Ооо «Центр Молекулярной Генетики»
|
Скачать 55.15 Kb.
|
 ООО «Центр Молекулярной Генетики» DIAtomTM DNA Prep 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов DIAtom™ DNA Prep100 предназначен для выделения ДНК из различных природных материалов (жидкостей, мелкоизмельченных твердых материалов, пятен крови и т.д.), а также для быстрой очистки ДНК из клинических проб (цельной крови, плазмы, сыворотки, мочи, соскобов слизистой и т.д.). 1.2. Набор рассчитан на 100 выделений из 100 мкл жидкости или 50 выделений из 200 мкл жидкости или же из большего объема жидкости, при соблюдении соответствующих объемных пропорций. При выделении ДНК из сухих материалов (засохшие пятна крови на одежде, волосы и т.д.) мелкоизмельченная проба должна быть полностью погружена в Лизирующий реагент. 1.3. Набор реагентов DIAtom™ DNA Prep100 может быть использован в научно-исследовательских лабораториях специалистами по молекулярной генетике и ДНК-диагностике. 1.4. Продолжительность выделения ДНК из 4-8 жидких проб не более 30 мин. Выделение ДНК из сухих пятен или мелкоизмельченного твердого материала может длиться до нескольких часов в зависимости от обрабатываемого материала. 2. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ Набор реагентов DIAtom™ DNA Prep100 основан на использовании Лизирующего реагента с гуанидинтиоцианатом, который предназначен для лизиса клеток, солюбилизации клеточного дебриса, а также для денатурации клеточных нуклеаз. В присутствии Лизирующего реагента ДНК активно сорбируется на NucleoS -сорбенте, затем легко отмывается от белков и солей спиртовым раствором ДНК, элюированная из сорбента ЭкстраГеном™ или чистой водой, может быть напрямую использована по назначению. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. ДНК, выделенная из свежего биологического материала (цельная кровь, клеточная культура, ткань и т.д.), является высокомолекулярной - 40-50 тыс.н.п.. 3.2. Набор реагентов обеспечивает высокую чистоту выделенной ДНК - OD260/280нм 1,6-2,0. 3.3. Выход чистой ДНК из цельной крови составляет 3-5мкг из 100 мкл крови. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 4.2. При работе с набором реагентов следует надевать резиновые перчатки, так как в состав готового Лизирующего реагента входит сильный денатурирующий агент гуанидинтиоцианат. 4.3. Для предотвращения контаминации проб рекомендуется работать с пипетками и наконечниками со специальными антиконтаминационными фильтрами. 5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА Lysis reagent (Лизирующий), готов к применению • 1 флакон 60 мл (общий объем 60 мл). Saline buffer ( Солевой) • 10-кратный буфер, 1 флакон, 5 мл. NucleoS™ (Суспензия сорбента), готов к применению • 2 пробирки по 1 мл. ExtraGen (Экстра Ген, суспензия смеси ионообменников) •1 флакон - 10 мл. 6. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 6.1. Термостат для пробирок, поддерживающий температуру 65±2°С. 6.2. Микроцентрифуга, развивающая ускоряющаяся до 10000 g. 6.3. Ротатор. 6.4. Вортекс. 6.5. Пипетки автоматические ( от 10 до 1000 мкл). 6.6. Водоструйный насос. 6.7. Пробирки и наконечники для пипеток. 6.8. Цилиндр мерный на 200 - 500 мл. 6.9. Перчатки одноразовые медицинские. 6.10. Спирт этиловый, 96%. 6.11. Вода бидистиллированная. 7. ПРОТОКОЛ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК 7.1. Приготовление рабочего раствора Солевого буфера. Содержимое флакона с 10-кратным Солевым буфером, 5 мл, перенести в мерный цилиндр, довести бидистиллированной водой до метки 50 мл и 96% этиловым спиртом до метки 150 мл и перемешать. Готовый рабочий раствор Солевого буфера следует хранить в герметично закрытой посуде при температуре 4°С. 7.2. В пробирку объемом 1,5 мл внести 100 мкл исследуемой пробы, добавить 400 мкл Лизирующего реагента и перемешать содержимое пробирки переворачиванием (5-10 раз). Интенсивное встряхивание смеси не рекомендуется. 7.3. Термостатировать пробирку со смесью 5-7 мин. при температуре 65°С 5 мин . Если выделение ДНК проводится из твердого сухого мелкоизмельченного материала, то следует термостатировать 30-40 мин. 7.4. После термостатирования центрифугировать пробирку со смесью 10 сек при 5000 g в том случае, если смесь содержит несолюбилизированный клеточный дебрис или другой нерастворимый осадок. Прозрачный супернатант целиком перенести в чистую пробирку. 7.5. В пробирку с чистой смесью добавить 20 мкл суспензии сорбента NucleoS™ (Перед использованием NucleoS™ следует интенсивно встряхнуть на вортексе). 7.6. Пробирку поместить на ротатор и перемешивать 10 мин (10-20 об/мин) 7.7. Центрифугировать 10 сек при 5000 g. 7.8. Осторожно, не задевая осадка, удалить супернатант с помощью водоструйного насоса. 7.9. К осадку добавить 200 мкл Лизирующего реагента, тщательно перемешать на вортексе до полного гомогенного состояния. Примечание: Если суспендирование затруднено (при большой нагрузке ДНК) из-за сильного слипания сорбента, то его необходимо вначале осторожно суспендировать пипетированием, а затем перемешать на вортексе. 7.10. Добавить в пробирку 0,5 мл рабочего раствора Солевого буфера ( п. 7.1). 7.11. Перемешать содержимое пробирки переворачиванием пробирки 5-10р 7.12. Центрифугировать 10 сек при 5000 g. 7.13. Осторожно удалить супернатант, не задевая осадка, с помощью водоструйного насоса. 7.14. Добавить в пробирку 0,5 мл Солевого буфера, перемешать содержимое пробирки на вортексе, центрифугировать 10 сек при 5000 g и осторожно удалить супернатант с помощью насоса. 7.15. Повторить положение 7. 14. 7.16. Посушить осадок при температуре 65°С в течение 4-5 мин. 7.17. В эту же пробирку внести 50-100 мкл ЭкстраГена™ (100 мкл, если выделение ДНК проводится из 200 мл цельной крови или другой богатой ДНК пробы). 7.18. Суспендировать содержимое пробирки на вортексе 5-10 сек до получения гомогенной суспензии, потом термостатировать 4-5 мин при 65°С. 7.19. Еще раз суспендировать содержимое пробирки на вортексе перед центрифугированием. 7.20. Центрифугировать 1 мин при 10000 g. 7.21 Перенести супернатант с ДНК в чистую пробирку ДНК хранить при температуре -20°C. 8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 8.1. Набор реагентов для выделения ДНК DIAtom™ DNA Prep100 может храниться при комнатной температуре в темноте до шести месяцев. Для более длительного хранения, до одного года, набор следует хранить в холодильнике при 2-8° С. 8.2. Набор нельзя замораживать. При появлении осадка солей в охлажденном Лизируюшем реагенте перед его использованием следует подогреть при 50-60 °С до полного растворения осадка. 8.3. Рабочий раствор Солевого буфера следует хранить в герметично закрытой посуде при 2-8 °С. 8.4. ЭкстраГен™ следует хранить в холодильнике при 2-8°С до шести месяцев. |
Похожие:
 |
Антипролиферативное действие карнозина и его производных на опухолевые... Официальные оппоненты: Гривенников Игорь Анатольевич, доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией молекулярной... |
|
Сергей Львович Киселев, д б. н., проф., зав лаб молекулярной генетики... |
 |
1. Biopolymers & Cell. Биополимеры и клетка Журнал Института молекулярной биологии и генетики Национальной академии наук Украины на английском и русском языках |
|
Рабочая программа дисциплины дисциплина б. 1 «Современные проблемы биологии» Целью изучения дисциплины является формирование представлений об актуальных проблемах, перспективных направлениях развития и достижениях... |
|
Патрушев Л. И. Экспрессия генов Обсуждаются наиболее важные аспекты развития современной молекулярной генетики в исследованиях направленного мутагенеза и белковой... |
|
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «федеральный... «федеральный исследовательский центр институт цитологии и генетики сибирского отделения российской академии наук» (ИЦиг со ран) |
|
Введение гена каталитического компонента теломеразы (htert) в клетки... Работа выполнена в лаборатории молекулярной кариологии и основ клеточной терапии Учреждения Российской академии наук Института молекулярной... |
|
Общество с ограниченной ответственностью «Арктический Научно-Проектный... Геоинформационной Системы ООО "Арктический Научный Центр" и Централизованной базы данных арктического шельфа |
|
Ооо «Учебный центр» Омелечко Аксане Евгеньевне Список руководителей и специалистов, направляемых для прохождения предаттестационной подготовки в ООО «Учебный центр» |
|
Техническое задание 7 4Требования к исполнителю 9 1Описание существующей... Наименование организации: ООО «Центр горизонтального бурения» далее |
|
Национальный стандарт российской федерации гост р исо 9000 2015 Перевод выполнен рабочей группой в составе представителей ОАО «вниис», ООО «Интерсертифика – тюф», зао «Центр Приоритет», Ассоциации... |
|
Общество с ограниченной ответственностью «Единый Расчетный Центр... «Единый Расчетный Центр «Прогресс» (ооо «ерц «Прогресс»), именуемое в дальнейшем «Покупатель», в лице Исполнительного директора Бабарикина... |
|
Общество с ограниченной ответственностью «Единый Расчетный Центр... «Единый Расчетный Центр «Прогресс» (ооо «ерц «Прогресс»), именуемое в дальнейшем «Покупатель», в лице Исполнительного директора Бабарикина... |
|
Инструкция №1 по применению дезинфицирующего средства «Фрисепт-Соло» (ооо «Септа», Россия) Гуп «Московский городской центр дезинфекции» (илц гуп мгцд), фгу рниито им Р. Р. Вредена Росмедтехнологий, ООО «Септа» |
|
2 Товар оплачивается Покупателем в строгом соответствии с условиями... ... |
|
Информационная справка по результатам проверок соблюдения трудового... Ооо «Управление и Клининг», ООО ук «Областной дом недвижимости», ООО «Вираж», ООО «Сигма», ООО «Мелиорация», ООО «Салон Красоты»,... |