Руководство по валидации скрининговых методов обнаружения остатков ветеринарных препаратов (первоначальная валидация и передача метода)
|
Скачать 400.28 Kb.
|
|
СПРАВОЧНЫЕ ЛАБОРАТОРИИ СООБЩЕСТВА ПО ОСТАТКАМ 20/1/2010
1. Область применения Данное руководство является дополнением к Решению Комиссии 2002/657/ЕС [1] о валидации скрининговых методов. В руководстве описаны два различных этапа процесса валидации: первоначальная валидация скрининговых методов в исходной лаборатории и сокращенная или «урезанная» валидация этих методов в лаборатории-получателе после передачи метода в данную лабораторию. Цели руководства – определить следующее:
Данное руководство включает:
2. Определения 2.1. Граница регулирования для целей валидации Для целей валидации аналитических методов в лабораториях принято считать, что граница регулирования для разрешенных ветеринарных препаратов в ЕС – это максимальный уровень остатков (MRL), определение которого дано в Регламенте (ЕС) № 470/2009 [2] (отменяющем Регламент Совета (ЕЕС) № 2377/90 [3]). Также, граница регулирования для определенных запрещенных или неразрешенных аналитов – это минимальный требуемый предел эффективности (MRPL) или точки отсчета для действия (RPA), определения которых даны в Статье 4 Решения Комиссии 2002/657/ЕС [1] и Статье 2 Решения Комиссии 2005/34/ЕС [4] и Статьях 18/19 Регламента Совета (ЕЕС) № 470/2009 [2]. 2.2. Целевая концентрация скрининга Целевая концентрация скрининга – это концентрация, при которой скрининговый тест определяет пробу как «положительную по результатам скрининга» (потенциально несоответствующую) и запускает подтверждающий тест. 1- Для разрешенных аналитов целевая концентрация для скрининга находится на границе регулирования (MRL) или ниже ее. (по возможности ее необходимо установить на ½ MRL) 2- Для запрещенных и неразрешенных аналитов целевая концентрация для скрининга должна быть на минимальном требуемом пределе эффективности (или точки отсчета для действия) (MRPL) или ниже. 3- Для аналитов, для которых не были установлены максимальные уровни остатков в соответствии Регламентом Совета (ЕС) № 470/2009 [2], целевая концентрация скрининга должна быть по возможности установлена на уровне рекомендованных концентраций, или ниже их, как описано в Руководстве Справочной лаборатории Сообщества от 7 декабря 2005 года [5]. Чем целевая концентрация скрининга ниже границы регулирования, тем меньше вероятность получения ложно соответствующего (то есть ложноотрицательного) результата в пробах, содержащих препарат на границе регулирования. 2.3 Способность обнаружения (CCβ) Определение способности обнаружения (CCβ) дано в пункте 1.12. Приложения к Решению Комиссии 2002/657/ЕС [1]. CCβ – это наименьшее содержание аналита, которое можно обнаружить, идентифицировать и/или определить его количество в пробе с вероятностью ошибки β. Ошибка β – это вероятность того, что проанализированная проба действительно является несоответствующей, даже если был получен соответствующий результат измерения. Для скрининговых тестов ошибка β (то есть количество ложно соответствующих результатов) должно быть < 5%. В случае с аналитами, для которых не установлено границ регулирования, CCβ – это наименьшая концентрация, при которой метод может обнаруживать действительно контаминированные пробы со статистической точностью равной 1 – β. В данном случае CCβ должна быть как можно ниже или ниже рекомендованных концентраций, если они имеются [5]. В случае с аналитами, для которых установлены границы регулирования, CCβ – это концентрация при которой метод может обнаруживать разрешенные предельные концентрации со статистической точностью равной 1 – β. CCβ – это концентрация, при которой остается только 5% ложно соответствующих результатов. В данном случае CCβ должна быть меньше или равна границе регулирования. 2.4. Граница отсечения Граница отсечения – это ответ или сигнал скринингового теста, который указывает на то, что проба содержит аналит в целевой концентрации скрининга или выше уровня этой концентрации. Если граница отсечения превышена, проводится последующий подтверждающий тест. Во время процесса первоначальной валидации граница отсечения может быть установлена путем анализа матричных холостых проб и репликатов тех же проб с добавлением аналита в целевой концентрации для скрининга. Два примера того, как можно установить границы отсечения, даны в Приложении I и II.
Это пробы от животных с известной историей, которым не давали исследуемое вещество. Если проб от таких животных нет, также могут подойти образцы, которые заранее подтвердили как соответствующие и не содержащие остатки исследуемого вещества подходящими чувствительными физико-химическими методами. 2.6. Положительные контрольные пробы для скрининга Это отрицательные контрольные пробы с добавлением исследуемого аналита в целевой концентрации для скрининга. Однако это также могут быть заведомо положительные пробы (то есть пробы, полученные от животных, которым вводили исследуемое вещество) или сертифицированные справочные материалы. Когда положительные контрольные пробы для скринига прогоняют в скрининговом тесте, они классифицируются как «положительные по результатам скрининга», если тест выполняется правильно. 2.7. Исследуемая матрица Исследуемая матрица – это ткань или жидкость, представленные для анализа, например, печень, моча, мышцы, мед, молоко. Исследуемая матрица указана в Стандартной операционной процедуре скринингового метода. Например, исследуемой матрицей может быть «мышца КРС» или просто «мышца». В первом случае показано, что скрининговый метод подходит для мышцы КРС. Во втором случае показано, что метод подходит для мышц от нескольких видов с незначительными различиями в откликах теста между разными видами. Виды животных, для которых подходит метод, должны быть указаны в СОП. 2.8. Стандартная операционная процедура (СОП) для метода Метод СОП следует составить до проведения первоначальной или сокращенной валидации и описать пункты, перечисленные в разделе 5.4.4. ISO 17025:2005. Во время разработки аналитического метода необходимо определить область применения метода (то есть аналиты, которые можно обнаружить, матрицы, которые можно протестировать и т.д.). Во время разработки метода все параметры метода нужно оптимизировать, а также определить и контролировать критические точки (например, температуру, pH). Когда метод передают в лабораторию-получатель, эта лаборатория должна составить свой собственный СОП, соответствующий СОП исходной лаборатории. Что касается физико-химических методов, поставщики оборудования лаборатории-получателя и исходной лаборатории могут быть разными; поэтому рабочие характеристики могут сильно отличаться. В лаборатории-получателе оператор должен иметь возможность адаптировать условия с целью достижения тех же критериев эффективности. 2.9. Первоначальная валидация Процедура валидации, применяемая к новым разработанным аналитическим методам в исходной лаборатории, которая демонстрирует, что метод подходит для этой цели. 2.10. Сокращенная валидация Процедура сокращенной валидации, применяемая в лаборатории-получателе в отношении метода, предварительно валидированного в исходной лаборатории. Процедура сокращенной валидации позволяет лаборатории-получателю продемонстрировать, что метод будет надежно работать в данной лаборатории и подходит для данной цели. 2.11. Скрининговые методы Скрининговые методы определены в Решении Комиссии 2002/657 [1] как «методы, используемые для выявления присутствия аналита или класса аналитов на интересующем уровне. Эти методы обладают высокой скоростью обработки образцов и используются для исследования больших количеств образцов на возможно несоответствующие результаты. Они предназначены специально для недопущения ложно соответствующих результатов». «Интересующий уровень» - это обычно граница регулирования (MRL, MRPL) (см. раздел 2.2). 3. Классификация скрининговых методов Скрининговые методы можно классифицировать либо по принципу обнаружения, либо по тому, являются ли они качественными или (полу)количественными. 3.1. Классификация по принципу обнаружения Биологические методы обнаруживают клеточные ответы на аналиты (например, эстрогенный эффект, торможение роста бактерий, клеточный эффект, гормональный эффект. Эти методы не являются селективными и могут распространяться на несколько химических классов активных аналитов (например, гормоны, противомикробные вещества). Они не позволяют идентифицировать отдельные аналиты. Биохимические методы обнаруживают молекулярные взаимодействия (например, антигены, белки) между аналитами и антителами или рецепторными белками (ИФА, радиоиммуноанализ). Химическое мечение либо аналита, либо антитела/рецептора позволяет выявлять и измерять это взаимодействие. Эти методы могут быть селективными для семейства аналитов, имеющих сходную молекулярную структуру; в некоторых случаях они могут быть аналит-специфичными. Физико-химические методы различают химическую структуру и молекулярные характеристики аналитов путем разделения молекул (например, тонкослойная хроматография, газовая хроматография, жидкостная хроматография высокого разрешения) и обнаружения сигналов, относящихся к молекулярным характеристикам (например, УФ излучение с детектором на диодной матрице, в видимой области, флуоресценция, пламенно-ионизационный детектор, детектор с захватом электронов, масс-спектрометрия, тандемная масс-спектрометрия, масс-спектрометрия с ионной ловушкой, времяпролетная масс-спектрометрия, другие гибридные виды масс-спектрометрии). Они могут диференцировать сходные молекулярные структуры и позволяют одновременно анализировать несколько аналитов. 3.2 Классификация по степени количественного определения Количественные методы дают ответ да/нет без указания концентрации исследуемого аналита. Например:
Полуколичественные методы дают примерное указание на концентрацию предполагаемого аналита. Поскольку численный результат не пригоден для сообщения, он может быть полезен для аналитика при принятии решения относительно диапазона калибровки для последующего (количественного) подтверждающего теста. Примеры включают:
Количественные методы соответствуют тем же требованиям к точности, динамическому диапазону и прецизионности, что и подтверждающие методы. И таким образом, когда необходимо определить количество, эти методы необходимо валидировать как подтверждающие методы, как описано в Решении Комиссии 2002/657/ЕС [1]. Если метод используется только для скрининга, специальные требования, касающиеся подтверждения идентичности (точки идентификации в соответствии с разделом 2.3.2.2. Таблицы 6 Решения ЕС/2002/657 [1]) не являются обязательными. 4. Принципы, которым необходимо следовать при валидации скрининговых методов 4.1 Ключевые требования Ключевым требованием для скринингового метода (независимо от того, является ли он качественным или (полу)количественным) считается его способность достоверно обнаруживать искомый аналит в выбранной целевой концентрации для скриннга и избегать ложно соответствующих результатов. Целевая концентрация для скрининга должна быть достаточно низкой, чтобы гарантировать, что если данный аналит присутствует в пробе на границе регулирования, образец будет квалифицирован как «положительный по результатам скрининга». Валидация (не важно первоначальная или сокращенная) должна предоставить объективные доказательства соблюдения соответствия данному ключевому требованию. Валидация (как первоначальная, так и сокращенная) должна распространяться на все комбинации матрица/вид/аналит, заявленные в области применения СОП метода. Однако требуемая степень валидации будет варьировать в зависимости от того, является ли валидация первоначальной или сокращенной. Минимальные рабочие характеристики для скрининговых тестов описаны в Главе 3, таблица 9 Решения Комиссии 2002/675/ЕС [1]. В качестве общего принципа между целевой концентрацией скрининга и границей регулирования должна быть значительная разница. Следовательно CCβ должна быть меньше или равна границе регулирования. Важно отметить, что скрининговые методы не всегда могут достоверно обнаруживать все соответствующие целевые аналиты на границе регулирования во всех матрицах и у всех видов. Если метод не определяет необходимые аналиты или виды, тогда следует дополнительно применить другие тесты с использованием альтернативных методов. 4.2 Выбор аналитов, используемых для валидации, и селективность метода Выбор аналитов, которые будут использоваться либо для первоначальной, либо сокращенной валидации, зависит от области применения скринингового метода, которая описана в СОП метода. Если скрининговый метод не может дифференцировать различные аналиты в одном химическом семействе (например, тетрациклины или бета-лактамы), валидацию следует проводить по каждому аналиту, которым занимается лаборатория. Например, аналиты, которыми занимается лаборатория, это все аналиты, которые могут потребовать включить в аналитическую программу для обнаружения остатков в План по контролю остатков. В ином случае валидацию можно проводить с использованием нескольких аналитов, которые являются репрезентативными для данной группы аналитов (см. раздел 4.2.1., 4.2.2., 4.2.3.). 4.2.1. Методы для обнаружения нескольких классов веществ с использованием реакций подавления роста Для валидации методов на основе реакций подавления роста, предназначенных для выявления нескольких классов аналитов, необходимо выбрать не менее одного аналита от каждой группы (например, для реакции задержки роста бактерий можно использовать один тетрациклин, один сульфонамид, один β-лактам, один аминогликозид и один макролид). Однако следует отметить, что в случае с реакциями задержки роста бактерий не все аналиты из одного семейства противомикробных веществ будут демонстрировать одинаковый профиль противомикробной активности. Поэтому перед проведением валидации рекомендуется определить профили активности всех соответствующих аналитов в каждом семействе противомикробных веществ с использованием стандартных растворов в различных концентрациях около MRL. Эти профили активности позволят выбрать для валидационных исследований не менее одного-двух репрезентативных аналитов от каждого семейства аналитов. Аналиты, выбранные для валидационных исследований в идеале должны быть наименее чувствительными в своем классе, то есть целевая концентрация скрининга должна быть как можно ближе к границе регулирования. Если MRL одинаковый для всего семейства (например, тетрациклины), можно выбрать один аналит (наименее чувствительный). Например, в Справочной лаборатории Сообщества AFSSA-Fourgères было продемонстрировано, что окситетрациклин является наименее чувствительным тетрациклином (среди тех, для которых установлен MRL), который можно обнаружить с использованием многих реакций подавления роста бактерий на нескольких планшетах. Если в одном семействе установлены различные MRL (например, пенициллин), следует валидировать несколько аналитов, а целевая концентрация скрининга будет установлена относительно соответствующих MRL. Например, в семействе пенициллинов ампициллин и клоксациллин являются наименее чувствительными пенициллинами, и, следовательно, оба эти вещества следует выбрать в качестве репрезентативных антибиотиков с различными целевыми концентрациями скрининга. Справочная лаборатория Сообщества может дать рекомендации по выбору репрезентативных аналитов для реакций подавления роста бактерий [8-10]. 4.2.2. Методы для обнаружения нескольких классов веществ с использованием биохимических тестов Для биохимических тестов (например, ИФА), которые могут связывать несколько аналитов с различной перекрестной реактивностью, если все эти аналиты включены в область применения метода, первоначальной валидации может быть достаточно для демонстрации того, что все исследуемые аналиты можно будет достоверно экстрагировать (при необходимости) и обнаруживать. Одной из наиболее часто встречающихся проблем является тот факт, что производители ИФА наборов могут не указывать, была ли представленная информация по перекрестной реактивности антиген-антитело получена в буферном (стандартном) растворе или в биологической матрице. В анализах ИФА, включающих этап химического экстрагирования, коэффициенты извлечения могут быть не указаны. Следовательно, не всегда возможно рассчитать способность обнаружения каждого перекрестно-реагирующего аналита, исходя из способности обнаружения репрезентативного аналита. Способность обнаружения следует определять для отдельного аналита, обнаруженного с помощью теста, или для репрезентативного аналита (например, аналита с самой низкой перекрестной реактивностью). Если тест не специфичен для одного аналита (например, тест для обнаружения нескольких сульфонамидов), необходимо определить перекрестную реактивность с другими различными аналитами. Наконец, способность обнаружения других аналитов по результатам тестов для обнаружения нескольких классов веществ можно определить по способности обнаружения репрезентативного аналита в отношении процентных соотношений перекрестных реактивностей. 4.2.3. Методы для обнаружения нескольких классов веществ с использованием физико-химических скрининговых методов Что касается физико-химических методов, позволяющих дифференцировать аналиты на основе их химических свойств, сначала следует валидировать хотя бы один аналит, выбранный из каждого известного химического класса или подкласса (например, для валидационных исследований хинолонов можно выбрать одно кислотное соединение и одно амфотерное соединение). Однако при использовании скрининговых методов для обнаружения нескольких классов веществ (например, скрининговый метод ЖХ-времяпролетная-МС), если аналиты имеют разное время удерживания, они могут подвергаться различным воздействиям (ионной супрессии или ионной стимуляции) из-за разного количества одновременно элюирующих соединений матрицы. ПО этой причине рекомендуется проводить тест на все аналиты, а не на подвыборку, если аналиты обладают очень схожими физико-химическими свойствами. 4.2.4. Обобщение Примеры критериев, которые можно использовать при выборе аналита, включенного в метод, подлежащий валидации:
- выбор аналита(ов), который дает наименьшее подавление роста в данных условиях; - если метод является тестом на нескольких планшетах, валидацию проводят хотя бы на самом чувствительном планшете в отношении исследуемого антибиотика;
- аналит с наименьшей перекрестной реактивностью;
- аналиты с наименьшим аналитическим коэффициентом извлечения; - аналиты, включенные в метод, если может произойти ионная супрессия. |
Похожие:
 |
Валидация как административно-правовой инструментарий Аннотация. Рассмотрены основные понятия валидации. Показано, что они не имеют системного юридического значения, хотя валидация как... |
 |
Техническое задание на поставку ветеринарных лекарственных препаратов... Предмет договора: поставка ветеринарных лекарственных препаратов и препаратов ветеринарного назначения |
|
Котировочная документация на поставку ветеринарных препаратов ... |
|
Руководство по валидации процесса производства лекарственных средств Рmp/qwp/848/96 [2] и емеа/cvmp/598/99 [3]. Руководство [1] согласовано с документами ich q8, Q9 и Q10 [4]-[6] и включает положения... |
|
Гну краснодарский ниви россельхозакадемии научно-производственное... ... |
|
Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов, главных управлений... |
|
Западное окружное управление образования Использование метода визуального детектирования для обнаружения и оценки параметров объектов захоронения отходов |
|
Техническое задание наименование предмета закупки: Поставка ветеринарных препаратов и вакцин № |
|
Законодательное регулирование Таблица расчета начальной (максимальной) цены договора на поставку ветеринарных препаратов. 24 |
|
Документация об аукционе для проведения электронного аукциона Объект закупки: поставка ветеринарных средств и препаратов (антигельминтные и инсектоакарицидные препараты) |
|
Руководство по эксплуатации бажк. 425119. 003-04 рэ Изделие является вибрационным средством обнаружения и предназначено для обнаружения нарушителя, преодолевающего путем разрушения... |
|
Котировочная документация на поставку ветеринарных препаратов ... |
|
Руководство по эксплуатации Б Изделие является вибрационным средством обнаружения и предназначено для обнаружения нарушителя, преодолевающего путем перелаза (без... |
|
Руководство по эксплуатации Б Изделие является вибрационным средством обнаружения и предназначено для обнаружения нарушителя, преодолевающего путем перелаза (без... |
|
Документация открытого аукциона на право заключить государственный... Наименование: управление по организации конкурсов и аукционов Нижегородской области |
|
Документация об открытом аукционе в электронной форме на поставку... Федеральное государственное бюджетное учреждение «Селекционно – генетический центр «Смена» |