oneHbA1c FS *
Гликозилированный гемоглобин
Информация для заказа
Кат. № Фасовка
1 3329 99 10 935 R1 2х15мл+R2 1х10мл+R3 1х5мл
1 4570 99 10 113 1500 мл Гемолизирующий раствор к
наборам oneHbA1c
Справка [1,2]
Гемоглобин A1c (HbA1c) представляет собой гликозилированный гемоглобин (гликогемоглобин), образующийся в результате неферментативной реакции между глюкозой и исходным гемоглобином. Этот процесс непрерывно продолжается на протяжении всей циркуляции эритроцита в крови (средняя продолжительность жизни эритроцита составляет 100 – 120 суток). Степень гликозилирования прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови. Уровень HbA1c отражает средний уровень глюкозы в крови за предшествующие 6 – 8 недель (этот период подвержен влиянию концентрации глюкозы в большей степени, чем предшествующие ему недели, что обусловлено кинетикой эритроцитарного обмена). Тем самым, HbA1c может служить для долгопериодного ретроспективного мониторинга концентрации глюкозы в крови при сахарном диабете. Клинические исследования показали, что снижение уровня HbA1c может предотвратить или отсрочить наступление поздних осложнений диабета.
Поскольку количество HbA1c зависит также от общего количества гемоглобина, измеренное значение HbA1c указывается в процентах от концентрации общего гемоглобина.
Ошибочно низкие значения (низкий HbA1c при высоком уровне глюкозы в крови) могут наблюдаться при сниженном сроке жизни эритроцитов (гемолитические заболевания) или при значительной недавней потере крови (увеличение доли молодых эритроцитов). Ошибочно высокие значения (высокий HbA1c при нормальном уровне глюкозы в крови) обнаруживались при железодефицитной анемии (повышенный процент старых эритроцитов). При клинической интерпретации значений HbA1c следует принимать во внимание эти обстоятельства.
Метод
Иммунотурбидиметрический тест по конечной точке с сенсибилизацией частицами и непосредственным определением HbA1c без измерения общего гемоглобина.
Принцип определения
Общий гемоглобин и HbA1c гемолизированной крови соединяются с латексными частицами реагента R1, обладая одинаковым сродством к ним. Для каждого из этих веществ связанное количество пропорционально концентрации в крови.
К связанному латексными частицами HbA1c присоединяются мышиные моноклональные антитела к человеческому HbA1c (реагент R2). Содержащиеся в реагенте R3 козьи поликлональные антитела к мышиному IgG взаимодействуют с мышиными антителами, что приводит к агглютинации. Измеряемое поглощение света пропорционально количеству HbA1c, связанному с латексными частицами, которое, в свою очередь, пропорционально проценту HbA1c в пробе.
Стандартизация
Тест стандартизирован согласно IFCC референсному методу [3]. Калибровка согласно DCCT/NGSP также возможна. Соответствующие значения калибраторов приведены во вкладыше набора калибраторов TruCal HbA1c.
Значения DCCT/NGSP и IFCC имеют линейную зависимость и могут быть вычислены относительно друг друга с помощью следующих формул:
IFCC = (HbA1c (NGSP) – 2,15) / 0,0915.
NGSP = 0,0915 х HbA1c (IFCC) + 2,15
IFCC: International Federation of Clinical Chemistry [3,4]
DCCT: Diabetes Control and Complications Trial [5]
NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Program [6]
Реагенты
Компоненты и их концентрации реакционной смеси
R1:
|
Латексные частицы, %
|
0,14
|
|
Буфер, ммоль/л
|
20
|
R2:
|
Буфер, ммоль/л
|
10
|
|
Мышиные моноклональные антитела к человеческому HbA1c, мг/дл
|
5,5
|
R3:
|
Буфер, ммоль/л
|
10
|
|
Козьи поликлональные антитела к мышиному IgG, мг/дл
|
67
|
|
Стабилизаторы
|
|
Стабильность и хранение
Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2 – 8 °C. Не допускать загрязнения реагентов!
Подготовка реагентов
Реагенты готовы к использованию.
Для анализаторов, которые не могут работать по 3-х реагентной схеме, реагенты 2 и 3 должны быть смешаны перед использованием в строгой последовательности: перенесите всё содержимое флакона R3 (5 мл) во флакон с R2 (10 мл) и тщательно перемешайте. Убедитесь, что во флаконе R3 не осталось остатков реагента! При этом, для более рационального использования реагентов при небольших потоках анализов рекомендуется смешивать не все содержимое флаконов R3 и R2, а необходимые для работы объемы в указанном соотношении 1 к 2.
Стабильность смешанного R2/R3: не менее 1 месяца при 2 – 8 C.
Меры предосторожности
1. Реагенты содержат азид натрия (0,95 г/л) в качестве консерванта. Не допускать их попадания внутрь, а также на кожу и слизистые оболочки!
2. В очень редких случаях образцы пациентов с гаммопатией могут давать ложные результаты.
3. Следовать мерам предосторожности, предусмотренным при использовании лабораторных реактивов.
4. Необходимо немедленно промывать кюветы после измерения HbA1c. Используйте щелочной моющий раствор, рекомендуемый производителем анализатора.
Обезвреживание отходов
В соответствии с местными правилами.
Необходимые материалы, не включенные в набор
• 0,9% раствор NaCl
• Стандартное лабораторное оборудование.
Исследуемые образцы
• Цельная кровь с добавлением ЭДТА.
Загрязненные образцы хранению не подлежат.
Подготовка образцов
Для подготовки проб требуется гемолизирующий раствор DiaSys oneHbA1c (№ по каталогу: 1 4570 99 10 113).
Подготовка образца:
Гемолизирующий раствор 1000 мкл
Проба/Калибратор / Контроль 20 мкл
Перемешайте пробу с гемолизирующим раствором и выждите 5 минут или до полного гемолиза.
Стабильность образцов [7]
Цельная кровь: 1 неделя при 2 – 8 C
Гемолизат: 10 часов при 15 – 25 C
Гемолизат: 10 дней при 2 – 8 C
Процедура определения
Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно
Длина волны, нм 660
Длина опт. пути, см 1
Температура, °С 37
Измерение против воздуха
Трехреагентная схема
|
Холостая проба
|
Образец/ калибратор
|
Образец/калибратор, мкл
|
–
|
20
|
Дист. вода, мкл
|
20
|
–
|
Реагент 1, мкл
|
750
|
750
|
Перемешайте, инкубируйте 2 мин, затем добавьте:
|
Реагент 2, мкл
|
250
|
250
|
Перемешайте, инкубируйте 3 мин, затем добавьте:
|
Реагент 3, мкл
|
125
|
125
|
Запустить секундомер сразу после внесения Реагента 3, перемешать, инкубировать точно 2 мин и измерить оптическую плотность (А)
|
Двухреагентная схема – предварительно смешаны R2/R3
|
Холостая проба
|
Образец/ калибратор
|
Образец/калибратор, мкл
|
–
|
30
|
Дист. вода, мкл
|
30
|
–
|
Реагент 1, мкл
|
1000
|
1000
|
Перемешайте, инкубируйте 5 мин, затем добавьте:
|
Реагент 2/3, мкл
|
500
|
500
|
Запустить секундомер сразу после внесения Реагента 2/3, перемешать, инкубировать точно 5 мин и измерить оптическую плотность (А):
|
Расчет
Концентрация HbA1c в тестируемых пробах определяется по калибровочной кривой с использованием соответствующей математической модели, такой как сплайн-аппроксимация. Калибровочная кривая строится по поглощениям 4 калибраторов различных концентраций и изотонического раствора NaCl (0,9%), используемого для построения нулевой точки.
Стабильность калибровки: 6 суток для 2-х реагентной схемы.
8 недель для 3-х реагентной схемы
Калибраторы и контроли
Для калибровки автоматических фотометров рекомендуется набор калибраторов DiaSys TruCal HbA1c.
Для внутреннего контроля качества необходимо с каждой серией образцов проводить измерение контрольной сыворотки DiaSys TruLab HbA1c.
|
Кат. №
|
Фасовка
|
TruLab HbA1c
уровень 1
|
5 9790 99 10 074
|
1 × 0,25 мл
|
уровень 2
|
5 9800 99 10 074
|
1 × 0,25 мл
|
Рабочие характеристики
Диапазон измерений
Тест разработан для определения концентраций HbA1c в диапазоне измерения от 15 до 150 ммоль/моль согласно IFCC (3 - 16 % согласно NGSP).
Данный тест применим при концентрации общего гемоглобина от 6 до 26 г/дл.
Специфичность/Помехоустойчивость
Ввиду того, что в тесте DiaSys oneHb1Ac FS используются антитела, этот тест специфичен для человеческого Hb1Ac.
Аскорбиновая кислота до 60 мг/дл, связанный и несвязанный билирубин до 60 мг/дл, липемия до 2000 мг/дл триглицеридов, ревматоидный фактор до 250 МЕ/мл, карбамилированный гемоглобин до 7,5 ммоль/л и ацетилированный гемоглобин до 5,0 ммоль/л не влияют на точность анализа.
Не наблюдалось также интерференции с уремией, лабильными интермедиатами (основания Шиффа) и видоизменёнными гемоглобинами HbS и HbA2. Повышенные уровни HbF, тем не менее, могут привести к ложно заниженным результатам для HbA1c. При алкоголизме и приёме больших доз аспирина может наблюдаться большой разброс результатов [1].
Чувствительность/Предел определения
Нижний предел определения составляет 1 % HbA1c.
Воспроизводимость
(Hitachi 917, трехреагентная схема, согласно IFCC) (n = 20)
Образец
|
Среднеарифметическое значение, %
|
SD, %
|
CV, %
|
Внутрисерийная
|
Образец 1
|
35
|
0,48
|
1,37
|
Образец 2
|
80,7
|
1,09
|
1,36
|
Образец 3
|
114
|
2,04
|
1,80
|
Межсерийная
|
Образец 1
|
36,5
|
0,66
|
1,82
|
Образец 2
|
83,3
|
1,39
|
1,67
|
Образец 3
|
116
|
1,83
|
1,58
|
Сравнение методов
Сравнение реагента DiaSys oneHbA1c FC (y) и других иммунотурбидиметрических тестов (x) с использованием 109 образцов дало следующие результаты: y = 1,083x – 0,560%; r = 0,987.
Сравнение реагента DiaSys oneHbA1c FC (y) и HPLC-теста (x) с использованием 109 образцов дало следующие результаты (значения DCCT/NGSP): y = 0,968x + 0,199%; r = 0,995.
Референсные значения
Каждой лаборатории рекомендуется самостоятельно установить или уточнить пределы нормы для HbA1c на основании обследования местного населения, не страдающего диабетом.
Предлагаемая клиническая норма HbA1c: [8]
% NGSP ммоль/моль
IFCC
Здоровые 4 - 6 20-42
Направленная терапия < 7 < 53
Изменение терапии > 8 > 64
Литература
1.Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.142-48.
2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company; 1999.
p. 790-6.
3. Jeppsson JO, Kobold U, Barr J, Finke A et al. Approved IFCC reference method for the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002;40:78-89.
4. Hoelzel W, Weykamp C et al. IFCC Reference System for Measurement of Hemoglobin A1c in Human Blood and the National Standardization Schemes in the United States, Japan, and Sweden: A Method-Comparison Study. Clin Chem 2004; 50:1:166-74.
5. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of intensive treatment of diabetes in the development and progression of long-term
complications in insulin-dependent diabetes mellitus. N Engl J Med.1993;329:977-86.
6. Little RR, Rohlfing CL, Wiedmeyer HM, Myers GL et al. The National Glycohemoglobin Standardization Program: A Five-Years Progress Report. Clin Chem 2001;47:1985-92.
7. Data on file at DiaSys Diagnostic Systems GmbH
8. Pantheghini M, John WG on behalf of the IFCC Scientific Division. Implementation of haemoglobin A1c results traceable to the IFCC reference system: the way forward. Clin Chem Lab Med 2007; 45(8): 942-4.
9. Nordin G., Dybkær R. Recommendation for term and measurement unit for “HbA1c”. Clin Chem Lab Med 2007; 45(8): 1081-2.
10. Sacks DB. Translating Hemoglobin A1c into Average Blood Glucose: Implications for Clinical Chemistry. Clinical Chemistry 2008; 54: 1756-8.
Изготовитель
DiaSys Diagnostic Systems GmbH & Co. KG
Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany
*FS – жидкие стабильные (Fluid stable)
|
