Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств.


Скачать 0.8 Mb.
Название Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств.
страница 1/7
Тип Автореферат
rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Автореферат
  1   2   3   4   5   6   7


На правах рукописи

АДИЕВА АЙНА АХМЕДОВНА

РОЛЬ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ В ПАТОЛОГИИ ПЛОДА И НОВОРОЖДЕННОГО. ПОИСК НОВЫХ ПРОТИВОВИРУСНЫХ СРЕДСТВ.

03.00.06. – Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Москва - 2009 г.



Работа выполнена в Учреждении РАМН НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН


Научные консультанты:

доктор биологических наук, КУЩ

профессор Алла Александровна

доктор медицинских наук, НИСЕВИЧ

профессор Лика Львовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, МИЛЛЕР

профессор Галина Генриховна

доктор биологических наук БРАГИНА

профессор Елизавета Ефимовна

доктор медицинских наук, ЧЕШИК

профессор Святослав Георгиевич

Ведущая научная организация: НИИ переливания крови Научного гематологического центра РАМН

Защита состоится «___» _______________ 2009 г. в ____часов на заседании Диссертационного Совета Д.001.020.01 при Учреждении РАМН НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН по адресу: 123098 Москва, ул. Гамалеи, д.16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при Учреждении РАМН НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Автореферат диссертации разослан «___» __________ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, БУРЦЕВА

доктор медицинских наук Елена Ивановна

Список использованных сокращений


АГ – антиген

АПФ – аминокислотные производные фуллерена С60

АТ – антитело

БКМ – быстрый культуральный метод

БОЕ – бляшкообразующая единица

ВКЖ – вируссодержащая культуральная жидкость

ВПР – врожденные пороки развития

ВУИ – внутриутробное инфицирование

ГВИ – герпесвирусные инфекции

ГЦВ - ганцикловир

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота

ИА – индекс авидности

ИППП – инфекции, передаваемые половым путем

ИФА – иммуноферментный анализ

ИФН – интерферон

МИ – множественность инфицирования

МКА – моноклональные антитела

ОАГА – осложненный акушерско-гинекологический анамнез

ПСА – поликлональные антитела

ПЦР – полимеразная цепная реакция

ПЦР – IS - полимеразная цепная реакция in situ

ПЦР – RT - полимеразная цепная реакция с детекцией в реальном времени

РИФ (РНИФ) – реакция прямой (непрямой) иммунофлюоресценции

УФ - ультрафиолет

ФЛЭЧ – фибробласты легкого эмбриона человека

ХТИ – химиотерапевтический индекс

ЦД – цитотоксическая доза

ЦМВ – цитомегаловирус человека

ЦМВИ – цитомегаловирусная инфекция

ЦНС – центральная нервная система

ЦПД – цитопатическое действие

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы.

Внутриутробная инфекция (ВУИ) занимает одно из ведущих мест в структуре перинатальной смертности, являясь основной причиной смерти или осложняя течение основного заболевания у 37,5% умерших новорожденных [Цинзерлинг и др., 2002]. Достоверных данных об истинной распространенности ВУИ нет, однако согласно данным ряда исследователей, инфекционные заболевания выявляют у 50-60% госпитализированных доношенных и 70% недоношенных новорожденных [Володин и др., 2004; Сидорова и др., 2006].

Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) является одной из наиболее распространенных внутриутробных инфекций, вызывающих тяжелые патологии, вплоть до гибели ребенка [Gibson et.al., 2008; Kenneson et.al., 2007; Kriebs et.al., 2008].

Прогресс в изучении ЦМВИ связан с разработкой и широким внедрением в практику здравоохранения принципиально новых диагностических технологий – высокочувствительных и специфичных методов иммунохимии, молекулярной и клеточной биологии. В связи с этим оценка эффективности современной специфической диагностики ЦМВИ приобретает особую актуальность.

Трудности анте - и постнатальной диагностики ЦМВИ связаны с неоднозначностью возможной реализации инфекционного процесса из-за особенностей иммунной системы новорожденных и неспецифичностью клинических проявлений. Несмотря на многочисленные исследования, посвященные этой проблеме, устоявшихся канонов пренатальной диагностики ЦМВИ в мире не существует. Разработка четких и общепринятых рекомендаций по лабораторному обследованию недоношенных новорожденных с сочетанной перинатальной патологией с подозрением на ЦМВИ и в России остается нерешенной задачей. Высокая инфицированность недоношенных новорожденных детей ЦМВ ставит вопрос о своевременной диагностике ЦМВИ у беременных женщин и о вертикальной передаче вируса. В связи с этим тактика ведения беременных женщин с высоким риском инфицирования плода должна включать эффективную диагностику и своевременное начало лечения ЦМВИ.

На клеточном уровне цитопатический эффект ЦМВ проявляется в изменении морфологии клетки и ядра (увеличение размера, изменение формы), в образовании многоядерных клеток и в появлении внутриядерных включений [Mocarski et.al., 2001]. В связи с этим, исследования, направленные на анализ действия ЦМВ на клеточную пролиферацию, вызывают особый интерес. Так, группой авторов было показано, что ЦМВ стимулирует репликацию клеточной ДНК в зараженных клетках [Hume et.al., 2008; Kalejta et.al., 2003; McElroy et.al, 2000; Prichard et.al., 2008], описывалось существенное возрастание митотического индекса в инфицированной культуре [Sanchez et.al., 2003; Tran et.al., 2008; Wiebusch et.al., 2005]. Позже появились работы, опровергающие эти данные. Было показано, что вирус может блокировать прохождение клеточного цикла клетками в нескольких точках, включая переход из G1 – периода в фазу синтеза ДНК [Lu and Shenk, 1999; Murphy et.al., 2000; Sinclar et.al., 2000] и переход из стадии G2 в М, в точке, обозначаемой как G2/М [Castillo et.al., 2005; Lu and Shenk, 1999; Sanchez et.al., 2006]. Таким образом, данные о влиянии ЦМВ на клеточную пролиферацию оказались противоречивыми и требовали дальнейшего исследования.

Фундаментальные данные о влиянии ЦМВ на клеточные структуры и жизненный цикл клетки необходимы для понимания процессов, приводящих к патологии при внутриутробном развитии детей и их гибели, а также для выбора адекватной терапевтической тактики новорожденных с ЦМВИ. Существующие на сегодняшний день единичные патентованные препараты, обладающие противовирусной активностью в отношении ЦМВ, не применяются у новорожденных и детей раннего возраста вследствие их высокой токсичности. Кроме того, эффективность лечения существующими препаратами снижена из-за развития лекарственной устойчивости, часто возникающей при длительном применении [Biron et.al., 2006; Chou et.al., 1999]. Поэтому поиск эффективных и нетоксичных анти-ЦМВ агентов, перспективных в качестве химиотерапевтических средств при ЦМВИ, остается важной проблемой. Все вышеизложенное в совокупности явилось обоснованием для проведения данного исследования.

Цель исследования.

Цель настоящей работы состояла в изучении маркеров ЦМВИ у недоношенных новорожденных детей с сочетанной перинатальной патологией в течение первого года жизни и в материалах аутопсии; мониторинга метаболической и иммунной терапии; в изучении антивирусной активности аминокислотных производных фуллерена С60; в исследовании действия ЦМВ жизненный цикл инфицированных клеток.

Для достижения поставленной цели ставились следующие задачи:

  1. Выявить прямые (ДНК и инфекционная активность) и непрямые маркеры (специфические IgM, IgG и индекс авидности IgG антител) ЦМВИ у недоношенных новорожденных детей и изучить динамику их выявления в течение первого года жизни.

  2. Установить возможность выявления инфекционно - активного ЦМВ с помощью быстрого культурального метода (БКМ) в материалах аутопсии плодов, умерших новорожденных и детей, умерших на первом году жизни.

  3. Разработать метод ПЦР in situ для выявления ДНК ЦМВ на отпечатках различных органов. Оценить эффективность использования четырех методов лабораторной диагностики при детекции ЦМВ в материалах аутопсии.

  4. Установить частоту выявления ЦМВ у беременных из группы высокого риска по перинатальному инфицированию плода и новорожденного. Оценить эффективность использования метаболических препаратов в предгравидарной подготовке и во время беременности.

  5. Оценить эффективность использования Виферона у беременных с ОАГА со второго триместра беременности и у недоношенных детей с клиническими проявлениями ВУИ.

  6. Изучить цитотоксичность и антивирусную активность аминокислотных производных фуллерена С60 (АПФ) на модели экспериментальной ЦМВИ in vitro. Сравнить эффективность указанных соединений при использовании лечебной, профилактической и вирулицидной схем воздействия. Оценить сочетанный эффект АПФ и Виферона и продукцию вируса под действием АПФ.

  7. Изучить изменение пролиферативной активности в асинхронно - делящейся и синхронизированной культуре фибробластов легкого эмбриона человека (ФЛЭЧ) под влиянием ЦМВ. Определить способность клеток ФЛЭЧ, инфицированных в разные периоды клеточного цикла, вступать в митоз.

  8. Оценить развитие патологии митоза при инфицировании ЦМВ в присутствии ингибитора репликации вирусной ДНК и при инфицировании ЦМВ инактивированным УФ.

Научная новизна.

  1. Впервые разработан и использован алгоритм комплексного обследования недоношенных новорожденных с клиническими признаками ВУИ вирусологическими методами (БКМ) и с помощью генодиагностики (ПЦР, ПЦР - real time) для выявления возбудителей герпесвирусных инфекций.

  2. Впервые разработан метод ПЦР in situ для выявления ДНК ЦМВ на отпечатках и парафиновых срезах органов мертворожденных и детей, умерших на первом году жизни, который сочетает морфологический и молекулярный подходы и позволяет не только выявлять внутриклеточную вирусную ДНК в инфицированных клетках, но и оценить её сравнительное количество.

  3. Впервые установлено, что в материалах аутопсии плодов (мертворожденных) и умерших новорожденных чаще определяется инфекционно активный ВПГ, а у детей, умерших на первом году жизни – инфекционно активный ЦМВ.

  4. Впервые показана низкая цитотоксичность и высокая антивирусная активность аминокислотных производных фуллерена С60 – натриевой соли аминокапроновой кислоты (С60-Na-АКК) и натриевой соли аминомасляной кислоты (С60-Na-АМК); химиотерапевтический индекс в различных схемах воздействия для С60-Na-АКК равен 260-2600; для С60-Na-АМК – 2500-5450.

  5. Впервые установлено, что в клетках, инфицированных в S-фазе клеточного цикла, удлиняется период синтеза ДНК, при этом клетки сохраняют способность вступать в митотическое деление. Остановка деления происходит в метафазе митоза.

  6. Впервые показано, что патология митоза развивается в одинаковой степени в клетках, инфицированных интактным вирусом, при подавлении репликации ДНК ЦМВ, а также при заражении ЦМВ, инактивированным УФ облучением.

Практическая значимость.

На основании полученных данных о распространенности цитомегаловирусного инфицирования среди недоношенных детей с сочетанной перинатальной патологией представлено обоснование для организации лабораторного скрининга в отделениях реанимации и интенсивной терапии.

Установлено, что для достоверной диагностики ЦМВИ у недоношенных новорожденных и детей раннего возраста необходимо использование БКМ и ПЦР для исследования различных биологических жидкостей (кровь и моча). Серологические методы диагностики у недоношенных детей, родившихся с низкой и экстремально низкой массой тела, рекомендованы для уточнения фазы течения инфекции. Показана эффективность определения авидности анти-ЦМВ.

Впервые при изучении динамики маркеров ЦМВИ у недоношенных новорожденных детей в течение первого года жизни доказана необходимость проведения неоднократного вирусологического обследования недоношенных новорожденных с низкой и экстремально низкой массой тела до года.

У недоношенных детей, родившихся с низкой и экстремально низкой массой тела, с клиническими признаками врожденной инфекции обосновано использование Виферона с первых дней жизни.

Применение Виферона у беременных со второго триместра беременности показало возможность более ранней антенатальной коррекции иммунопатологических состояний плода и отсутствие и/или снижение количества рецидивов ГВИ у беременных с ОАГА.

Предложен новый современный метод диагностики аутопсийного материала и плацент – ПЦР in situ, позволяющий оценить количество внутриклеточной ДНК и тканевую тропность, что особенно важно в изучении патогенеза ЦМВИ. Сравнительная оценка различных методов лабораторной диагностики при анализе структуры перинатальной патологии и смерти способствует совершенствованию организации лабораторно-клинического обеспечения мониторинга перинатальных потерь, этиологически связанных с герпесвирусами, а также повышению достоверности оценки их роли в перинатальной патологии и разработке на их основе адекватных лечебных и профилактических мер по снижению удельного веса ВУИ.

Внедрение результатов исследования в практику здравоохранения.

Результаты работы стали основой ряда документов, применяющихся в практическом здравоохранении: Методические рекомендации «Быстрый культуральный метод диагностики герпесвирусных инфекций», Роспотребнадзор. - №02.030-08. – Москва, 2008.

Методические рекомендации по использованию Виферона у недоношенных новорожденных с клиническими признаками ВУИ с первых дней жизни (2009, в печати).

Практические рекомендации используются в работе отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных ГБ №8 КЗ г. Москвы и ДКБ №13 им. Филатова г. Москвы.

Материалы диссертационной работы включены в курс лекций и практических занятий для студентов, клинических ординаторов и интернов кафедры клинической лабораторной диагностики РГМУ, кафедры неонатологии РГМУ, аспирантов и ординаторов НИИ педиатрии НЦЗД РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Маркеры ЦМВИ у недоношенных маловесных новорожденных с сочетанной врожденной патологией выявляются существенно чаще, чем у доношенных новорожденных. Недоношенные маловесные новорожденные являются группой риска по развитию ЦМВИ на первом году жизни, что диктует необходимость проведения неоднократного вирусологического обследования этих детей.

  2. ПЦР in situ - информативный, точный и быстрый метод, открывающий новые возможности в диагностике герпесвирусных инфекций, позволяющий оценить относительное количество внутриклеточной ДНК и тропность вируса к определенным тканям при изучении отпечатков органов. Метод эффективен для диагностики и изучения патогенеза инфекций, вызываемых ЦМВ и ВПГ при фетоинфантильных потерях и летальных врожденных дефектах развития. Верификация инфекционных агентов при мертворождении, при выявлении врожденных пороков развития, несовместимых с жизнью, способствует адекватной терапии женщин с мертворождениями в анамнезе и прогнозированию исходов будущих беременностей.

  3. Аминокислотные производные фуллерена С60 эффективно подавляют экспрессию поздних структурных белков ЦМВ в зараженных клетках. Синергизм Виферона с АПФ дает основание для разработки принципиально новых схем комбинированной терапии ЦМВИ, позволяющих снизить терапевтические концентрации лекарственных соединений.

  4. ЦМВ увеличивает длительность S – периода в инфицированных диплоидных фибробластах легкого эмбриона человека. Клетки, находящиеся в момент заражения в S – периоде клеточного цикла способны вступить в митоз, но необратимо блокируются в метафазе.

  5. Для развития патологии митоза достаточно взаимодействия вирусной частицы с клеточной мембраной и/или проникновения вирусных белков в клетку. Синтез вирусной ДНК не является обязательным условием формирования патологических митозов.
  1   2   3   4   5   6   7

Похожие:

Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Акушерство перечень практических занятий на 4 курсе лечебного факультета на II семестр
Гипоксия плода. Задержка роста плода. Асфиксия новорожденного. Первичная реанимация в родильном зале. Гипоксия плода. Задержка роста...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Акушерство перечень практических занятий на 4 курсе лечебного факультета на II семестр
Плацентарная недостаточность; гипоксия плода, задержка роста плода. Асфиксия новорожденного. Первичная реанимация в родильном зале....
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Документация об аукционе на проведение открытого аукциона по определению...
По определению поставщика для поставки противовирусных и иммуномодулирующих средств
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Предварительное решение
Панавир раствор для внутривенного введения 04 мг/мл в комплексной терапии хронической цитомегаловирусной инфекции в стадии обострения...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Предварительное решение
Панавир раствор для внутривенного введения 04 мг/мл в комплексной терапии хронической цитомегаловирусной инфекции в стадии обострения...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Роль патологии сосков молочной железы в развитии маститов у коров при машинном доении

Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon 02. 01. 04 «Сестринский уход при инфекционных болезнях с курсом вич-инфекции...
Фонд оценочных средств пм 02. 01 Участие в лечебно-диагностическом и реабилитационном процессах
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Экзаменационные вопросы по клинической фармакологии фармацевтический факультет
Клиническая фармакология противовирусных средств. Классификация. Особенности использования
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Техническое задание на выполнение работ по устройству ограждения...
Акционерное общество «Научно-производственное объединение «Поиск» (ао «нпо «Поиск»)
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Документация об аукционе на проведение открытого аукциона по определению...
Лот №2 поставка противовирусных препаратов, препаратов крови, ненаркотических анальгетиков, нестероидных и прочих противовоспалительных...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Алгоритмы поиска. Линейный поиск. Двоичный поиск
Также, линейный поиск часто используется в виде линейных алгоритмов поиска максимума/минимума
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon В учреждениях здравоохранения российской федерации
В этой связи возрастает роль и значение функциональных методов исследования, которые широко применяются с целью раннего выявления...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Отчет фгбу «гнц институт иммунологии»
«Поиск и анализ новых биомаркеров с целью диагностики иммунологических и аллергических заболеваний» (шифр: «Диагностика-16»)
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Теория и практика торговли Экономическая азбука
Эмиссия или золотой стандарт Часть Критика Монетаристкой и Австрийской модели. Поиск новых решений
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Методические разработки по аудиторным занятиям утверждаю
Тема: Грипп, парагрипп, аденовирусная, рс-, риновирусная инфекции: этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, диагностика, осложнения,...
Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. icon Место и роль промышленного транспорта в транспортнои системе
В экономике государства транспорт играет весьма важную роль, обеспечивая непрерывное перемещение предметов и средств труда между...

Руководство, инструкция по применению




При копировании материала укажите ссылку © 2024
контакты
rykovodstvo.ru
Поиск