УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 04.08. 2009 г. № 6246-Пр/09
|
|
-
Концентрация мультикалибратора, мкмоль/л
|
см. паспорт калибратора
|
Время реакции, мин
|
5
|
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.
|
0,2
|
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.
|
0
|
Границы линейности, мкмоль/л
|
1,54 - 342
|
Максимум нормы, мкмоль/л
|
3,4
|
Минимум нормы, мкмоль/л
|
0
|
* - при проведении исследования у новорожденных допускается использование соотношения 20:1 с последующим умножением полученного результата на два.
8.10. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием мультикалибратора.
8.11. Концентрация прямого билирубина в образце рассчитывается в мкмоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.12. Если полученная концентрация прямого билирубина в образце выше 342 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 ОС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора указан на упаковке.
9.3. Реагенты Р1 и Р2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.
9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter. J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491
Martinek R. Improved micro-method for determination of serum bilirubin. Clin Chem 1966: Acta 13: 61-170.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН –UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41.
E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru
Инструкция
по применению набора реагентов для количественного определения содержания прямого билирубина в сыворотке или плазме крови человека
«ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН - UTS»
Набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН- UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05455
Информация для заказа набора «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН- UTS»
Кат. №
|
Комплектация
|
Количество определений
|
ПБ-09-008-100
|
Р1 (80 мл) + Р2 (20) мл
|
100/v*
|
ПБ-09-008-400
|
Р1 (320) мл + Р2 (80) мл
|
400/v
|
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН - UTS» предназначен для определения содержания прямого билирубина в сыворотке или плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Билирубин является продуктом распада гемоглобина и присутствует в свободной и конъюгированной формах в организме человека. При распаде гемоглобина первоначально образуется гидрофобный (нерастворим в воде), липофильный (жирорастворимый, токсичный) свободный билирубин, в плазме крови он присутствует в основном в комплексе «альбумин-билирубин». Далее комплекс «альбумин-билирубин» транспортируется в печень, в клетках которой свободный билирубин при участии фермента связывается с глюкуроновой кислотой. В результате этого процесса (конъюгации) образуется конъюгированный (прямой) билирубин (водорастворимый и менее токсичный), который активно против градиента концентрации экскретируется в желчные ходы и в составе желчи поступает в кишечник. В норме в крови человека 75% общего билирубина приходится на долю свободного билирубина и 25% на долю прямого (связанного) билирубина.
1.3. Увеличение содержания прямого билирубина в крови может обуславливаться многими причинами: увеличение интенсивности гемолиза эритроцитов; поражение паренхимы печени с нарушением ее билирубинвыделительной функции; нарушение оттока желчи из желчных путей в кишечник. На этом основано клиническое значение анализа [1].
1.4. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение прямого билирубина основано на реакции диазотирования билирубина диазосульфаниловой кислотой (метод Ендрашика) в результате чего образуется соединение азобилирубин розового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется спектрофотометрически при 540 (530-580) нм [2,3,4]. Прямой билирубин взаимодействует с диазосульфаниловой кислотой в водной среде непосредственно.
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 540 нм молекулами окрашенного азобилирубина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски азобилирубина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации прямого билирубина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Для проведения реакции диазотирования набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН-UTS» поставляется в виде двух растворов Реагент Р1и Реагент Р2.
Компоненты и их состав:
Наименование
|
Состав
|
Концентрация
|
Реагент 1 (Р1)
|
сульфаниловая кислота
соляная кислота
|
29 ммоль/л
0,24 ммоль/л
|
Реагент 2 (Р2)
|
нитрит натрия
|
11,6 ммоль/л
|
Примечание: мультикалибратор поставляется отдельно.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации прямого билирубина в диапазоне от 1 до 342 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 1,54 мкмоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 мкмоль/л = 1мг/дл × 17,1.
4.5. Нормальные величины концентрации прямого билирубина в сыворотке или плазме взрослого человека составляют до 3,4 мкмоль/л [1].
4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации прямого билирубина, приведены в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент 1 содержит соляную кислоту, которая вызывает сильные ожоги. Реагент 2 содержит токсичный компонент нитрит натрия. Следует избегать попадания реагентов на кожу, и в глаза. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки, необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации прямого билирубина с применением набора реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН–UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение поглощение оптической плотности при длине волны 540 (530-580) нм (режим по конечной точке).
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа, после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание прямого билирубина, стабильны8 часов при +(16-25ºС), не более 2-х суток при +(2-8) ОС и не более 28-ми суток при –20 ОС [1]. Хранить в темноте.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Приготовление рабочего реагента: смешать 4 части Реагента 1 и 1 часть Реагента 2. Рабочий реагент стабилен в течение 8 суток при хранении в защищенном от света месте при 2-8 0С
Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.2. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Внести в кювету
|
Анализируемая проба, мкл:
|
Холостая проба по образцу, мкл:
|
Калибровочная проба, мкл:
|
Холостая проба по калибратору, мкл:
|
Дистиллированная вода
|
-
|
--
|
100
|
–
|
Сыворотка или плазма крови
|
100
|
100
|
-
|
-
|
Калибратор
|
-
|
-
|
–
|
100
|
Реагент 1
|
–
|
1000
|
-
|
-
|
Рабочий реагент
|
1000
|
-
|
1000
|
1000
|
8.3. При проведении исследования у новорожденных допускается использование соотношения 20:1 (Реагент 1: проба новорожденного) с последующим умножением полученного результата на два.
8.4. Реакционную смесь перемешать и инкубировать точно 5 минут при комнатной температуре
(18-25 ОС) или при температуре 37 ОС.
8.5. . Измерить оптическую плотность (Ахол) холостой пробы по образцу против дистиллированной воды; оптическую плотность (Аобр) анализируемой пробы против калибровочной пробы при длине волны 540 (520-560) нм.
8.7. Определить концентрацию общего билирубина по формуле:
(Аобр-Ахол) / Акал *Скал = Собр (мкмоль/мл)
где: С– концентрация билирубина в анализируемом образце; Акал – оптическая плотность холостой пробы по калибратору против калибровочной пробы.
8.8. Если полученная концентрация прямого билирубина в образце выше 170 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.9. Установить программу определения концентрации прямого билирубина согласно таблице:
-
Наименование параметра
|
Значение
|
Метод измерения
|
Конечная точка
|
Длина волны, нм
|
540 (530-580)
|
Измерение против
|
Дист. вода
|
Температура реакции, ОС
|
18-25; 37
|
Единица измерения
|
мкмоль/л
|
Число знаков после запятой
|
2
|
Изменение оптической плотности
|
Увеличивается
|
Соотношение реагент1/проба*
|
10:1
|
|
