2.2. Внутривенное введение
Введение исследуемого препарата осуществляли внутривенно в хвостовую вену, медленно. Для этого использовали как 0.4% водные растворы, так и специально приготовленные для изучения острой токсичности 1% растворы. Дозирование осуществляли на содержание активного компонента — индигокармина.
Для исследования каждой дозы препарата использовались группы по 6 животных одного пола. Кроме того, имелись аналогичные по численности группы контрольных животных каждого пола, которым по тому же пути вводили эквивалентные объемы растворителя — воды для инъекций.
Период наблюдения составлял 14 суток.
Регистрируемые показатели: летальность, время гибели животных, симптоматика отравления, ежедневное наблюдение общего состояния и поведения, взвешивание, потребление корма и воды, вскрытие и макроскопическое описание погибавших и всех выживших животных в конце исследования (эвтаназия осуществлялась передозировкой эфира), определение массовых коэффициентов внутренних органов.
2.2.1. Токсикометрия
Зависимые от доз летальные эффекты исследуемого препарата представлены в таблицах 2.2.1.1–2.2.1.2.
Полученные данные показывают, что половых различий в показателях острой токсичности не проявляется.
Таблица 2.2.1.1
Летальные эффекты (пало/всего) препарата при в/в введении крысам-самцам
Доза, мг/кг
|
75
|
150
|
225
|
300
|
450
|
Эффект
|
0/6
|
0/6
|
2/6
|
5/6
|
6/6
|
ЛД50 = 240 ± 15 мг/кг
ЛД16 = 165 ± 15 мг/кг
ЛД84 = 300 ± 20 мг/кг
|
Таблица 2.2.1.2
Летальные эффекты (пало/всего) препарата при в/в введении крысам-самкам
Доза, мг/кг
|
75
|
150
|
225
|
300
|
450
|
Эффект
|
0/6
|
0/6
|
2/6
|
5/6
|
6/6
|
ЛД50 = 240 ± 15 мг/кг
ЛД16 = 165 ± 15 мг/кг
ЛД84 = 300 ± 20 мг/кг
|
Для достижения больших доз препарат вводили повторно на протяжении 6 часов.
2.2.2. Клиническая картина интоксикации
Погибшие животные
При введении больших доз препарата (ЛД50 и более) через час-полтора развивались заторможенность, взъерошенность шерсти, обездвиженность, животные не реагировали на внешние раздражители, принимали боковое положение. Дыхание становилось частым, поверхностным. Отмечались судорожные подергивания. Гибель наступала от остановки дыхания через 3-4 часа после последнего введения препарата.
Вскрытие погибших животных показало венозное полнокровие внутренних органов, субплевральные кровоизлияния и мелкие кровоизлияния в головном мозге.
Половых различий в течение острой интоксикации не установлено.
Животные, пережившие интоксикацию
Через полтора-два часа после введения у животных отмечалось снижение активности. Дыхание становилось частям, поверхностным, аритмичным. При более тяжелой интоксикации развивался сопор. Это состояние продолжалось 3–8 часов в зависимости от тяжести интоксикации.
Выжившие животные на следующий день оставались вялыми, их двигательная активность была сниженной, они практически не потребляли пищу. Состояние животных нормализовывалось через 2 дня, приближаясь к состоянию контрольных животных.
Результаты измерения массы тела животных, переживших интоксикацию в дозах, близких к ЛД50, представлены в таблице 2.2.2.1.
Таблица 2.2.2.1
Влияние острого введения препарата на массу тела крыс, г
Время
наблюдения
|
Группы
|
Контроль
|
Индигокармин
|
M
|
F
|
M
|
F
|
Фон
|
185.8±4.5
|
182.5±2.3
|
184.4±4.6
|
193.5±3.0
|
2-й день
|
187.1±3.6
|
187.2±3.2
|
187.0±4.8
|
181.8±4.0
|
7-й день
|
196.2±4.5
|
187.4±3.0
|
196.1±5.5
|
192.3±3.3
|
14-й день
|
200.3±4.4
|
207.5±3.8
|
206.5±5.1
|
197.9±2.9
|
Анализ полученных данных показывает некоторое снижение средней массы тела у всех животных, получавших препарат, на второй день после введения. В последующие дни динамика массы тела опытных животных во всех группах не отличалась от контроля.
2.2.3. Данные вскрытия (некропсии)
На вскрытии крыс в конце эксперимента (через 14 дней) различий между животными, получавшими Индигокармин и воду для инъекций, не установлено.
Шерсть опытных животных имела опрятный вид, была блестящей, без очагов облысения. Питание животных было удовлетворительным.
Раздражения кожи, отеков или инфильтратов в месте внутривенного введения не отмечалось. Стенка вены — без признаков воспаления или раздражения.
При осмотре грудной и брюшной полостей нарушений в расположении внутренних органов не отмечалось.
Подчелюстные лимфатические узлы и слюнные железы имели овальную или округлую форму, однородный розоватый или желтоватый цвет и умеренную плотность.
Щитовидная железа плотно прилежала к гортани, имела обычные размеры и плотность, розовато-красноватый цвет. Тимус имел треугольную форму, беловатый цвет и умеренно плотную консистенцию.
Величина и форма сердца изменений не представляли. Мышца сердца была коричневатой, плотной.
Поверхность легких имела бледно-розовую окраску; легкие спадались при вскрытии грудной клетки. Ткань на разрезе также имела однородную бледно-розовую окраску. Слизистая оболочка внелегочных бронхов была гладкой, блестящей, бледно-розовой.
Селезенка имела темно-вишневый цвет, гладкую поверхность и плотноватую консистенцию.
Желудок имел обычную форму и размеры, просвет был заполнен плотным пищевым содержимым. Слизистая тела желудка была бледно-розовой, блестящей, складчатой. Слизистая тонкой и толстой кишки была блестящей, гладкой.
Поджелудочная железа была бледно-розовой, дольчатой.
Величина и форма печени изменений не представляли. Капсула печени была тонкой, прозрачной. Ткань печени имела коричневатый цвет и умеренно плотную консистенцию.
Величина и форма почек не отличались от контроля, капсула легко снималась. Поверхность органа была гладкой, однородной коричневато-сероватой окраски. На разрезе почек отчетливо различались корковое и мозговое вещество.
Форма, размеры и плотность надпочечников, яичников или яичек не отличались от контроля.
Оболочки головного мозга были тонкими, прозрачными. Вещество головного мозга имело умеренную плотность. Расширения желудочков мозга не наблюдалось.
В таблице 2.2.3.1 приведены массовые коэффициенты внутренних органов мышей и крыс, усредненные по группам.
Таблица 2.2.3.1
Массовые коэффициенты (МК) органов у белых крыс при остром введении препарата (г/кг веса тела)
Орган
|
Группы
|
Контроль
|
Индигокармин
|
M
|
F
|
M
|
F
|
Сердце
|
3.9±0.3
|
4.1±0.4
|
4.2±0.5
|
4.1±0.3
|
Легкие с трахеей
|
7.2±0.3
|
7.4±0.8
|
7.8±0.3
|
8.5±0.7
|
Тимус
|
1.37±0.14
|
1.30±0.07
|
1.44±0.12
|
1.31±0.10
|
Печень
|
37.1±1.6
|
36.6±1.9
|
38.4±1.6
|
36.2±2.1
|
Селезенка
|
4.2±0.2
|
4.5±0.3
|
3.7±0.2
|
3.9±0.2
|
Почка (левая)
|
4.5±0.1
|
4.5±0.3
|
4.5±0.09
|
4.5±0.4
|
Надпочечники
|
0.11±0.02
|
0.09±0.01
|
0.10±0.01
|
0.09±0.01
|
Головной мозг
|
8.8±0.6
|
8.3±0.3
|
8.8±0.2
|
8.8±0.1
|
Яички или яичники
|
13.3±0.1
|
0.32±0.02
|
12.3±0.09
|
0.28±0.01
|
Анализ величин массовых коэффициентов не выявил каких-либо достоверных отличий между группами животных, получавшими Индигокармин и воду для инъекций.
Таким образом, результаты токсикометрии, данные наблюдений за экспериментальными животными на протяжении 14 дней после острого введения, а также данные некропсии позволяют отнести Индигокармин к IV классу малотоксичных лекарственных веществ (H. Hodge et al. Clinical Toxicology of Commercial Products. Acute Poisoning. Ed. IV, Baltimore, 1975, 427 p.; K.K. Сидоров, 1973). (таблица 2.1.3.3)
Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии противопоказаний для клинических испытаний препарата по показателям острой токсичности.
|
