/кг, число фибробластов достоверно не отличается от контроля. У молодых животных как при действии высокой, так и низкой дозы гидрокортизона значительно снижается число зрелых интенсивно продуцирующих коллаген фибробластов и увеличивается доля фиброцитов и разрушающихся клеток в популяции фибробластов, причем эти, изменения сильнее выражены при действии гидрокортизона в высокой дозе (2 серия эксперимента). Под влиянием низкой дозы гидрокортизона (1 серия) у молодых животных увеличивается доля малодифференцированных фибробластов в популяции. У взрослых животных (2 мес.) введение гидрокортизона в дозе 10 мг/кг вызывает снижение числа фибробластов по строению с уровнем контроля. Инъекции гидрокортизона в дозе 5 мг/кг не вызывает достоверного снижения числа фибробластов в молочной железе. У взрослых животных в I серии эксперимента достоверно снижается в популяции фибробластов доля зрелых интенсивно продуцирующих коллаген форм.
При действии гидрокортизона как в высокой, так и в низкой дозе у крыс в возрасте 2 мес. увеличивается число разрушающихся и малодифференцированных фибробластов.
При действии высокой дозы гидрокортизона у животных обоих исследованных возрастов отмечается снижение всех параметров, характеризующих размеры фибробластов и их органелл. У животных в возрасте 2 мес. в 1 серии опыта наблюдается снижение по сравнению с контролем площади среза цитоплазмы фибробласта, а также протяженности мембран гранулярной эндоплазматической сети на срезе фибробласта. Уменьшение под действием гидрокортизона числа интенсивно продуцирующих коллаген фибробластов и торможение формирования эндоплазматической сети являются причиной снижения волокнообразующей функции фибробластов. В результате этого толщина околопротоковой стромы у молодых животных под действием гидрокортизона уменьшается почти вдвое.
Таким образом, как в дозе 10 мг/кг, так и в дозе 5 мг/кг гидрокортизон оказывает тормозящее влияние на фибробласты околопротоковой стромы молочной железы крыс, развивающейся в постнатальном онтогенезе, однако результаты воздействия различных доз гидрокортизона неодинаковы.
В отличие от высоких доз гидрокортизона, снижающих все количественные показатели фибробластов как у молодых, так и у половозрелых животных, гидрокортизон в дозе 5 мг/кг массы тела оказывает тормозящее воздействие преимущественно на фибробласты молодых животных. При этом особенно характерно снижение числа интенсивно продуцирующих коллаген фибробластов и увеличение доли фиброцитов и разрушающихся клеток в популяции фибробластов. Увеличение числа малодифференцированных клеток под влиянием малой дозы гормона у молодых животных и в обеих сериях эксперимента у взрослых крыс можно расценивать как компенсаторную реакцию на разрушение клеток.
Показателем снижения волокнообразующей активности фибробластов является уменьшение толщины дермы, которое при действии гидрокортизона в высокой дозе отмечается как у молодых, так и половозрелых животных, а в условиях введения гидрокортизона в дозе 5 мг/кг достоверное снижение толщины околопротоковой стромы молочной железы наблюдается только у молодых животных. Обнаруженные вами морфофункциональные изменения фибробластов свидетельствуют о том, что фибробласты молодых животных более чувствительны к действию гидрокортизона.
Таким образом, глюкокортикоиды pегулируют размножение и дифференцировку фибробластов, а также синтез и секрецию ими химических компонентов межклетного матрикса.
ЛИТЕРАТУРА
Бурдина A.M. Влияние нейроэндокринной патологии на состояние женщин репродуктивного возраста // Маммология. 1999. № 1. С. 28-42.
Кухман А.И. Характеристика состояния молочных желез у эндокринных больных до и после лечения // Маммология. 1995. № 4. С. 17.
Старкова Н.Т., Сурков СИ., Назаров A.H. и др. Функциональное состояние гипоталамо-гипофизарной системы при эутиреоидной гиперплазии щитовидной железы // Проблемы эндокринологии. 1991. № 3. С. 6-7.
Тихомиров А.А., Лубнин Д.М. Местные гормональные препараты в лечении доброкачественных заболеваний молочной железы, сопровождающихся масталгией // Рус. мед. журн. 2000. Т. 8. № 18.
Ahomadegbe, J.C., et al. 2000. Loss of heterozygosity, allele silencing and decreased expression of p73 gene in breast cancers: prevalence of alterations in inflammatory breast cancers. Oncogene. 19:5413-5418.
Massague, J. 1998. TGF-beta signal transduction. Annu. Rev. Biochem. 67:753-791.
Jhappan, C., et al. 1993. Targeting expression of a transforming growth factor beta 1 transgene to the pregnant mammary gland inhibits alveolar development and lactation. Embo J. 12:1835-1845.
Pierce, D.F., et al. 1995. Mammary tumor suppression by transforming growth factor beta 1 transgene expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 92:4254-4258.
Pulaski, B.A., Ostrand-Rosenberg, S. 1998. Reduction of established spontaneous mammary carcinoma metastases following immunotherapy with major histocompatibility complex class II and B7.1 cell-based tumor vaccines. Cancer Res. 58:1486-1493
Tang, B., et al. 1998. Transforming growth factor-beta1 is a new form of tumor suppressor with true haploid insufficiency. Nat. Med. 4:802-807.
|
