α-АМИЛАЗА ДиаС α-Amylase CC DiaS 
Creatinine FS *
Набор реагентов для определения общей активности α-амилазы кинетическим
методом в сыворотке крови и моче
Информация для заказа
Кат. №
|
Фасовка
|
SB 10 050 021
|
R1 2х68 мл + R2 2x17 мл
|
SB 10 050 022
|
R1 6х68 мл + R2 6х17 мл
|
Справка [1, 2]
α-амилазы – это гидролитические ферменты, разлагающие крахмал до мальтозы. В организме человека α-амилазы имеют различное происхождение: панкреатическая амилаза производится поджелудочной железой и выходит в Кишечный тракт, слюнная амилаза синтезируется в слюнных железах и секретируется в слюну. Присутствующая в крови амилаза выходит через почки и экскретируется в мочу. Следовательно, увеличение сывороточной активности отражается в повышении мочевой амилазной активности.
В основном, измерение α-амилазы в сыворотке и в моче используется для диагностики нарушений работы поджелудочной железы и для обнаружения развития осложнений [1, 2]. При острых панкреатитах активность амилазы крови повышается в течение нескольких часов после начала болей в животе, примерно через 12 ч достигает пика и возвращается к нормальным значениям по прошествии 5 дней. Специфичность α-амилазы для болезней поджелудочной железы не очень высока, поскольку повышенные уровни также наблюдаются при различных болезнях, не связанных с поджелудочной железой, например, паротите и почечной недостаточности. Поэтому для подтверждения острого панкреатита необходимо дополнительно проводить измерение активности липазы.
Метод
Ферментативный фотометрический тест, в котором субстрат 4,6-этилиден-(G7)-п-нитрофенил-(G1)-α-D-мальтогептазид (EPS-G7) расщепляется α-амилазами на различные фрагменты. Далее они, в свою очередь, расщепляются α-глюкозидазой с образованием глюкозы и п-нитрофенола. Увеличение оптической плотности представляет общую (панкреатическую и слюнную) амилазную активность образца [3, 4].
Принцип определения
5EPS-G7 + 5H2O 
2Этилиден-G5 + 2G2PNP + 2Этилиден-G4 +
+ 2G3PNP + Этилиден-G3 + G4PNP
2G2PNP + 2G3PNP +
+ G4PNP + 14H2O  5PNP + 14G
(PNP = п-Нитрофенол, G = Глюкоза)
Реагенты
Компоненты и их концентрации в реакционной смеси
R1:
|
Good’s буфер, моль/л (pH 7.15)
|
0,1
|
|
NaCl, ммоль/л
|
62,5
|
MgCl2, ммоль/л
|
12,5
|
α-Глюкозидаза, кЕ/л
|
≥2
|
R2:
|
Good’s буфер, моль/л (pH 7.15)
|
0,1
|
EPS-G7, ммоль/л
|
8,5
|
Стабильность и хранение
Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С, защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты!
Меры предосторожности
1. Слюна и кожа содержат α-амилазу, поэтому никогда не пипетировать реагенты ртом и избегать контакта реагента с кожей.
2. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л).
Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми.
3. Обычные меры предосторожности, принимаемые при работе с лабораторными реактивами.
Обезвреживание отходов
В соответствии с местными правилами.
Подготовка реагента
Запуск реакции субстратом
Реагенты готовы к использованию.
Запуск реакции образцом
Смешайте 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент.
Стабильность монореагента:
-
-
6 месяцев
|
при 2–8°C
|
4 недели
|
при 15–25°C
|
Монореагент хранить в защищенном от света месте!
Необходимые материалы, не включенные в набор
• 0,9% раствор NaCl.
• Общее лабораторное оборудование.
Исследуемые образцы
• Сыворотка.
• Гепаринизированная или ЭДТА плазма.
• Моча.
Стабильность в сыворотке или плазме [5]:
-
-
7 дней
|
при 20–25°C
|
7 дней
|
при 4–8°C
|
1 год
|
при -20°C
|
Стабильность в моче [5]:
-
-
2 дня
|
при 20–25°C
|
10 дней
|
при 4–8°C
|
3 недели
|
при -20°C
|
Загрязненные образцы хранению не подлежат.
Процедура определения
Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно
Длина волны, нм
|
Hg 405
|
Длина опт. пути, см
|
1
|
Температура, °C
|
37
|
Измерение
|
относительно холостой пробы
|
Запуск реакции субстратом
|
|
Холостая
проба
|
Сыворотка/плазма
|
Моча
|
Образец/калибр., мкл
|
–
|
20
|
10
|
Реагент 1, мкл
|
1000
|
1000
|
1000
|
Перемешать, инкубировать 1 мин, затем добавить:
|
Реагент 2, мкл
|
250
|
250
|
250
|
Перемешать. Через 2 мин измерить оптическую плотность (А1) и включить секундомер. Измерить оптическую плотность (А2) через 1, 2 и 3 мин.
|
Запуск реакции образцом
|
Холостая
проба
|
Образец/
стандарт
|
Моча
|
Образец/стандарт, мкл
|
–
|
20
|
10
|
Монореагент, мкл
|
1000
|
1000
|
1000
|
Перемешать. Через 2 мин измерить оптическую плотность (А1) и включить секундомер. Измерить оптическую плотность (А2) через 1, 2 и 3 мин.
|
Расчет
По фактору
Из значений оптической плотности вычислить ΔA/мин и умножить на соответствующий фактор из нижеследующей таблицы:
ΔA/мин х фактор = Амилазная активность [Е/л]
Сыворотка/плазма
|
|
Запуск субстратом
|
5670
|
|
Запуск образцом
|
4554
|
Моча
|
|
Запуск субстратом
|
11250
|
|
Запуск образцом
|
9018
|
по калибратору
α-Амилаза [Е/л] =  х Конц. кал. [Е/л]
Калибраторы и контроли
Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется калибратор TruCal U фирмы DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.
|
Кат. №
|
Фасовка
|
TruCal U
|
5 9100 60 10 060
|
1х3 мл
|
TruLab N
|
5 9000 60 10 060
|
1х5 мл
|
TruLab P
|
5 9050 60 10 060
|
1х5 мл
|
Рабочие характеристики
Диапазон измерений
При использовании автоматических анализаторов тест позволяет определять активность амилазы в диапазоне измерений до 2000 Е/л.
В ручном режиме измерений тест применяется для определения активности амилазы, соответствующей изменению оптической плотности не более ΔA/мин = 0.35. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разведен 1 + 9 изотоническим раствором NaCl (9 г/л), и полученный результат должен быть умножен на 10.
Специфичность/Помехоустойчивость
аскорбиновая к-та до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл и липемия до 1000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа. Гемоглобин, даже при низких концентрациях, мешает определению.
Чувствительность/Пределы определения
Нижний предел определения 3 Е/л.
Воспроизводимость
(число измерений n = 20)
Образец
|
Среднеарифметическое значение, Е/л
|
SD, Е/л
|
CV, %
|
Внутрисерийная
|
Образец 1
|
184
|
2,00
|
1,08
|
Образец 2
|
398
|
2,67
|
0,67
|
Образец 3
|
841
|
4,96
|
0,59
|
Межсерийная
|
Образец 1
|
180
|
1,82
|
1,01
|
Образец 2
|
383
|
3,74
|
0,97
|
Образец 3
|
817
|
7,48
|
0,92
|
Нормальные величины [6]
|
Женщины
|
Мужчины
|
Сыворотка/плазма, Е/л
|
< 100
|
< 100
|
Моча, Е/л
|
< 447
|
< 491
|
Литература
1. Lorentz K. α-Amylase. In: Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.192-202.
2. Moss DW, Henderson AR. Digestive enzymes of pancreatic origin. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p.689-698.
3. Kruse-Jarres JD, Kaiser C, Hafkenscheid JC, Hohenwallner W, Stein W., Bohner J et al. Evaluation of a new alpha-amylase assay using 4,6-ethylidene-(G7)-1-4-nitrophenyl-(G1)-alpha,D-maltoheptaoside as substrate. J Clin Chem Biochem 1989; 27: 103-113.
4. Schumann G, Aoki R, Ferrero CA et al. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37°C. Clin Chem Lab Med 2006; 44(9): 1146-1155.
5. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 16-7, 50-1.
6. Junge W, Wortmann W, Wilke B, Waldenstroem J et al. Development and evaluation of assays for determination of total and pancreatic amylase at 37°C according to the principle recommended by the IFCC. Clin Biochem 2001; 34: 607-15.
Разрешено к обращению на территории Российской Федерации РУ № ФСР 2011/11406
Система менеджмента качества сертифицирована на соответствие требованиям: ISO 9001:2008, EN ISO 13485:2012, ГОСТ ISO 9001-2011, ГОСТ ISO 13485-2011
 Допущено к обращению на территории Европейского Союза
Авторизованный представитель ЗАО «ДИАКОН-ДС» в ЕС
CE-partner4U
ESDOORNLAAN 13, 3951DB MAARN, THE NETHERLANDS
Изготовитель
ЗАО «ДИАКОН-ДС»
142290, Московская область, г. Пущино, ул. Грузовая, д. 1а.
По лицензии
«DiaSys Diagnostic Systems GmbH», Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany. Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany.
http://www.diakonlab.ru
E-mail: sale@diakonlab.ru
Тел.: (495) 980-63-39
Тел./факс: (495) 980-66-79
|
