Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» - страница 4

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология»


НазваниеУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология»
страница4/4
ТипУчебно-методическое пособие
1   2   3   4


Примечание: для устранения погрешности, вносимой дозаторами при смешивании микрообъемов, рекомендуется готовить общую смесь из расчета на одну пробу больше, чем необходимо.


  1. Помещают пробирки, содержащие реакционную смесь, в программируемый термостат (амплификатор) с функцией ПЦР в реальном времени и проводят 30 циклов амплификации нуклеиновой кислоты (ПЦР) по следующей программе (6):


94С - 30 сек. Денатурация

55С - 30 сек. Отжиг праймеров 30 циклов (6)

72С - 30 сек. Элонгация
Обработка результатов ПЦР в реальном времени

  1. Результаты проведенной реакции выводятся на экран монитора в программе к амплификатору в виде кривых плавления и накопления продукта ПЦР (рис.8). Программа так же показывает пороговые циклы реакции, по которым можно оценить количество матрицы в разных образцах относительно друг друга. Чем больше пороговой цикл реакции, тем меньше исходной матрицы присутствовало в образце.

  2. Используя значение Tm и Ct полученные для каждого из образцов определите в какой пробирке находится плазмида pET22b и сравните ее количество с количеством плазмиды pET16b.


Количество циклов
Рис. 8. Кривые накопления флуоресценции


ЗАНЯТИЕ №4. Определение нуклеотидной последовательности ДНК методом Сэнгера на приборе ABI Prism 3130
Необходимое оборудование

  • Автоматические дозаторы переменного объема (от 0,5 до 10 мкл, от 5 до 50 мкл).

  • Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов переменного объема до 200 мкл.

  • Тонкостенные полипропиленовые пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл.

  • Полипропиленовые центрифужные пробирки объемом 1,5 мл.

  • Штативы для пробирок объемом 1,5 мл и 0,2 мл.

  • Емкость для сброса наконечников.

  • Микроцентрифуга до 14,5 тыс об/мин, вортекс.

  • Программируемый амплификатор с термостатируемой крышкой.

  • Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100оС.

  • Одноразовые перчатки.

  • Перманентный маркер.

  • Скальпель.


Необходимые реагенты

  • Набор реагентов ABI PRISM BigDye Terminator v.3.1.

  • Праймер в концентрации 3,2 пМ.

  • Бидистиллированная вода, свободная от нуклеаз.

  • Набор реагентов для экстракции ДНК.

  • Изопропиловый спирт (изопропанол).

  • Этиловый спирт (этанол) в концентрации 70%.

  • Ацетат натрия 3М, рН 5,2.

  • Формамид.


Ход работы

Выделение и очистка ДНК – один из важнейших этапов секвенирования, т.к. качество и чистота препарата ДНК определяют успешный исход секвенирования. Ниже перечислены шаги для очистки ПЦР-продуктов, для экстракции плазмидной ДНК следует перейти к шагу 4.

  1. Нарабатывают фрагмент ДНК ПЦР в объеме 25 мкл и оценивают качество (отсутствие неспецифических продуктов ПЦР) ампликонов методом электрофореза, внося в лунки агарозного геля индивидуальными наконечниками по 5 мкл ПЦР-продукта.

  2. Приготавливают 1% агарозный гель, в лунки которого вносят индивидуальными наконечниками весь имеющийся объем ПЦР-продукта (приблизительно 20 мкл) и проводят электрофорез.

  3. После электрофореза помещают гель на окно трансиллюминатора и закрывают защитный пластиковый экран. Включают прибор для визуализации фрагментов ДНК. Вырезают скальпелем искомый фрагмент ДНК, как можно меньше захватывая при этом «пустой» участок геля, и помещают кусок геля в пробирку объемом 1,5 мл.

  4. Проводят процедуру экстракции ДНК с использованием коммерческого набора реагентов согласно инструкции производителя.

  5. Оценивают качество (отсутствие неспецифических фрагментов ДНК) и относительное количество (яркость светящейся полосы) очищенной ДНК методом электрофореза, внося в лунки агарозного геля индивидуальными наконечниками по 5 мкл препарата ДНК.


Терминирующая реакция. Проводят ПЦР в объеме 10 мкл согласно общим принципам постановки ПЦР, исключение составляет использование в одной реакции только одного праймера, в одноразовых пробирках объемом 0,2 мл в программируемом амплификаторе с термостатируемой крышкой.

  1. Используя индивидуальные наконечники для каждого компонента реакции, собирают смесь в отдельной пробирке, за исключением препарата ДНК, из расчета на одну пробу:

BigDye® Terminator v3.1 Ready Reaction Mix – 1 мкл*

Sequencing Buffer 5х – 2 мкл

Праймер (прямой или обратный) 3,2 пМ – 0,5 мкл

Бидистиллированная вода – 1,5 мкл

* BigDye® Terminator v3.1 Ready Reaction Mix следует держать в темноте, т.к. он содержит ддНТФ, помеченные флуоресцентными красителями.

  1. Аккуратно перемешивают собранную смесь на вортексе и кратковременно центрифугируют (5 сек.).

  2. В одноразовые пробирки вносят по 5 мкл реакционной смеси, закрывают крышки и маркируют.

  3. Используя отдельные наконечники для каждого образца, в реакционную смесь вносят 5 мкл препарата ДНК.

  4. Перемешивают компоненты на вортексе и кратковременно центрифугируют (5 сек.).

  5. Помещают пробирки в программируемый амплификатор с термостатируемой крышкой и проводят 25 циклов амплификации ДНК по следующей программе (7):

96оС – 5 мин.

96оС – 10 сек.

50оС – 5 сек. 25 циклов (7)

60оС – 4 мин.

72оС – 7 мин.

4оС

  1. Продукты секвенирующей ПЦР используют для последующей очистки меченных флуоресцентными красителями фрагментов ДНК.


Очистка ДНК

  1. В штатив расставляют пробирки объемом 1,5 мл в количестве равном количеству секвенируемых образцов, и маркируют их.

  2. Используя отдельный для каждого компонента наконечник, в пробирку вносят 2 мкл 3М ацетата натрия и 50 мкл изопропанола.

  3. Используя индивидуальный для каждого образца наконечник, переносят в пробирку с реакционной смесью весь объем ПЦР-продукта (10 мкл).

  4. Перемешивают компоненты на вортексе и центрифугируют 15 мин. при 14,5 тыс. об/мин

  5. Аккуратно удаляют супернатант, используя автоматический дозатор и отдельный наконечник для каждого образца.

  6. В пробирки вносят по 250 мкл 70% этанола, закрывают крышки и центрифугируют 5 мин. при 14,5 тыс. об/мин

  7. Аккуратно удаляют супернатант, используя автоматический дозатор и отдельный наконечник для каждого образца.

  8. Подсушивают осадок до исчезновения запаха спирта (10-15 мин.), оставив пробирки в штативе или в термостате при 37оС, при этом крышки пробирок должны быть открыты.

  9. В пробирки вносят 20 мкл формамида и закрывают крышки.

  10. Перемешивают компоненты на вортексе и кратковременно центрифугируют (5 сек.).

  11. Помещают пробирки в термостат, предварительно нагретый до 95оС, и инкубируют 5 мин.

  12. Проводят секвенирование денатурированных фрагментов ДНК в приборе ABI Prism 3130 согласно инструкции производителя.


Анализ результатов секвенирования

  1. Полученную нуклеотидную последовательность проверяют на правильность считывания прибором нуклеотидов (инсерции/делеции, наличие гетерозигот). Для этого анализируют электрофореграмму сначало в ручном режиме (рис. 9), затем с использованием возможностей сети Интернет.

  2. В компьютер загружают страницу официального сайта BLAST (Basic Local Alignment Search Tool, поисковый инструмент базового локального выравнивания) - семейство компьютерных программ, служащих для поиска гомологичных нуклеотидных или аминокислотных последовательностей нуклеиновых кислот и белков, соответственно (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).

  3. Выбирают программу анализа нуклеотидных последовательностей -nucleotide blast.

  4. В окно Enter Query Sequence вставляют исследуемую нуклеотидную последовательность.

  5. Нажимают BLAST.

  6. Просматривают отчет BLAST, где указываются близкородственные последовательности в графическом виде и в формате таблицы. В строках таблицы указываются найденные гомологичные последовательности, в столбцах – процент их идентичности, рассчитанные значения, дающие оценку статистической значимости полученных результатов, и номер последовательности в GenBank.


Рис. 9. Электрофореграмма ДНК
Каждому пику соответствует определенная буква. Чем выше пик, тем больше вероятность правильного считывания нуклеотида. Достоверность считывания показана столбиками вверху электрофореграммы, цифры показывают количество прочитанных нуклеотидов. Так, например, в позиции 35 показана ошибочно определенная гетерозигота, в позиции 140 –истинная гетерозигота.



  1. Проводят детальный анализ сравниваемых последовательностей, переходя в раздел Alignments, где показано выравнивание исследуемой нуклеотидной последовательности (Query) с гомологичной (Sbjct), идентичность последовательностей и наличие пробелов (gaps) в последовательностях.

Дальнейший анализ обнаруженных генетических изменений проводят с использованием баз данных, находящихся в свободном доступе в сети Интернет. Например, в молекулярно-генетической диагностике, в определении наследственных нарушений, а также в научных исследованиях частот аллельных вариантов и описания зависимости генотип-фенотип наиболее часто используют следующие базы данных: GeneTests (www.genetests.org); Online Mendelian Inheritance in Man (www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim); locus specific databases (LSDBs) расположенной на сайте Human Genome Variation Society (HGVS) (www.HGVS.org/dblist.html); Database E of Chromosome Imbalance and Phenotype in Humans с использованием Ensembl Resources (http://decipher.sanger.ac.uk); EntrezGene (ncbi.nlm.nih.gov/gene); dbGap: Database of Genotype and Phenotype (ncbi.nlm.nih.gov/dbgap); и Human Gene Mutation Database HGMD ® (http://www.hgmd.org).
ЗАНЯТИЕ №5. Определение количественного содержания IL-5 в сыворотке мыши методом ИФА

IL-5 мыши представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 45-60 кДа и является фактором, необходимым для возобновления T-клеток и роста В-клеток. Данный цитокин активирует пролиферацию В-клеток и синтез ими иммуноглобулинов. В качестве функций IL-5, кроме того, были описаны индукция роста и дифференцировки эозинофилов и экпрессии IL-2R, как на нормальных, так и на активированных В-клетках селезенки, а также увеличение секреции IgA В-клетками, стимулированными бактериальным липополисахаридом. Предполагается также, что данный цитокин играет важную роль в функционировании мышиных TН2.

Целью работы является количественное определение содержания IL-5 в сыворотке мыши при помощи метода ИФА.
Необходимое оборудование

  • Одноканальные автоматические дозаторы переменного объема (от 20 до 200 мкл, от 5 до 50 мкл).

  • Многоканальные автоматические дозаторы переменного объема (от 50 до 300 мкл).

  • Пластиковые ванночки для многоканальных дозаторов.

  • Пластиковые пробирки типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл.

  • Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов переменного объема до 200 мкл.

  • Термостат.

  • Вошер.

  • Ридер.

  • Емкость для сброса наконечников.

  • Одноразовые перчатки.

  • Перманентный маркер.

  • Пленка для заклеивания планшета.

  • Пинцет.


Необходимые реагенты

Набор реагентов Thermo Scientific «Mouse IL-5 ELISA Kit» следующего состава:

  • Полистироловый 96-луночный ИФА-планшет с сорбированными на нем антителами к IL-5 мыши.

  • Лиофилизированный рекомбинантный стандарт, содержащий Il-5 мыши.

  • Раствор для разведения образцов.

  • Промывочный раствор (30X).

  • Конъюгат антител к IL-5 мыши с пероксидазой хрена.

  • Субстратный раствор, содержащий тетраметилбензидин.

  • Стоп-реагент, содержащий 0,16М серную кислоту.


Ход работы

  1. Готовят рабочий промывочный раствор. Для этого 50 мл 30X-концентрата разбавляют бидистиллированной водой до объема, равного 1,5 л.

  2. Готовят рабочее разведение стандарта 320 пг/мл. Для этого в емкость, содержащую лиофилизированный реагент, добавляют бидистиллированную воду до метки.

  3. Готовят калибровочные растворы. Для этого берут три пластиковые пробирки объемом 1,5 мл и вносят в них по 600 мл бидистиллированной воды. Затем в первую пробирку вносят 200 мкл раствора стандарта и тщательно перемешивают. Далее отбирают из первой пробирки 200 мкл раствора и переносят во вторую. При этом получаются разведения 80 и 20 пг/мл соответственно. В третьей пробирке оставляют бидистиллированную воду, которая также является калибровочным раствором c концентрацией 0 пг/мл.

  4. С помощью многоканального дозатора в лунки планшета вносят по 50 мкл раствора для разведения образцов.

  5. С помощью одноканального дозатора вносят по 50 мкл калибровочных растворов или исследуемых образцов и перемешивают, аккуратно встряхивая планшет.

  6. Заклеивают планшет пленкой и инкубируют в термостате при 37ºС в течение 2 часов.

  7. Промывают планшет 5 раз рабочим промывочным раствором с помощью вошера.

  8. Вносят в лунки по 100 мкл конъюгата.

  9. Заклеивают планшет и инкубируют в термостате при 37ºС в течение 1 часа.

  10. Промывают планшет 5 раз.

  11. Вносят в лунки по 100 мкл субстратного раствора.

  12. Инкубируют планшет в темноте при 20-25ºС в течение 30 минут.

  13. Вносят в лунки по 100 мкл стоп-реагента.

  14. Производят измерение оптической плотности на ридере при 450 нм.

  15. По калибровочной кривой определяют количественное содержание IL-5 в исследуемых образцах.


ЛИТЕРАТУРА


  1. Анализ генома. Методы / под ред. К. Дейвиса. – М.: Мир, 1990. – 248 с.

  2. Богданов, А.А. Власть над геном / А.А. Богданов, Б.М. Медников. М.: Просвещение, 1989. 208 с.

  3. Гааль, Э. Электрофорез в разделении биологических макромолекул / Э. Гааль, Г. Медьеши, Л. Верецкеи. – М.: Мир, 1982. 446 с.

  4. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Д. Пастернак – Пер. с англ. – М.: Мир, 2002. – 589 с.

  5. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс. – М.: Мир, 1991. 544 с.

  6. Корниенко, И.В. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел / И.В. Корниенко, Д.И. Водолажский, В.П. Вейко [и др.]; Под ред. П.Л. Иванова. – Ростов н/Д, 2001. – 256 с.

  7. Новиков, В.В. Иммунология: Учебное пособие / В.В. Новиков,

Н.А. Добротина, А.А. Бабаев. – Нижний Новгород: ННГУ им. Н.И. Лобачевского, 2004. – 212 с.

  1. Остерман, Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот / Л.А. Остерман. – М.: Наука, 1981. 288 с.

  2. Плазмиды. Методы / под редакцией К.Харди. – М.: Мир, 1990. 267 с.

  3. Ребриков, Д.В. ПЦР в реальном времени / Д.В. Ребриков, Г.А. Саматов, Д.Ю. Трофимов. – 4-е изд. – М.: БИОМ. Лаборатория знаний, 2013. – 223 с.

  4. Чемерис, А.В. Секвенирование ДНК / А.В. Чемерис, Э.Д. Ахунов, В.А. Вахитов. М.: Наука, 1999. 427 с.

  5. Viljoen, G.J. Molecular diagnostic PCR handbook / G.J. Viljoen, L.H. Nel, J.R. Crowther. – Netherlands.: Springer, 2005. – 307 p.

  6. Алексеева, А.Е. Возможности и перспективы применения методов массивного параллельного секвенирования в диагностике и эпидемиологическом надзоре за инфекционными заболеваниями (аналитический обзор) / А.Е. Алексеева, Н.Ф. Бруснигина // Медиаль. – 2014. – №2 (12). – С. 6–28.

  7. Антонова, О.С. Эффективные методы выделения нуклеиновых кислот для проведения анализов в молекулярной биологии (обзор) / О.С. Антонова, Н.А. Корнева, Ю.В. Белов [и др.] // Научное приборостроение. – 2010. – Т. 20, № 1. – С. 3–9.

  8. Ведерников, В.Е. Сравнительная характеристика способов экстракции нуклеиновых кислот / В.Е. Ведерников // Лаборатория. – 2012. – № 4. – С. 14–15.

  9. Каледин, А.С. Выделение и свойства ДНК-полимеразы из экстремально-термофильной бактерии Thermus aquaticus YTI / А.С. Каледин, А.Г. Слюсаренко, С.И. Городецкий // Биохимия. – 1980. – T. 45. – №4. – C. 644–651.

  10. Календарь, Р.Н., Сиволап, Ю.М. Полимеразная цепная реакция с произвольными праймерами // Биополимеры и клетка. – 1995. – Т. 11. – №3–4. – С. 55–65.

  11. Краснов, Я.М. Современные методы секвенирования ДНК (обзор) / Я.М. Краснов, Н.П. Гусева, Н.А. Шарапова, А.В.Черкасов // Проблемы особо опасных инфекций. – 2014. – Вып. 2. – С. 73–79.

  12. Bhalla, N. Microfluidic Platform for Enzyme-Linked and Magnetic Particle-Based Immunoassay / N. Bhalla, D.W.Y. Chung, Y.E. Chang // Micromachines. – 2013. – V.4. – P. 257–271.

  13. Boom, R. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids / R. Boom, C.J. Sol, M.M. Salimans [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 1990. – V. 28. – P. 495–503.

  14. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi // Anal. Biochem. – 1987. V. 162. – P. 156–159.

  15. Ku, C.S. The evolution of high-throughput sequencing technologies: from Sanger to single-molecule sequencing / C.S. Ku, Y. Pawitan, M. Wu [et al.]; W. Wu, H. Choudhry eds. Next generation sequencing in cancer research: Volume 1: decoding the cancer genome. – New York: Springer Science+Business Media, 2013. – P. 1–30.

  16. Walsh, P.S. Chelex 100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR Based Typing from Forensic material / P.S. Walsh , D.A. Metzger, R. Higuchi // Biotechniques. – 1991. – V. 10. – N 4. – P. 506–513.


Пособие к практическим занятиям

по молекулярной биологии.

Часть 2. методы молекулярной диагностики
Авторы:

Алексей Дмитриевич Перенков

Дмитрий Викторович Новиков

Светлана Григорьевна Фомина и др.


Учебно-методическое пособие


Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение высшего образования

«Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского».

603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23.
Подписано в печать . Формат 60х84 1/16.

Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура Таймс.

Усл. печ. л. . Уч.-изд. л.

Заказ № . Тираж 200 экз.

Отпечатано в типографии Нижегородского госуниверситета

им. Н.И. Лобачевского

603600, г. Нижний Новгород, ул. Большая Покровская, 37




1   2   3   4

Похожие:

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов бакалавриата, обучающихся по направлению 38. 03. 01 «Экономика» в Институте...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
А-64 Ангелова О. Ю., Дмитриева Е. М. Маркетинг. Рабочая тетрадь.– Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2014. – 97 с

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
А-64 Ангелова О. Ю., Дмитриева Е. М. Маркетинг. Рабочая тетрадь.– Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2014. – 97 с

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Нижегородский государственный...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconКоммерция Практикум
Рекомендовано методической комиссией филологического факультета для студентов спо ннгу им. Н. И. Лобачевского, обучающихся по направлению...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconРуководство к решению задач часть II случайные величины учебно-методическое...
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconНнгу, обучающихся по направлению подготовки 080800 «Прикладная информатика...
Рекомендовано методической комиссией факультета вычислительной математики и кибернетики для студентов ннгу, обучающихся по направлению...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconПособие для преподавателей русского языка, ведущих занятия с иностранными...
Рекомендовано методической комиссией филологического факультета для слушателей подготовительного отделения факультета иностранных...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconПроектирование деталей
Рекомендовано методической комиссией физического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлениям подготовки 210100 «Электроника...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
Учебно-методическое пособие предназначено для организации активной самостоятельной работы студентов над учебным материалом при изучении...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией...
Учебно-методическое пособие предназначено для организации активной самостоятельной работы студентов над учебным материалом при изучении...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconН. Г. Титова Т. П. Логинова экономик а учебное пособие
Рекомендовано ученым советом факультета Физической культуры и спорта для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconМетодические указания к выполнению лабораторных работ по спецкурсу...
Рекомендовано методической комиссией факультета вмк для студентов ннгу, обучающихся по направлениям подготовки 010500 «Прикладная...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconУчебное пособие Рекомендовано методической комиссией института экономики...
Национальный исследовательский нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconМетодические рекомендации по дисциплине «Организационное поведение»
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов и слушателей ннгу, обучающихся по направлению подготовки 38. 03. 02 «Менеджмент»...

Учебно-методическое пособие Рекомендовано методической комиссией биологического факультета для студентов ннгу, обучающихся по направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» iconМетодические указания по выполнению самостоятельной работы по дисциплине «Русский язык»
Рекомендовано методической комиссией института экономики и предпринимательства для студентов ннгу, обучающихся по


Руководство, инструкция по применению




При копировании материала укажите ссылку © 2018
контакты
rykovodstvo.ru
Поиск