МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ ПРИ ИНСТИТУТЕ МОРФОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА АМН СССР
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ИССЛЕДОВАНИЮ
БИОПСИЙНОГО И ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Москва, 1972
Инструкция подготовлена сотрудниками кафедры патологической анатомии ЦОЛИУв, Центральной патологоанатомической лабораторий Института морфологии человека АМН СССР, клинических лабораторий Института клинической и экспериментальной онкологии и Московского онкологического Института имени П. А. Герцена.
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. Министра здравоохранения
СССР
J1. Ф. Серенко
8 июля 1972 г.
И НСТРУКЦИЯ
По исследованию биопсийного и цитологического материала
В настоящее время возрастает роль морфологических исследований в комплексе обследования и лечения больных. Постоянно усложняются задачи, которые ставятся клиницистом перед патологоанатомами в ходе лечения больных, оправданности хирургического вмешательства, его успешности, рациональной терапии и прогнозирования.
В клинике используется несколько способов биопсий: открытая, пункционная, аспирационная и трепанобиопсия. Важное значение имеет цитологический метод как самостоятельный метод морфологического исследования. Минимальная травма при взятии материала и возможность произвести исследование в экстренном порядке представляют серьезные преимущества этого метода исследования. Гистологическое и цитологическое исследования взаимно дополняют друг друга. Особого внимания требует исследование опухолей.
При характеристике новообразования необходимо определить гистологическую принадлежность опухоли, ее гистогенез, степень катаплазии и возможный прогноз, на основании чего клиницист сможет обоснованно выбрать наиболее рациональный способ лечения. Важно отметить—произведена операция в пределах здоровых или пораженных тканей и детально определить реакцию регионарных лимфатических узлов. Как при гистологическом, так и при цитологическом исследовании необходимо принимать во внимание клинические данные. Особенно важна подробная информация в случае консультации по почте.
Инструкция но исследованию
биопсийного и цитологического материалов
Патологоанатомическому исследованию подлежат диагностические биопсии, а также все органы и ткани, удаленныепри хирургических операциях в отделениях данного лечебно-профилактического учреждения и прикрепленных к немулечебных учреждений. Цитологическому исследованию подлежат мазки, мокрота, различные жидкости, пунктаты, кусочки ткани, моча и т. п.
Целью и задачей патогистологических и цитологических исследований является подтверждение и уточнение клинического диагноза, установление диагноза в клинически неясных случаях, определение начальных стадий заболевания, распознавание различных по форме и этиологии воспалительных, гиперпластитеских и опухолевых процессов. Исследование биопсийного и операционного материалов позволяет судить о радикальности операции, о динамике патологических процессов, об изменениях, возникающих в тканях или новообразованиях под влиянием лечения.
Объекты, подлежащие исследованию, доставляются в патологоанатомическое отделение (где также должен быть установлен четкий порядок приема и регистрации их) в сроки, обеспечивающие своевременность ответов.
Доставляемый на исследование материал должен быть тщательно маркирован: фамилия, инициалы больного и номер истории болезни. Эти данные либо наклеивают на банку с объектом, подлежащим исследованию, либо, если это мазок, наносятся карандашом (чтобы в процессе обработки маркировка не смывалась) на матовую (затачивается на одном конце на обыкновенном точильном диске) или оборотную сторону предметного стекла. При помещении в одну посуду несколько объектов от разных больных каждый из них от дельно завязывается в марлю с прикрепленной к ней биркой из плотной бумаги или белого картона, не размокающих и жидкости, где простым карандашом должна быть проставлена фамилия и инициалы больного, у которого взят материал для исследования.Мокрота, различные жидкости (из плевральных, брюшной, кистозных и других полостей, моча, обильные пунктаты, кусочки ткани и другие объекты) доставляются в отдельных пробирках, банках или в чашках Петри, на которые обязательно наклеивается бланк направления на исследование.
4. Присланный из клинического отделения объект, негодный для исследования (подсохший, загнивший, замороженный) не принимается, о чем немедленно ставят в известность заведующего отделением.
5. На каждый подлежащий исследованию объект заполоняется специальный бланк направления на исследование (учетная форма М3 СССР № 218), который доставляетсявместе с объектом в патологоанатомическое отделение. Все графы бланка должны быть заполнены врачом клиницистом таким образом, чтобы производящий исследование патологоанатом (патолого-цитолог) имел достаточно клинических сведений при оценке обнаруженных морфологических (цитологических) изменений. Помимо клиники заболевания, в бланке должны быть приведены краткие данные анамнеза и приводящегося лечения (общее количество введенных антистатических и гормональных препаратов, характер леченой терапии и др.).
Если бланк направления заполнен небрежно и в нем отсутствуют необходимые данные, заведующий патологоанатомическим отделением ставит об этом в известность заведующего клиническим отделением, откуда прислана биопсия.при повторных случаях сообщает главному врачу (директору института); его заместителю по лечебной части.
6. Участки ткани или органа, полученные при биопсии с диагностической целые, категорически запрещается делить на части и посылать их в разные патологоанатомические лаборатории. В. подобных случаях морфологические изменен нехарактерные для данного процесса (рак, туберкулез и т. д. могут оказаться только в одной части объекта, а следовательно, и результаты исследования будут различны. Это может дезориентировать лечащих врачей и нанести вред больному.
По той же причине материал, подлежащий цитологическому исследованию, доставляется в патологоанатомическую лабораторию весь, вне зависимости от его количества (все мазки, вся жидкость, все необходимые кусочки ткани, вся мокрота, вся моча и т. д.).
7. Ответственность за доставку материала в патологоанатомическое отделение несет врач, назначивший данное исследование. Материал доставляют в патологоанатомическое отделение сотрудники лечебного отделения. Если по условию работы отослать материал немедленно после операции невозможно, то хирург, производивший операцию, обеспечивает правильную фиксацию (в 10% растворе формалина) сохранность материала. Если больной умер во время операции или вскоре после нее, вместе с трупом в патологоанатомическое отделение доставляются резецированные при операции органы. Цитологические объекты доставляются в патологи - анатомическую лабораторию тотчас же после получения больного (от трупа).
8. Персонал патологоанатомического отделения (лаборатории) должен бытьпроинструктирован об особой ответственности за правильный прием, регистрацию и сохранность, принятого и обработанного материала, что нередко решает вопрос о здоровье и жизни больного.
9. Лаборант патологоанатомического отделения, принимая поступающий в лабораторию материал вместе ссопроводительным бланком, проверяет правильность и полноту заполнения всех граф и соответствие полученного материала указаниям на бланке.
10. Регистрация биопсий, материала, удаленного при хирургических вмешательствах и цитологических исследований осуществляется лаборантом. 1-ый вариант регистрации: книга регистрации содержит следующие графы: №№ по порядку (нумерацию исследования каждый год рекомендуется начинать заново), каждому присланному материалу присваивается столько номеров, сколько кусочков вырезается для исследования (см. приложение № 1); дату поступления и дату исследования материала; фамилия, имя, отчество больного; возраст; помер истории болезни; объект исследования; предполагаемый клинический диагноз; необходимые клинические сведения о больном; гистологическое или цитологическое описание препарата и диагноз; расписку в получении заключения.
II вариант регистрации; паспортные данные заносят в чистый бланк, па котором также,называют соответствующий номер исследования, и куда вносят под копирку результаты макроскопического и микроскопического исследования. В лечебное учреждение отсылается копия заключения, а оригинал бланка, полученный вместе с материалом, брошюруют в папки и хранят в лаборатории. Таким образом, в лаборатории сохраняются все клинические сведения о больном, что обеспечивает более четкую документацию и возможность обобщения результатов биопсийной работы; целесообразно заполнять все графы бланка в патологоанатомическом отделении на пишущей машинке.
11. Макроскопическое описание материала, подлежащего исследованию, определение методов его обработки (в случае цитологического исследования доставленные мазки дополнительной обработки не требуют), способов исследования и необходимых видов окраски (см. приложение № 1) производит соответственно врач патологоанатом или врач патологоцитолог. Поручать эту работу лаборанту запрещается.
Каждому исследователю (блок, кусочек, мазок) присваивается очередной порядковый номер, который пишется набирке, помещаемой в посуду с исследуемым материалом, на блоке при заливке в целлоидин и проставляется на гистологических препаратах. Под номером исследования на предметных стеклах дробью проставляют две последние цифры года исследования.
Исследование присланных кусочков ткани необходимо заканчивать в следующие сроки;
а) экстренных биопсий не позднее 20—25 минут от момента получения материала;
б) диагностических биопсий и операционного материала в течение,4—5 суток. Срок обработки костной ткани и биопсий, требующих дополнительных методов окраски и консультации высококвалифицированных специалистов, может быть продлен.
Исследование цитологического материала должно заканчиваться в следующие сроки: а) срочное субоперационное исследование выполняется в течение 20—30 минут;б) плановое исследование выполняется не позднее чем через 48 часов с момента поступления Материала в патологоанатомическое отделение (патогистологическую лабораторию).
Каждое патогистологическое исследование должно завершаться подробным ответом с описанием подробной картины мазков и заключением. При исследовании нескольких цитологических объектов от одного больного (или трупа) подробные ответы даются на каждый объект.
Описательная часть цитологического ответа должна содержать подробную характеристику всей микроскопической картины с детальным описанием морфологии и структурных особенностей клеточных элементов. Это необходимо, во-первых, Для обоснования цитологического заключения, а во-вторых, для сопоставления с данными гистологического исследования и дальнейшего углубления и совершенствования знаний цитолога.
Заключение но цитологическому анализу должно полностью вытекать из данных макроскопического и микроскопического изучения доставленного материала и содержать указание на тот или иной патологический процесс (новообразование, гиперпластическое состояние, воспаление); и если представляется возможным, с максимальным раскрытием его существа (например: «рак из железистого эпителия строения аденокарциномы с высокой степенью дифференцировки элементов паренхимы и выраженной секреторной активностью клеток» или «неспецифнческий воспалительный процесс в фазе организации с наличием ксантомных клеток игигантских многоядерных клеток инородных тел—липогранулома»).
Заключение может даваться в уверенной или предположительной форме, иногда с указанием на необходимость дифференцировать несколько патологических процессов. В заключении также указывается на невозможность судить о процессе из-за малого числа клеток, их дистрофии, повреждения; неудачи цитологического исследования, связанные с плохим взятием материала от больного (или трупа), также отмечаются в заключении (например: «пункция не дала результатов»; «на исследование доставлен гнойно-некротический налет; судить о патологическом процессе нельзя»; «тканевого материала не получено»).
В целях правильного толкования цитологических данных в клинике при оформлении цитологических заключений цитолог должен помнить следующее: отсутствие клеточных элементов злокачественного новообразования в любом Объекте исследования не является доказательством отсутствия злокачественного роста у больного.
15. Копии бланков с результатами гистологического или цитологического исследования пересылаются в клинические отделения (под расписку) и должны быть вклеены в историю болезни.
16. Архивные гистологические (цитологические) препараты и книги регистрации—рекомендуетсяхранить на протяжении всего_ времени существования патологоанатомического отделения.В зависимости от местных условии гистологические препараты червеобразных отростков, грыжевых мешков, миндалин, соскобов из полости матки после неполного аборта, сохраняются 1 год, после чего препараты могут быть уничтожены. Гистологические препараты доброкачественных и. злокачественных опухолей, процессов, подозрительных на опухолевый рост и специфическое воспаление, подлежат постоянному хранению. Целлоидиновые блоки хранят в банках с 70◦ раствором спирта, на которых должны быть этикетки с указанием номеров и года исследования. Для длительного хранения залитого в целлоидин материала последний снимают с блоков, нанизывают на нитку и вместе с биркой, на которой указываете номер и год исследования, помещают в 70° раствор спирта.
17. Макропрепараты или кусочки, вырезанные из них, хранятся в 10% растворе формалина в течение года, после чего уничтожаются. Кусочки из опухоли мозга, мягкотканыхзлокачественных опухолей, других редко встречающихсязлокачественных опухолей и во всех неясных случаях рекомендуется хранить в 10% растворе формалина в течение всего времени существования лаборатории.
18. Гистологические и цитологические препараты могут быть выданы больному, родственникам его.или медицинскому персоналу для консультации с другом лечебном учреждении при наличии официального письменного запроса из этого учреждения. Соответствующее отношение с запросом вклеивается в книгу регистрации цитологических заключений соответственно номеру препарата, а по возвращении препаратов перечеркивается. Лечебное учреждение, которому выданы препараты, обязано возвратить их в патологоанатомическое отделение. Выдача на руки больным бланков исследованиязапрещается.
19. В целях повышения качества морфологической диагностик в лечебных учреждениях СССР рекомендуется широко использовать консультативную помощь высококвалифицированных специалистов (главных патологоанатомов областей, краев, республик, заведующих кафедр патологической анатомии медицинских вузов и институтов усовершенствования врачей, руководителей лабораторий научно-исследовательских институтов и консультативный совет Всесоюзного научно-методического центра патологооанатомической службы при Институте морфологии человека АМН СССР)
20. При отправке материалов на консультацию следует строго соблюдать следующие правила:
а) патологоанатомический материал направляется с сопроводительным документом главного патологоанатома областного (краевого), республиканского органа здравоохранения;
б) на консультации принимается биопсийный, операционный и секционный материал только в соответствующей упаковке и при наличии сопроводительных документов. На посылаемыйматериал заполняется официальныйбланкнаправления на патологоанатомическое исследование с обязательным заполнением всех граф этого документа дополнительными сведениями о больном, облегчающими диагностику.
г) материал, посылаемый на консультацию, можетбытьпредставлен в виде готовых гистологических микропрепаратов, блоков (целлоидиновых, парафиновых) и фиксированных кусочков ткани с указанием метода фиксации. Заключение по одним гистологическим препаратам дается только в случаях, не требующи. дополнительных методов окраски;
д) гистологические препараты должны быть присланы на стандартных предметных стеклах или рентгеновской пленкес четко написанными номерами препаратов. Желательно иметь не менее двух дубликатов, помещенных на отдельные стекла. Микропрепараты должны быть высокого качества и окрашены необходимыми для каждого конкретного случая методами;
е) упаковка материала, должна обеспечить его сохранность и исключить повреждение при любом способе транспортировки и длительности пересылки;
ж) блоки, материала, залитого в парафин, должны иметь соответствующую маркировку. Если с парафиновых или целлоидиновых блоков ранее делались срезы, то перед отправкой их поверхность среза необходимо залить дополнительным слоем парафина или целлоидина.
21. Материалы па консультацию следует высылать бандеролью с оплаченной доставкой в соответствующее учреждение (без указания фамилий сотрудников лаборатории).
22. Заключение консультанта высылается в учреждение, направившее материал на консультацию. Выдача заключения на руки больным запрещается.
Приложение № 13 к приказу М3 СССР № 316 1959 года считать утратившим силу.
Приложение № 1
Примерное количество кусочков, иссекаемых из органов и
тканей для патологоанатомического исследования
Рекомендуется иссекать из органов н тканей следующее количество кусочков:
Злокачественные опухоли
Рак гела матки (саркома матки и др.): опухоль—1—2: граница опухоли с. неизмененными тканями —2; шейка матки— 1; два яичника — 2; две трубы — 2; лимфатические узлы клетчатки параметрия — 3: миоматозные узлы (если они есть)—2 (всего 10—14 кусочков).
Рак шейки матки — опухоль шейки: 1—2: граница опухоли и неизмененные ткани — 2; цервикальный капал — 1; из тела матки—1; два яичник :— 2; две трубы —2; лимфатические узлы клетчатки параметрия — 3; миоматозные узлы (если они есть)—2 (всего 11—15 кусочков). Доброкачественные процессы в матке (миомы, эндометриоз и др.):трубы — 2; яичники — 2; паровариальная киста— I (всего 3—12 кусочков).
Желудок (опухоль): опухоль—1—2; граница опухоли с неизмененными тканями— 1—2; линии резекции в кардиальном пилорическом отделах — 2; регионарные л/узлы — 1—- 3; сальник—-1 (всего 8-—12 кусочков).
Желудок (язва): язва —край, дно—1—2; стенка желудка на остальном протяжении-1—2; регионарные л/узлы—3 (5—8 кусочков).
Молочная железа: опухоль—1—3; граница опухоли с неизмененными тканями—1—2; ткань молочной железы на остальном протяжении — 2—3; л/узлы (подмышечные, подключичные)— 3 (всего 7—14 кусочков).
Опухоли мягких тканей: опухоль — 2—6; граница опухоли с неизмененными тканями—1—3 (всего 3—7 кусочков).
Легкое (опухоль): опухоль — 1—3; граница опухоли и ткани легкого — 2; ткань легкого на остальном протяжении — 2—3; регионарные л/узлы — 3 (всего 8—14 кусочков).
Легкое (нагноительные процессы и пр.): от 3 до 8 кусочков. •
Кишка слимфоузлами: от 3 до 6 кусочков.
Пищевод: кусочки, взятые при эзофагоскопии — все.
Резецированный пищевод с лимфоузлами: 3—5 кусочков. '
Щитовидная железа: из каждой доли — 1—2 кусочка;
лимфоузлы—I—3 кусочка (всего 6—8 кусочков).
Опухоли яичников: (при удалении с маткой и трубами) — кусочки из опухоли—2—3; маточные трубы—1—2; из эндометрия—2—3; миоматозныеузлы(если они есть)—2—3 (всего 8—12 кусочков).
Гортань опухоль —2; лимфоузлы —2 (всего 2—5 кусочков).
Предстательная железа: из каждого’ узла — 1—2,' или все кусочки в виде соскоба при взятии материала методом трансуретральнойэлектрорезекции.
Червеобразные отростки исследуются или целиком, путем изготовления «рулонов» или вырезаются 1—2 кусочка из наиболее измененного участка и из участка, удаленного от зоны патологического процесса.
Миндалины, лимфатические узлы, кусочки шейки матки, полипы и другие ткани исследуются каждый кусочек отдельно.
Маточные трубы при внематочной беременности: 1—2кусочка.
Желчный пузырь: 2—3 кусочка из стенки или опухоли, при наличии лимфоузлов — 3 (всего 2—6 кусочков).
Из других органов и тканей вырезается 2—3 кусочка; из опухоли или из участка, пораженного патологическим процессом; 1—2 кусочка из окружающей патологический процесс ткани; при удалении одновременно лимфоузлов, исследуются не менее 3-х лимфоузлов, даже при отсутствии в них макроскопических признаков опухоли.
Материал, полученный посредством соскоба, в том числе при гинекологических исследованиях, при аспирационных и других видах биопсии, при трепанобиопсии, исследуется целиком.
При небольшом объеме кусочков последние монтируются на один блок.
Приложение № 2
Методы фиксации и окраски
при гистологическом исследовании
Обычным методом фиксации гистологических объектов, подлежащих гистологическому исследованию, является 10% раствор формалина. Другие методы фиксации (спирт, спирт в смеси с эфиром, спирт-формалин, фиксаторы, ь состав которых входят соли хромовой кислоты и др.) рекомендуются для специальных исследований.
В зависимости от целей исследования и характера присланного материала применяются различные методы его обработки в соответствии с общепринятой гистологической техникой: замораживание, заливка в целлоидин, целлоидин- парафин, парафин, желатину и т. д. Для быстрого получения высококачественных гистологических препаратов рекомендуются— замораживание и ускоренная заливка в целлоидин.
При исследовании экстренных биопсий, вырезанные кусочки помещают в 10% раствор формалина, который в течение. 2—3 минут подогревают не доводя до кипения, затем промывают в воде и готовят срезы на замораживающем микротоме. Замораживанию можно подвергнуть и нефиксированные кусочки ткани.
Все срезы должны быть окрашены гематоксилин-эозином. При необходимости, рекомендуется докраскасрезов пикрофуксином по методу ванГизона,суданомIII,IV и черным, шарлах-ротом. Импрегнацию аргирофильныхволокон производят по методу Фута, Тибора-Папа или Гомори. Выявление амилоида, извести, гликoгена, окраску в срезах туберкулезных палочек, других микроорганизмов и грибков производя в соответствии с общепринятыми методиками'.
Биопсии, взятые при эзофагоскопии, гастроскопиибронхоскопии и цитоскопиирекомендуется обрабатывать методом ускоренной заливки в парафин. Очень мелкие пленчатые кусочки, с целью предотвращения их сморщивания, рекомендуется перед заливкой натягивать на кусочки свежей печени или яблока, что дает возможность получить ровный срез.
В последнее время большое диагностическое значение приобрело прижизненное морфологическое исследование ткани ряда паренхиматозных органов — печени, почек, селезенки, полученной посредством пункционной, аспирационнойи трепанобиопсии.
Полученные таким путем, обычно очень мелкие кусочки ткани рекомендуется обрабатывать следующим методом:
1) поместить кусочки на марлю и зафиксировать в смечи, состоящей из 10 частей формалина и 9 частей 90 спирта. Время, фиксации кусочка зависит от его величины — от' 3— 4 часов до суток.
2) Поместить кусочки на несколько часов в касторовое масло.
3) Выдержать 30—40 минут в двухпорциях хлороформа
4) Поместить на полтора часа в смесь хлороформа - парафином. •
5) 30 минут—1 час в парафине
Кроме обычных гистологических методик рекомендуется использовать гистохимические методики
Материал для гистологического исследование костного мозга может быть получен методом пункционной биопсии грудины или трепанобиопсин подвздошной кости. Исследование этого материала рекомендуется проводить, по методике разработанной в патологоанатомическойлаборатории ЦОЛИПК.
Пункционные биопсии — крупинки костного мозга содержащиеся в аспирированномпри пункции материале.
Фиксация в жидкости Карнуа — 20—30 минут.
Абсолютный спирт 3—-5 минут (сменяется дважды).
Хлороформ 3—-5 минут (сменяется дважды).
Примечание: фиксация и смена указанных жидкостей производится в первоначально взятом флаконе путем смены растворов (во избежание возможного нарушения структуры костного мозга при сдавливании бранщами пинцета) в условиях комнатного холодильника при температуре+ 4—6°С. •
Парафин-хлороформ (в равных частях) 5—6 минут. В данной смеси объект находится в термостате при 37° или 56° в зависимости от температуры плавления парафина.
I — парафин 3—5 минут в термостате при 56°.
II — парафин 3—4 минуты в термостате при 56°.
Примечание: Измерного парафина во второй парафин и на часовое стекло кусочек костного мозга переносится при помощи глазного пинцета, слегка разогретого над пламенем спиртовки.
Заливка в парафин производится на часовом стекле, предварительно смазанном вазелиновым маслом.
Приготовление срезов (толщина срезов 5 микрон).
Депарафинирование.
Окраска срезов гематоксилин-эозином. С целью дифференциации клеточных элементов костного мозга используется окраска азур-эозином и по методу Доминичи-Кедровского; для изучения состояния соединительной ткани рекомендуется окраска азокармином но методу Гайденгайна и по методу ванГнзона. Аргнрофильные волокна выявляются по методу Тибора-Папа, Фута или Гомори. Кроме того рекомендуется выявление железосодержащих пигментов по методу Перлса, гистохимические методики: ШИК-реакция, реакция Браше и прочие.
-
Трепанобиопсии.
Фиксация в жидкости Карнуа, 10—12% растворе нейтрального формалина, спирте, Цинкср-Формоле и др. Длительность фиксации в жидкости Карнуа 1,5 часа.
Абсолютный спирт 30 минут (сменяется дважды).
Декальцинация может осуществляться различными методами с применением азотной; трихлоруксусной, муравьиной кислот и др. Рекомендуется действенная и щадящая ткани декальцинация—смесь де Кастро:
состав — хлоралгидрат — 50 г
абсолютный спирт — 300 мл
концентрированная азотная кислота — 80 мл дистиллированная вода — 620 мл
Длительность декальцинации — 1 сутки.
Заливка в парафин, целлоидин-парафин и целлоидин.
При заливке в парафин используются спирты восходящей концентрации:
70° — 30 минут (сменяется дважды)
80°— 30 минут (сменяется дважды)
96°—30 минут (сменяется дважды)
абсолютный спирт — 30 минут (сменяется дважды)
хлороформ — 8 минут
парафин-хлороформ—8 минут в термостате при 37° или56◦.
парафин II—10 минут
Заливка в парафин на часовом стекле, предварительно смазанном вазелиновым маслом.
Приготовление срезов — толщина срезов 3—5 микрон
Депарафинирование.
Окраска срезов теми же методами как и при пункционных биопсиях.
Примечание: Фиксация, декальцинация и проводка через спирт в пунктах 1. 2 и 3 осуществляется в комнатном холодильнике. Во избежание повреждения ткани костного мозга все операции до помещен и в парафин-хлороформ производятся в первоначально взятой посуде.
П р и л ож е н и е № 3
Методы фиксации и окраски материала
при цитологическом исследовании
Если доставлены капли жидкости или гноевидные массы, весь материал распределяется на стеклах в виде мазков. Если присланы — сгусток крови, мокрота, слизевидные массы, густая жидкость — весь материал необходимо поместить на чашки Петри и препаривать на белом фоне, отбирая видимые включения (хлопья, беловатые крошковатые гноевидные комочки, прозрачные крупинки, нити), и распределяя их на предметных стеклах в виде тонких мазков (5—10). Если каких-либо включений не видно, следует приготовить 8—10 мазков из разных участков материала, предварительно осторожно его помешав. Доставленную жидкость следует обязательно центрифугировать целиком (при количествах ее до 50-мл) или.взяв часть ее со дна сосуда в 4—6 центрифужных пробирках при 3000—10 000 об/мин в течение 5—7 минут. После центрифугирования учитываются характер осадка и надсадочной жидкости: надосадочная жидкость осторожно сливается или отсасывается пипеткой. Из осадка готовитсявозможно большее число мазков (10—20). Оставшийся материал сохраняется в холодильнике при температуре + 4 — +10е до конца исследования.
В зависимости от характера объекта применяются различные методы окраски цитологических препаратов.
Для пунктатов опухолей и опухолевидных образований различной локализации, отделяемого из соска, с раневой поверхности, с язв, с эрозий, для промывных вод, плевральной н асцитической жидкости, содержимого различных полостей, объектов, полученных при эндоскопическом исследовании, соскобов отпечатков с кусочков тканей, полученных при биопсии и от трупов — основной диагностической окраской является панхромная окраска азурэозиновыми смесями в различной модификации (по Романовскому, по Паппенгейму, поЛейшману).
Для слизевидных объектов—мокроты, отделяемого от шейки матки и влагалища, прямой кишки, а также слизевидныхпунктатов и материалов из очагов некроза ткани — наиболее рациональной является окраска гематоксилин-эозином в различных модификациях, из которых применительно к мазкам наилучшей следует признать окраску гематоксилином, приготовленным по Карачи: 1—фиксация мазка в смеси Никифорова в течение 15 минут: 2 — прополаскивание в этиловом спирте 70° и 50◦; 3 — промывка в дистиллированной воде; 4 — окраска гематоксилином в течение 10—15 минут; 5— ополаскивание в спиртах восходящей концентрации 50°, 70', 96°; 7 — окраска в 0,3%. спиртовом растворе желтоватого эозина — 2 минуты; 8 — отмывание от эозина в двух спиртах 96°;
9—высушивание препарата.
При срочном цитологическом исследовании используется ускоренный метод окраски по Паппенгейму — на подсохший препарат наливают краску — фиксатор Май-Грюнвальда на 2 минуты, смывают ее дистиллированной водой и докрашивают мазок стечение 3 минут смесью 0,1.% водных растворов красок азур-2 и эозина в соотношении 3:2 без разведения их дистиллированной водой, затем краска смывается дистиллированной водой, а мазок высушивается осторожным промоканием фильтровальной бумагой.
|
