Антимикробное и инсекто-акарицидное действие биоцида Агро-Велт и его применение на объектах ветнадзора

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнена в период с 2009 по 2012 гг. на кафедре микробиологии в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. Эксперименты по определению острой и хронической токсичности Агро-Велта на лабораторных животных были проведены на базе НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (г. Москва) и в виварии кафедры микробиологии ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности. Изучение антимикробного и инсекто-акарицидного действия Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны мегаполиса было проведено в парке «Кузьминки» г. Москвы. Производственные испытания Агро-Велта и его безопасность для сельскохозяйственных животных провели в хозяйствах Московской (ЗАО "Агрофирма Борец", Дмитровского района) и Челябинской (совхоз «Подовинное», Октябрьского района) областей. Характеристика Агро-Велта. Биоцид Агро-Велт представляет собой концентрат эмульсии в виде прозрачной жидкости светло-желтого цвета. Содержит в качестве действующих веществ (ДВ) субстанцию Велтон (10%), циперметрин (25%), а также эмульгаторы и растворитель. Субстанция Велтон Циперметрин Рис. 6. Биоцид Агро-Велт и его действующие вещества По своему химическому составу действующие вещества биоцида Агровелт, как следует из их химических формул, являются нейтральными по отношению друг к другу и не вступают в химическое взаимодействие. Субстанция Велтон (клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом) по величине LD50 при введении в желудок и при нанесении на кожу относится к 4 классу ма­лоопасных веществ по классификации ГОСТ 12.1.007-76. Вызывает умеренное раздра­жение слизистых оболочек глаз. Сенсибилизирующим действием и отдаленными последствиями (мутагенным, эмбриотоксическим, тера­тогенным, гонадотропным) не обладает. Циперметрин - синтетический пиретроид ((1RS)-цис, транс-3-(2,2-дихлор-винил)-2,2-диметил-циклопропан­карбоновой кислоты (RS)-3-фенокси-α-циа-нобензиловый эфир) по параметрам острой токсичности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 при введении в желудок относится к III классу умеренно опасных веществ, а при нанесении на кожу - к IV классу мало опасных веществ. Рабочие водные эмульсии Агро-Велта готовили непосредственно перед применением. Для этого средство смешивали с водопроводной или отфильтрованной водой ближайших водоемов, постоянно и равномерно размешивая в течение 5 минут. Готовую эмульсию использовали в течение 8 часов. Для нанесения Агро-Велта использовали бытовые пульверизаторы и мелкокапельные ранцевые опрыскиватели. Было приготовлено 11 концентраций рабочих эмульсий Агро-Велта – от 2,0 до 0,02% (табл. 4). Таблица 4. Приготовление рабочих эмульсий Агро-Велта № п/п Концентрация рабочей эмульсии (по препарату), % Количество концентрата для приготовления эмульсии, мл 1 л 10 л 100 л 1 2,0 20,0 200 2000 2 1,5 15,0 150 1500 3 1,0 10,0 100 1000 4 0,75 7,5 75 750 5 0,50 5,0 50 500 6 0,40 4,0 40 400 7 0,20 2,0 20 200 8 0,1 1,0 10 100 9 0,05 0,5 5 50 10 0,04 0,4 4 40 11 0,02 0,2 2 20 Микроорганизмы. Антимикробную активность Агро-Велта изучали с использованием культур штаммов микроорганизмов, полученных нами из музея штаммов НИИ биоцидов и нанобиотехнологий: - Escherichia coli 1257; - Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853; - Salmonella typhimurium 11; - Staphylococcus aureus 906; - Bacillus cereus 96; - Candida albicans 15; - Trichophyton gypseum НИИД; - Aspergillus niger НИИД. Все штаммы микроорганизмов имели типичные морфологические, биохимические и культуральные свойства. Перед проведением экспериментов у тест-штаммов была определена устойчивость к фенолу, хлорамину, текучему пару, кипячению и нагреванию на водяной бане в соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (1987). Штаммы имели следующую устойчивость: - E.coli 1257, P.aeruginosa АТСС 27853, S.typhimurium 11, C.albicans 15 – к фенолу (1:90) 15 мин, к хлорамину (0,1%) не менее 10 мин, к нагреванию при 590С не менее 15 мин; - S.aureus 906 – к фенолу (1:70) не менее 20 мин, к хлорамину (0,2%) не менее 10 мин, к нагреванию при 600С не менее 15 мин; - Bacillus cereus 96, T. gypseum НИИД, Aspergillus niger НИИД - к хлорамину (5%) не менее 3 часов, к текучему пару при 1000С не менее 2 мин, к нагреванию при 570С не менее 30 мин. Питательные среды. Для поддержания, освежения и культивирования тест-штаммов микроорганизмов, а также культур бактерий, выделенных с различных поверхностей и из почвы использовали мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), агар Сабуро, желточно-солевой агар, среды Эндо и Плоскирева, кровяной агар, среду Китта-Тароцци. Экспериментальные животные. В экспериментах по изучению острой и хронической токсичности Агро-Велта были использованы 120 белых беспородных мышей, массой 20±2,0 г; 20 белых беспородных половозрелых крыс, массой 190±5,0 г.; 20 морских свинок, массой 250±5 г.; 10 кроликов, массой 2,5±0,3 кг; 5 коров черно-пестрой породы; 10 поросят-отъемышей большой белой породы. В лабораторных условиях было изучено воздействие Агро-Велта на иксодовых и гамазоидных клещей. В природных условиях было изучено воздействие Агро-Велта на насекомых разных видов, клещей, дождевых червей, брюхоногих и т.п., которые могут быть переносчиками и резервуаром возбудителей инфекционных и инвазионных болезней животных. Тест-объекты. Для определения антимикробной и противогрибной активности Агро-Велта использовали батистовые тест-объекты размером 5х10 мм. Для определения коррозионной активности рабочих растворов Агро-Велта использовали металлические тест-объекты размером 50х20х1-4 мм из оцинкованного железа, алюминия и луженого оловом железа. Приборы и оборудование. Для определения поверхностного натяжения рабочих эмульсий Агро-Велта применяли метод Траубе (1987). С помощью сталагмометра подсчитывали число капель средства при истечении через калиброванное отверстие определенного объема двух сравниваемых жидкостей, величина поверхностного натяжения одной из которых заведомо известна. В качестве контроля сравнения использовали би- и дистиллированную воду. Смачивающую способность растворов Агро-Велта определяли с помощью микроскопа «МБС-2» с угловым приспособлением угла смачивания. Использовали аналитические весы с точностью до 0,0001 г. Материалы, растворы, реактивы. В работе применяли дистиллированную воду и физиологический раствор. Для нейтрализации действующего вещества биоцида Агро-Велт использовали универсальный нейтрализатор, в состав которого входят Твин-80 – 3%, сапонин – 3%, гистидин – 0,1%, цистеин –0,1%. Для определения белкового индекса Агро-Велта использовали инактивированную сыворотку крупного рогатого скота. Методы исследований. Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (1987); Руководством Р 4.2.2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» (2011); Руководством по эксперимен­тальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (издание второе, переработанное и дополненное, 2005); Санитарно-эпидемио-логическими требованиями к организации и проведению дезинсекционных мероприятий против синантропных членистоногих (СанПиН 2.1.2.1188-03); Методическими ука­заниями по изучению противогрибной активности фармакологических ве­ществ (2000); Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации (2001); методическими указаниями «Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств» (МУ 1.2.1105-02); «Методами испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности» (1998); Санитарными правилами для животноводческих предприятий (1987). Контроль качества обеззараживания объектов ветнадзора проводили в соответствии с «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (2002). Исследования коррозионной активности Агро-Велта проводили в соответствии с «Методикой определения и оценки коррозионной активности моющих и дезинфицирующих препаратов» (1974). Исследования по изучению безопасности биоцида Агро-Велт проводили в соответствии с нормативными показателями безопасности и эффективности биоцидов, подлежащих контролю при проведении обязательной сертификации, описанными Ивановой Е.Б. (31) и по методу Кербера (1931). Оценку антибактериальной и противогрибной активности Агро-Велта in vitro проводили «капельным методом» и методом бумажных дисков (4) с использованием плотных питательных сред в отношении тест-штаммов микроорганизмов. В работе использовали культуры тест-штаммов в концентрации 108  (0,25103) КОЕ/мл. Испытания антимикробной и инсекто-акарицидной активности Агро-Велта в лесопарковой зоне мегаполиса проводили в отношении почвенной микрофлоры и различных насекомых и клещей. Учитывалось воздействие средства на червей и брюхоногих, собранных с поверхности почвы и с глубины до 5 см. Для испытания акарицидного действия Агро-Велта использовали крысиных клещей Ornithonyssus bacoti Hirst из коллекции лаборатории энтомологии НИИ биоцидов и нанобиотехнологий, куриных клещей Dermanyscus gallinae, а также иксодовых клещей, которых собирали в лесопарковой зоне г. Москвы и в лесной зоне в Московской обл., Истринский р-он. Для этих целей использовали домашних животных (5 собак и 2 кошки), с которых снимали членистоногих. Острую и хроническую токсичность Агро-Велта определяли путем введения средства в желудок животным, методом нанесения на кожу и слизистые оболочки глаз, при парентеральном введении и ингаляционном воздействии на организм белых мышей, белых крыс, морских свинок и кроликов. Определяли местно-раздражающее, кожно-резорбтивное, сенсибилизирующее и кумулятивное действие биоцида. Исследования проводили согласно методическим указаниям МУ 1.2.1105-02 «Оценка токсичности и опасности препаратов дезинсекции», Руководству Р 4.2.2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» (2011), Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (издание второе, переработанное и дополненное, 2005). Величину ЛД50 Агро-Велта рассчитывали по методам Кербера и Прозоровского В.Б., а также методом пробит-анализа (56). На протяжении лабораторных испытаний Агро-Велта лабораторные животные получали стандартный кормовой рацион, содержащий необходимые питательные компоненты, минеральные вещества и витамины. До начала эксперимента животных выдерживали в условиях карантина 14 суток. Для сравнения, в каждой серии опытов формировали контрольные группы животных, которых обрабатывали физиологическим раствором или стерильной водопроводной водой, аналогично с опытными группами животных. Экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием пакета компьютерных программ «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву А.А. (5). 2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Изучение основных свойств Агро-Велта, определяющих перспективность его использования для дезинфекции и дезинсекции объектов ветнадзора Для определения перспективности применения Агро-Велта для дезинфекции и дезинсекции объектов ветнадзора с целью профилактики трансмиссивных природно-очаговых болезней были изучены такие физико-химические свойства его рабочих растворов, как поверхностное натяжение, смачивающая способность, коррозионная активность, белковый индекс, фенольный коэффициент, температура замерзания. Определение поверхностного натяжения рабочих эмульсий Агро-Велта. Было исследовано поверхностное натяжение 4 концентраций рабочих эмульсий Агро-Велта – 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2%, обуславливающее такое важное свойство биоцидов, как проникающая способность растворов и эмульсий в обрабатываемые поверхности. Определение поверхностного натяжения рабочих эмульсий Агро-Велта проводили с помощью сталагмометра СТ-2. Для этого подсчитывали число капель при ис­течении через калиброванное отверстие сталагмометра определенного объема эмульсии Агро-Велта. В качестве контроля сравнения использовали бидистиллированную воду, величина поверхностного натя­жения которой при температуре 20°С составляет 0,73 мН/м. Сначала определяли число капель бидистиллированной воды, используя в качестве стандартной жидкости дистиллированную воду, у которой поверхностное натяжение при 20°С составляет также 0,73 мН/м, а затем подсчитывали число капель 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2% эмульсий Агро-Велта. Опыт повторяли 3 раза и определяли среднее арифметическое число капель. Расчет показателя поверхностного натяжения эмульсий Агро-Велта проводили по формуле: (мН/м - миллиньютон на метр) где: σ – поверхностное натяжение эмульсии Агро-Велта при 200С, мН/м; σ1 – поверхностное натяжение бидистиллированной воды при 200С, мН/м; N1 – число капель бидистиллированной воды; No – число капель Агро-Велта. Полученные ркзультаты представлены в табл. 5. Таблица 5. Поверхностное натяжение рабочих эмульсий Агро-Велта № п/п Концентрация рабочей эмульсии Агро-Велта (по препарату), % Поверхностное натяжение, мН/м Агро-Велт Бидистиллированная вода 1 2,0 0,77 0,73 2 1,0 0,76 3 0,5 0,75 4 0,2 0,74 Как следует из данных таблицы, величина поверхностного натяжения рабочих эмульсий Агро-Велта прямо пропорциональна концентрации действующих веществ. В сравнении с бидистиллированной водой, поверхностное натяжение 0,2% и 2,0% эмульсий Агро-Велта было близко по значению и больше, чем у бидистиллированной воды на 0,01-0,04 мН/м, что свидетельствует о высокой проникающей способности рабочих эмульсий Агро-Велта. Определение смачивающей способности рабочих эмульсий Агро-Велта. Смачивающую способность 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2% эмульсий Агро-Велта определяли при комнатной температуре путем измерения с помощью микроскопа «МБС-2» с угломерным приспособлением для определения краевого угла смачивания на границе раздела фаз: раствор-воздух – твердая поверхность. Для стандартизации поверхности тест-пластин (покровные стекла) их покрывали тонким слоем очищенного парафина. Для проверки пригодности подготовленных тест-пластин к опыту на их поверхность наносили каплю (0,03 мл) бидистиллированной воды и измеряли краевой угол смачивания. Если краевой угол был 104° и более, каплю воды стряхивали и на то жe место наносили каплю (0,03 мл) Агро-Велта соответствующей концентрации, тест-пластинку помещали на полочку прибора. Каплю накрывали прозрачным колпачком и устано­вочными винтами перемещали полочку так, чтобы получить четкое изображение капли. Отсчет краевого угла смачивания производили путем измерения длины основания капли (2 r) и ее высоты (h). По соотношению 2r/h находили соответствующий краевой угол (табл. 6). Таблица 6. Показатели краевого угла смачивания по соотношению 2r/h

Похожие:

	Чувашской Республики «Агро-Инновации» Авторский коллектив: начальник отдела куп чр «Агро-Инновации» Фомин Г. Н., консультанты куп чр «Агро-Инновации» Любаев А. В., Сумков...		Чувашской Республики «Агро-Инновации» Авторский коллектив: начальник отдела куп чр «Агро-Инновации» Фомин Г. Н., консультант куп чр «Агро-Инновации» Любаев А. В
	Инструкция по сборке и основам эксплуатации деревянных домов СкандиТек Общие положения Рд является основой для профессионального производства строительно-монтажных работ. Отклонения от рд допускается только по письменному...		Введена в действие На объектах нефтегазодобычи, нефтегазопереработки и нефтепродуктообеспечения компании
	Административный регламент Федеральной службы по экологическому,... Москва "Об утверждении Административного регламента Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору по...		Москва В пункте 5 слова "на производственных объектах, объектах, на которых" заменить словами "на производственных и складских объектах,...
	Утвержден и введен в действие решение Производство строительно-монтажных работ на объектах инфраструктуры железнодорожного транспорта		Отчёт о состоянии регулирующей деятельности и безопасности на поднадзорных... Производство, хранение и применение взрывчатых материалов промышленного назначения и средств инициирования
	Отчёт о состоянии регулирующей деятельности и безопасности на поднадзорных... Производство, хранение и применение взрывчатых материалов промышленного назначения и средств инициирования		3. На какой из приведенных сосудов, работающих под давлением свыше... Б 24. Эксплуатация медицинских и водолазных барокамер на опасных производственных объектах
	1 Экскаватор гидравлический на базе грузового автомобиля типа uds-214 шт. 2 Возможна замена любой единицы на модель с аналогичными характеристиками и надежностью, технические устройства должны иметь разрешение...		Инструкция №11- 09/13 по применению средства инсекто-родентицидного «медирэт-комби» Помимо этих дв в состав средства входят вспомогательные вещества – битрекс (горечь), растительное масло, краситель, функциональные...
	1. 2 Проект и его признаки 9 Совершенствование технологии проектирования на объектах гражданского строительства 79		3. Технические характеристики Тележка (кузов 1000х800х350) к мотоблокам "нева" мб-2,мб-1, «салют», «агро», «ока»
	Фармако токсикологические свойства минерал сорбента сорби и его применение...		Инструкция по приведению в действие огнетушителя оу-5 и тактическим... Переносной углекислотный огнетушитель оу-5 предназначен для тушения возгорания (пожара в начальной стадии его развития) площадь которого...