Занятие №5.
Тема: «Определение кетоновых тел в моче»
Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.
Задачи:
Изучить полуколичественные и качественные методы определения кетоновых тел в моче;
Изучить основные принципы работы с диагностическими тест-полосками
Тип занятия: практическое (6ч)
Планируемые результаты:
Студент должен знать:
Причины появления кетоновых тел в моче;
Методы диагностики кетоновых тел в моче;
Клинико-диагностическое значение исследования показателей.
Студент должен уметь:
Подготовить рабочее место к исследованию мочи.
Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.
Определять химические свойства мочи (кетоновые тела в моче качественными и полуколичественными методами).
Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).
Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.
Средства достижения поставленной цели:
1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.
2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.
3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.
4. Демонстрация качественной реакции определения кетоновых тел в моче (Лестраде, Ланге).
Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:
посадочные места по количеству обучающихся;
рабочее место преподавателя;
специализированная мебель и оборудование.
Технические средства обучения:
компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;
технические устройства для аудиовизуального отображения информации;
аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).
Результатом освоения урока является:
Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными (ПК) и общими (ОК) компетенциями:
ПК 1.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.2. Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.
ПК 1.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 13.Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
IМодуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы
Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.
Обнаружение кетоновых тел в общем анализе мочи называют - кетонурия. В норме кетоновые тела в моче не обнаруживаются, так как ежедневно выводятся из организма органами выделения, в количестве 25-50 мг в сутки. К таким телам относятся ацетон, уксусная и бета-осмолярная кислоты. Кетоновые тела в моче встречаются совместно, поэтому раздельное определение их клинического значения не имеет. В моче здорового человека медики не выявляют кетоновых тел.
Причины появления кетоновых тел
К причинам накапливания в моче кетоновых тел относятся многие причины, некоторые из них несут угрозу нормальной жизнедеятельности организма. Вот одни из причин:
длительное голодание организма;
общее переохлаждение;
физические перегрузки;
беременность;
чрезмерное употребление белков с пищей;
грипп;
анемия;
рак и другие заболевания.
Если кетонурия спровоцирована сахарным диабетом, то наличие кетоновых тел в моче является своеобразным сигналом для организма о том, что нужно пересмотреть свой рацион питания.
Часто такая патология встречается, если нарушен баланс между употребляемыми жирами и углеводами. Если кетонурия сопровождается сильно выраженным плодовым запахом мочи (чаще яблочным), то это говорит о высоком содержании глюкозы в моче при сахарном диабете.
При обнаружении кетоновых тел в моче при сахарном диабете, медики говорят о переходе заболевания в более тяжелую стадию. Очень большое содержание в моче ацетона и уксусной кислоты при сахарном диабете, свидетельствует о приближении состояния гипергликемической комы у больного.
Если при исследовании анализа мочи больного, в ней обнаружен только ацетон без содержания глюкозы, то речь идёт о другом заболевании, не имеющем отношения к диабету.
Отсутствие глюкозурии при наличии кетонурии исключает диабет. При диабетической кетонурии мочу исследуют каждые 4 часа и, в зависимости от результатов анализа, корректируют дозу инсулина. Ликвидировать кетонурию необходимо в течение 1-2 суток.
У детей кетонурия может быть при различных заболеваниях ввиду лабильности углеводного обмена. Поэтому даже незначительные погрешности в диете, в особенности при наличии острой инфекции, нервного возбуждения, переутомления и т. п. могут привести к кетозу. Кетонурия в раннем детском возрасте может наблюдаться при токсикозах, длительных желудочно-кишечных расстройствах, дизентерии и других заболеваниях. У новорожденных повышение кетонов в моче почти всегда вызывается недокормленностью.
Как образуются кетоновые тела?
Чаще всего кетоновые тела образуются при нарушении обменных процессов белков, жиров и углеводов в организме человека. После перенесенного хирургического вмешательства, кетонурия встречается из-за распада белка, вследствие операционной раны. Наряду с ростом кетоновых тел в моче, наблюдается увеличение кетогенеза в тканях организма и накопление ацетона и уксусной кислоты в крови, что носит название кетонемия.
Методы диагностики кетоновых тел
Кетонурия диагностируется как в условиях стационара, так и дома. Для того чтобы определить наличие ацетона в моче в домашних условиях, используют специальные тест-полоски, которые продаются в аптеке. Например, «Ацетон тест», «Кетостикс», «Кетур-Тест», «КетоглюкоФАН».
Тест-полоски для домашнего определения в моче ацетона, могут давать ложноположительный результат. Это наблюдается в тех случаях, когда больной принимает каптоприл или лекарственные средства, с содержанием в них фталеина.
Существует ещё один способ определения кетоновых тел в моче. Для этого можно добавить в емкость с мочой несколько капель 5% раствора нитропруссида или раствора нашатырного спирта. Если кетоновые тела присутствуют в моче, то она окрасится в ярко-красный цвет.
Существует ещё одна разновидность кетонурии - лейциноз, или врождённое заболевание, передающееся по наследству. Другое название этой патологии – разветвленноцепочечная кетонурия. Встречается у новорожденных детей, в соотношении 1/120000-300000 случаев.
Лейциноз, вызван нарушением обменных процессов, очень тяжело протекает и заканчивается смертельным исходом. У таких больных параллельно присутствуют и симптомы расстройства центральной нервной системы, нарушение развития, пониженное содержание глюкозы в крови, пониженный тонус мышц, а также может развиться летаргическое состояние. Моча больного лейцинозом имеет ярко выраженный запах кленового сиропа.
IIМодуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом
Методические установки:
Изучите и законспектируйте качественные и количественные методы определения кетоновых тел в моче;
Разбейтесь на группы по 2-3 человека и получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;
Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;
Оцените полученный результат (норма, патология).
Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.
К методам определения кетоновых тел в моче относятся:
1гр.: качественные методы (пробы)
Проба Ланге
Модифицированная проба Ротеры
Проба Легаля
Проба Лестраде
2 гр.: полуколичественные методы
Экспресс-тесты (диагностические тест-полоски)
Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около 50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в интервале от 150 до 1500 мг/л.
Задание №1.
Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Ланге.
|
Принцип метода:Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.
|
Посуда, реактивы, оборудование:
|
-
Химическая пробирка;
-
Секундомер (часы);
-
Реактивы:
Уксусная кислота 80%.
Нитропруссид натрия (свежеприготовленный 10% раствор).
Аммиак.
|
Ход исследования:
|
К 12 – 15 мл мочи приливают около 1 мл уксусной кислоты и около 0,5 мл раствора нитропруссида натрия. Затем наслаивают аммиак.
|
Интерпретация полученных результатов:
|
В положительном случае на границе двух жидкостей образуется фиолетовое кольцо. Кольцо может появиться не сразу, а в течение 2 – 3 мин.
Другая модификация этой пробы удобна тем, что можно использовать готовый реактив нитропруссида натрия.
|
Приготовление реактива:
|
6 г нитропруссида натрия растворяют в 100 мл 30% уксусной кислоты.
|
Ход исследования:
Интерпретация полученных результатов:
|
К 5 – 6 мл мочи прибавляют несколько капель реактива (до цвета чая) и наслаивают аммиак.
В положительном случае на границе жидкостей появляется фиолетовое кольцо.
|
Зарисуйте схему пробы Ланге
|
Задание №2.
Определение кетоновых тел в моче с помощью модифицированной пробы Ротеры.
|
Принцип метода:интенсивность окраски рабочего раствора позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче.
|
Посуда, реактивы, оборудование:
|
-
Химическая пробирка;
-
Секундомер;
Реактивы:
Нитропруссид натрия, раствор 50 г/л; готовят перед использованием.
Аммония сульфат.
Аммиак водный – 25% раствор.
|
Ход исследования:
|
Приблизительно 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно смешивают в пробирке, а затем на эту смесь тщательно наслаивают 10 – 15 капель раствора водного аммиака.
|
Интерпретация полученных результатов:
|
При наличии кетоновых тел на границе раздела в течение 3 – 5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо, интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче (см. таблицу).
|
При незначительной концентрации кетоновых тел слабое кольцо может появиться на 8 – 10 минуте.
|
Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче.
|
Интенсивность окраски
|
Обнаруживаемые вещества, г/л Ацетоуксусная кислота
|
Следы
|
0,05
|
Умеренная
|
0,3
|
Интенсивная
|
0,8
|
Задание №3.
Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Легаля.
|
Принцип метода: нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса слабо-розового или красного цвета.
|
Посуда, реактивы, оборудование:
|
-
Химическая пробирка;
-
Реактивы:
Свежеприготовленный 5% водный раствор нитропруссида натрия.
10 – 15% раствор едкого натрия.
Уксусная кислота ледяная.
|
Ход исследования:
|
К 5 – 6 мл мочи прибавляют несколько капель реактива № 1 и 0,5 мл реактива № 2. Получается красное окрашивание. Добавляют 0,5 – 1 мл реактива № 3.
|
Интерпретация полученных результатов:
|
Если красный цвет исчезает, проба отрицательная, если сохраняется – положительная. Если получается слабо-розовая окраска, то проба считается также положительной.
|
Задание №4.
Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Лестраде.
|
Принцип метода: определение кетоновых тел в моче с помощью сухого реактива (или таблеток).
|
Посуда, реактивы, оборудование:
|
Предметное стекло;
Фильтровальная бумага;
Реактив;
Секундомер (часы).
|
Приготовление сухого реактива:
|
нитропруссида натрия 1 г, сульфата аммония 20 г, карбоната натрия безводного 20 г. Отвешенные реактивы тщательно растирают в ступке до получения мелкого однородного порошка. Порошок хранят в хорошо закупоренной стеклянной банке в сухом месте.
|
Ход исследования:
|
Предметное стекло кладут на лист фильтровальной бумаги. На стекло помещают небольшое количество (на кончике ножа) сухого реактива или таблетку и наносят на него 2 – 3 капли мочи.
|
Интерпретация полученных результатов:
|
При наличии кетоновых тел получается окрашивание от розового до темно-фиолетового (появление окраски может наступить в течение 2 – 3 мин).
|
Экспресс-тесты
К экспресс-тестам определения кетоновых тел в моче относятся: набор для экспресс-анализа ацетона в моче и диагностические полоски. Исследование проводится согласно инструкции.
Задание №5.
Изучите инструкцию к диагностическим тест-полоскам фирмы ФАН и БИОСЕНСОР АН, перепишите её в тетрадь;
Получите образцы биологической жидкости и тест-полоски у преподавателя и проведите самостоятельное исследование мочи;
Результат запишите в бланки анализа;
Оцените полученный результат с позиции «норма-патология» и сдайте преподавателю.
Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок ФАН
Принцип основан на:
полуколичественном определении кетонов. Диагностическая зона пропитана щелочным буфером и нитропруссидом натрия, который при низких величинах ph (в щелочной среде) вступает в реакцию с ацетоуксусной кислотой и ацетоном, вследствии чего образуется комплекс коричневато-красного цвета. Интенсивность окраски прямопропорциональна количеству кетонов в исследуемой моче.
Чувствительность и специфичность:
Чувствительность зоны к ацетоуксусной кислоте составляет 0,5 ммоль/л, для ацетона – 10 ммоль/л.
Оценка теста
Цветная шкала диагностической тест полоски с 2004 года представлена 4 зонами:
1 зона: бледно-желтая – отрицательная;
2 зона: розово-бежеватого цвета – соответствует15 ммоль/л (16мг/дл);
3 зона: насыщенного бежевато-розоватого цвета –5,0 ммоль/л (53 мг/дл);
4 зона: коричневато-красного цвета – соответствует 15 ммоль/л (160 мг/дл).
Интерпретация полученных результатов:Реакция оценивается через 60 сек после погружения диагностической полоски в мочу, путем сравнения образовавшейся окраски реагентной зоны с цветовой шкалой (стандартом). Если результат лежит между двумя цветовыми квадратами, то результат оценивают по наиболее близкой по окраске зоне цветовой шкалы.
Положительным результат считается, если диагностическая зона при контакте с исследуемой мочой принимает тот или иной оттенок цветной шкалы.
Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок фирмы БИОСЕНСОР АН
Данные тест-полоски предназначены для определения двух важных показателей (глюкозы и кетоновых тел в моче), что очень важно в диагностике и контроле показателей у больных Сахарным диабетом.
1
|
Тщательно перемешайте мочу стеклянной палочкой;
|
2
|
Произведите отбор 10мл мочи для исследования мочевого осадка;
|
3
|
Затем возьмите строго необходимое количество тест-полосок для исследования мочи (ровно столько сколько у Вас образцом мочи);
|
4
|
Закройте пенал фабричной крышкой;
|
5
|
Опустите тест-полоску в мочу на 2-3 сек, так чтобы все реагентные зоны были в моче;
|
6
|
Выньте тест-полоску из мочи, убрав излишки жидкости ребром полоски о край посуды или промокните ребром полоски о фильтровальную бумагу;
|
7
|
Положите тест-полоску на ровную поверхность диагностическими зонами вверх;
|
8
|
Оцените полученный результат через 60 сек с цветовой шкалой (стандартом) на пенале.
|
9
|
Запишите полученный результат в бланки анализа.
|
Диапазон определяемых концентраций глюкозы в моче:
      
0,0 0,05 0,1 0,25 0,5 1,0 ≥ 2,0 %
0,0 2,8 5,6 14,0 28,0 56,0 ≥ 112,0 ммоль/л
0,0 50 100 250 500 1000 ≥ 2000 мг/дл
Диапазон определяемых концентраций кетоновых тел в моче:
0,0; 0,5; 1,5; 4,0; 8,0; 16,0 ммоль/л
     
0,0 0,5 1,5 4,0 8,0 ≥ 16.0 ммоль/л
Факторы, влияющие на определение кетоновых тел в моче
При оценке результатов проб на кетоновые тела в моче следует учитывать ряд факторов. Так, например, известно, что ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна до 8 — 10 дней, при бактериурии или большом количестве дрожжевого грибка может полностью исчезнуть в течение 24 часов. Около 20% ацетона при комнатной температуре исчезает за 24 часа, но сохраняется в холодильнике. Поэтому важное значение имеет правильный сбор мочи, ее хранение и сроки выполнения анализа. Кроме того, кетоновые тела могут исчезать из мочи при бактериурии и invivo, что может привести к ложноотрицательным результатам.
К ложноположительным результатам может привести использование месны, фенолфталеина, метаболитов некоторых препаратов (например, леводопы и каптоприла, капотена, менса и др.); кислая моча, повышенный удельный вес мочи. Все эти факторы приводят к химическому завышению результатов анализа, то есть непосредственно влияют на химическую реакцию определения кетоновых тел в моче, а количество самих кетоновых тел в моче может быть нормальным.
Необходимо помнить, что существуют также факторы, приводящие к клиническому повышению кетоновых тел в моче, то есть непосредственно влияющих на их уровень в моче за счет воздействия на обменные процессы, связанные с образованием кетоновых тел. К таким фактором относится прием некоторых лекарственных препаратов — инозитола, метионина, метформина, фенформина, феназопиридина, эфирного наркоза, интоксикация изониазидом, изопропиловым спиртом, ацетилсалициловой кислотой.
IIIМодуль. Контрольные вопросы и задания
Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь
1. Как называется состояние, когда в моче обнаруживаются кетоновые тела?
2. Обнаруживаются ли в норме кетоновые тела? В каком количестве? Как называется такое количество в клинической практике?
3. Какие кетоновые тела Вам известны?
4. Какие факторы способствуют появлению в моче кетоновых тел? Разделите их на группы с позиции «физиологические состояния» и «патологические состояния».
5. Какие изменения в крови и моче характерны для больного сахарным диабетом?
6. Какие изменения в крови и моче характерны для больного лейцинозом?
7. Как образуются кетоновые тела?
8. Какие существуют методы определения кетоновых тел в моче?
9. Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Лестраде? На чем основан принцип метода? Ход определения?
10. Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Ланге? На чем основан принцип метода? Ход определения?
11. Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Легаля? На чем основан принцип метода? Ход определения?
12. Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Ротеры? На чем основан принцип метода? Ход определения?
13. Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью диагностических тест-полосок?
14. Назовите основные принципы работы с тест-полосками?
15. Какие факторы, влияют на определение кетоновых тел в моче?
16. Дайте определение понятиям: кетонемия, кетонурия, лейциноз.
Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал
-
Кетонурия
|
|
Кетонемия
|
|
Лейциноз
|
|
с) ПРОВЕРЬТЕ ВАШИ ЗНАНИЯ
1. Появление ацетона в моче называется?
А) кетонурия;
Б) полиурия;
В) кетонемия.
2. Реакция на кетоновые тела основаны на получении окраски?
А) фиолетовой;
Б) оранжевой;
В) желтой.
3. Ацетонурия характерна для?
А) цистита;
Б) панкреатита;
Б) сахарного диабета.
4. Для какого состояния характерна, ацетонурия без глюкозурии?
А) токсические состояния;
Б) физические нагрузки;
В) оба варианта верны.
5. При какихсстояниях появляется ацетон в моче?
А) гипгликемии;
Б) голодании;
В) употреблении пищи.
6. Кетоновые тела сдвигают рн крови в сторону?
А) алкалоза;
Б) ацидоза;
В) кетоза.
Домашнее задание:
Знать теоретический и практический материал.
Отвечать на контрольные вопросы.
Знать термины.
Литература для самостоятельной подготовки:
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва "Медицина" 1975 г.
Морозова В. Т., Миронова И. И., Марцишевская Р. Л. - Исследование мочи — Москва, РМАПО, 1996 г.
Клиническая лабораторная аналитика - под редакцией Меньшикова В. В. Том III — Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. - Москва, Лабпресс, 2000 г.
|
