ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО НАУЧНЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
«ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ И ГЕНЕТИКИ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК» (ИЦиГ СО РАН)
УДК 576.3(047.031)
№ госрегистрации АААА-А17-117110270085-9
Инв. №
|
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор ИЦиГ СО РАН,
академик РАН
_______________ Н.А. Колчанов
«01» декабря 2017 г.
|
ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПАСПОРТ
Программа фундаментальных научных исследований
государственных академий наук на 2013–2020 годы
58. Молекулярная генетика, механизмы реализации генетической информации, биоинженерия
КОЛЛЕКЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ В ЦЕЛЯХ ПОИСКА НОВЫХ ПЕРСПЕКТИВНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ БИОТЕХНОЛОГИИ
И БИОИНЖЕНЕРИИ. ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ГЕНЕТИКИ И МЕТАБОЛИЗМА
Номер проекта в ИСГЗ ФАНО 0324-2017-0003
Протокол Ученого совета
№ 22 от 18.12.2017
Руководитель
зам. директора ИЦиГ СО РАН, канд. биол. наук
|
____________________ подпись, дата
|
С.Е. Пельтек
|
Новосибирск – 2017СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ
Руководитель проекта
|
|
|
Зам. директора ИЦиГ СО РАН, канд. биол. наук
|
подпись, дата
|
С.Е. Пельтек
|
Исполнители проекта
|
|
|
Ст. науч. сотр., канд. биол. наук
|
подпись, дата
|
А.В. Брянская
|
Ст. науч. сотр., канд. биол. наук
|
подпись, дата
|
Т.Н. Горячковская
|
Ст. лаборант
|
подпись, дата
|
Е.А. Демидов
|
Инженер
|
подпись, дата
|
И.А. Мещерякова
|
Мл. науч. сотр., канд. биол. наук
|
подпись, дата
|
А.С. Розанов
|
Ст. лаборант
|
подпись, дата
|
К.В. Старостин
|
Ст. лаборант
|
подпись, дата
|
Ю. Е. Уварова
|
Нормоконтролер
|
|
Т.Ф. Чалкова
|
подпись, дата
1.1 Стандартная операционная процедура по пересеву культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: А.В. Брянская, к.б.н., с.н.с.
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур по пересеву культур микроорганизмов
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Пересев культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» осуществляется следующим образом.
Пересев культур микроорганизмов состоит из ряда последовательных процедур и учитывает требования следующих Стандартных операционных процедур:
- «Стандартная операционная процедура по выделению культур»
- «Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур»
- «Стандартная операционная процедура по подготовке к криоконсервации культур»
- «Стандартная операционная процедура по контролю жизнеспособности культур».
1 Пересев культур, находящихся на хранении при температуре 4–8 оС.
1.1 С поверхности скошенной агаризованной среды, находящейся на хранении при температуре 4–8 оС производится пересев на соответствующую питательную среду в чашки Петри.
1.2 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
1.3 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
1.4 Выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
1.5 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
1.6 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
1.7 В некоторых случаях, если рост на агаризованной среде не наблюдается, производят посев с поверхности скошенной агаризованной среды, находившейся на хранении, в соответствующую жидкую среду.
1.8 После посева пробирку ставят в качалку при 200–250 об/мин и необходимой температуре культивирования на 1–7 суток.
1.9 При наличии роста в жидкой среде, которое регистрируется по помутнению среды, иногда сопровождаемому пигментацией, появлению пленки, осадка, выделению газов, производят пересев на поверхность агаризованной среды.
1.10 Для этого из жидкой среды отбирают аликвоту 50–100 мкл и наносят на поверхность агаризованной среды в чашке Петри. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
1.11 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
1.12 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
1.13 После появления колоний на поверхности агаризованной среды выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
1.14 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
1.15 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
2 Пересев культур, находящихся на хранении при температуре –70 оС.
2.1 Пробирки, находившиеся на хранении, размораживают максимально быстро.
2.2 Из пробирки с растаявшей суспензией клеток в растворе криопротектора, отбирают аликвоту 50–100 мкл и производят посев на соответствующую питательную среду в чашки Петри.
2.3 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
2.4 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
2.5 Выросшие изолированные колонии при необходимости снова переносят в раствор криопротектора и ставят на хранение при температуре –70 оС либо используют для работы.
2.6 В некоторых случаях, если рост на агаризованной среде не наблюдается, производят посев с поверхности скошенной агаризованной среды, находившейся на хранении в соответствующую жидкую среду.
2.7 После посева пробирку ставят в качалку при 200–250 об/мин и необходимой температуре культивирования на 1–7 суток.
2.8 При наличии роста в жидкой среде, которое регистрируется по помутнению среды, иногда сопровождаемому пигментацией, появлению пленки, осадка, выделению газов, производят пересев на поверхность агаризованной среды.
2.9 Для этого отбирают аликвоту 50–100 мкл из жидкой среды и наносят на поверхность агаризованной среды в чашке Петри. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
2.10 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
2.11 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
2.12 После появления колоний на поверхности агаризованной среды выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
2.13 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
2.14 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
Пересев культур осуществляется с использованием следующего оборудования:
– Ламинарные шкафы (Clean Air)
– автоклавы (Sanyo)
– термостаты (Binder)
– термостатируемые качалки (Biosan)
– низкотемпературные холодильники (New Brunswick Scientific)
– микроскопическая техника ЦКП микроскопии (микроскопы световые и люминесцентные производства фирмы Zeiss)
Комплекты общелабораторного оборудования:
– наборы микропипеток
– источники питания
– холодильники
– центрифуги
– вытяжные шкафы
– анаэростат АЭ-01 и др.
1.2 Стандартная операционная процедура по подготовке к криоконсервации культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: А.В. Брянская, к.б.н., с.н.с.
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур
по криоконсервации культур микроорганизмов
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Подготовка к криоконсервации культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» осуществляется следующим образом.
1 Предварительная проверка культур микроорганизмов перед подготовкой к криоконсервации осуществляют в соответствии с требованиями следующих Стандартных операционных процедур:
– «Стандартная операционная процедура по идентификации культур молекулярно-биологическими методами»
– «Стандартная операционная процедура по идентификации культур масс-спектрометрическим методом»
– «Стандартная операционная процедура по контролю жизнеспособности культур»
– «Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур»
2 Подбор условий культивирования, обеспечивающих оптимальный рост и/или максимальное спорообразование культур микроорганизмов (состав питательной среды, температура, время и другие условия) производят, исходя из сведений об особенностях культивирования штаммов в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии».
3 Выращивание культур микроорганизмов осуществляют следующим образом.
3.1 Культуры бактерий выращивают на соответствующих агаризованных или жидких средах в оптимальных условиях до хорошо заметного роста или стационарной фазы.
3.2 Культуры архей выращивают на соответствующих агаризованных или жидких средах в оптимальных условиях до хорошо заметного роста или стационарной фазы.
4 Стерильные полипропиленовые пробирки, пригодные для криоконсервации, объемом 1,5–2,0 мл (не менее 5 для каждой культуры) маркируют с указанием номера культуры и даты криоконсервации (месяц, год).
5 Подготовка криопротекторов
5.1 В качестве криопротекторов для культур, выращенных на плотной среде, используют одну из следующих композиций: 10–15% глицерин, 12% сахароза, сахарозо-желатиновый агар (СЖА) (10% сахарозы, 1,5% желатина, 0,1% агар-агара в дистиллированной воде), 10% диметилсульфоксид (ДМСО).
5.2 В качестве криопротекторов для культур, выращенных в жидкой среде, используют те же композиции, но в концентрации вдвое большей.
5.3 Криопротекторные композиции стерилизуют при 1 атм, 20 мин.
6 Заполнение пробирок культурами микроорганизмов.
6.1 Для криоконсервации готовят не менее 5 образцов каждой культуры.
6.2 Все операции проводят с соблюдением стерильности.
6.3 Микробный материал с поверхности агаризованной среды переносят в раствор выбранного криопротектора. При необходимости используют мини центрифугу‐вортекс. Концентрация клеток в суспензии – не менее 108 кл/мл.
6.4 Клетки культур с жидкой среды осаждают центрифугированием (10000 g, 3 мин). Осадок клеток разводят криопротектором. Концентрация клеток в суспензии – не менее 108 кл/мл.
6.5 Суспензию микроорганизмов в криопротекторе разливают в пробирки для криоконсервации по 1,0 мл, закрывают крышками и немедленно помещают в низкотемпературный холодильник при –70 оС.
Процесс криоконсервации культур осуществляется с использованием следующего оборудования:
– ламинарные шкафы (Clean Air)
– автоклавы (Sanyo)
– термостаты (Binder)
– термостатируемые качалки (Biosan)
– низкотемпературные холодильники (New Brunswick Scientific)
– спектрофотометр ПЭ-5400 (Экрос)
– мини центрифуга‐вортекс Микроспин FV-2400 (Biosan)
Комплектов общелабораторного оборудования:
– наборы микропипеток
– источники питания
– холодильники
– центрифуги
– вытяжные шкафы и др.
1.3 Стандартная операционная процедура по лиофилизации культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: А.В. Брянская, к.б.н., с.н.с.
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур по лиофилизации культур микроорганизмов
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Лиофилизация культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» осуществляется следующим образом.
Лиофилизация культур микроорганизмов состоит из ряда последовательных процедур, включающих подготовку материалов, культур и собственно процесса лиофилизации и учитывает требования следующих Стандартных операционных процедур:
– «Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур»
– «Стандартная операционная процедура по подготовке к криоконсервации культур»
– «Стандартная операционная процедура по контролю жизнеспособности культур»
– «Стандартная операционная процедура по пересеву культур».
1 Подготовка ампул/пробирок для хранения лиофилизованных культур.
Химически чистые стеклянные пробирки маркируют (номер культуры и дата лиофилизации) и стерилизуют при 1 атм, 40 мин.
2 Подготовка защитной среды.
2.1 Используют сахарозо-желатиновый агар (желатин – 1г, сахароза – 10г, вода дистилированная – 100мл) или обезжиренное молоко.
2.2.1 Сахарозо-желатиновый агар разливают в стеклянные пробирки (12 мл) по 5 мл; стерилизуют при 1 атм, 20 мин.
2.2.2 Обезжиренное молоко в концентрации 10% разливают в стеклянные пробирки; 3 раза стерилизуют текучим паром и проверяют стерильность путем инкубации 3 суток при 37 оС.
2.3 Защитные среды хранят при 5 оС не более 1 месяца.
3 Подготовку культур микроорганизмов перед лиофилизацией осуществляют в соответствии со «Стандартной операционной процедурой по подготовке к криоконсервации культур» с использованием вместо криопротектора адекватной защитной среды для лиофилизации. В качестве адекватной защитной среды для лиофилизации, обеспечивающей гарантированное сохранение жизнеспособности культуры данного штамма, используют среду культивирования, обеспечивающую оптимальный рост штамма.
4 Заполнение ампул/пробирок.
4.1 В подготовленные пробирки заливают около 1,0 мл суспензии клеток микроорганизмов в защитной среде. Плотность микроорганизмов должна быть высокой: 109–1010 клеток в 1 мл. Процедуру проводят в стерильных аэробных условиях.
4.2 Один образец суспензии используют для определения жизнеспособности культуры перед лиофилизацией, для чего его помещают на поверхность агаризованной среды, обеспечивающей оптимальный рост культуры.
5 Лиофилизация микроорганизмов.
5.1 Перед началом лиофилизации производится заморозка образца. Это может быть выполнено в отдельном от лиофильной сушки холодильнике при температуре от –20 до –70 оС или на полке лиофильной сушки в режиме «предзаморозка».
5.2 Замороженные образцы помещают в предварительно охлажденную камеру лиофильной сушки и включают вакуум.
5.3 Режим работы с культурами микроорганизмов: эвтектическая температура –40 оС и ниже, температура предзамораживания –50 оС и ниже, вакуум – 0,404 мБар и ниже.
5.4 По окончании высушивания вакуумный насос выключают, систему заполняют воздухом, ампулы/пробирки герметично закрывают крышками и извлекают из камеры.
6 Контроль жизнеспособности культур.
6.1 Через 24 часа после лиофилизации в пробирку с помощью пипетки вносят 0,5–1,0 мл стерильной водопроводной воды, физраствора или иной адекватной для регидратации данной культуры жидкости.
6.2 Через 30 мин (после полной регидратации) суспензию слегка пипетируют пипеткой и помещают на поверхность агаризованной среды, обеспечивающей оптимальное развитие культуры. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
6.3 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
6.4 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
6.5 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
7 Хранение.
7.1 Ампулы/пробирки с образцами сохраняют в темноте при 4–6 оС.
Лиофилизация культур осуществляется с использованием следующего оборудования:
– лиофильная сушка FreeZone®Triad™Freeze Dry System 7400040 (Labconco)
– ламинарные шкафы (Clean Air)
– автоклавы (Sanyo)
– термостаты (Binder)
– термостатируемые качалки (Biosan)
– низкотемпературные холодильники (New Brunswick Scientific)
– микроскопическая техника ЦКП микроскопии (микроскопы световые и люминесцентные производства фирмы Zeiss)
Комплекты общелабораторного оборудования:
– наборы микропипеток
– источники питания
– холодильники
– центрифуги
– вытяжные шкафы и др.
2.1 Стандартная операционная процедура по контролю жизнеспособности культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: А.В. Брянская, к.б.н., с.н.с.
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур по контролю жизнеспособности культур микроорганизмов
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Контроль жизнеспособности культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» осуществляется следующим образом.
Контроль жизнеспособности культур состоит из ряда последовательных процедур и учитывает требования следующих Стандартных операционных процедур:
– «Стандартная операционная процедура по выделению культур»
– «Стандартная операционная процедура по пересеву культур»
– «Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур»
– «Стандартная операционная процедура по подготовке к криоконсервации культур»
– «Стандартная операционная процедура по лиофилизации культур».
1 Контроль жизнеспособности культур после хранения при 4–8 оС
1.1 С поверхности скошенной агаризованной среды, находящейся на хранении при температуре 4–8 оС производится пересев на соответствующую питательную среду в чашки Петри.
1.2 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
1.3 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
1.4 Выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
1.5 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
1.6 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
1.7 В некоторых случаях, если рост на агаризованной среде не наблюдается, производят посев с поверхности скошенной агаризованной среды, находившейся на хранении, в соответствующую жидкую среду.
1.8 После посева пробирку ставят в качалку при 200–250 об/мин и необходимой температуре культивирования на 1–7 суток.
1.9 При наличии роста в жидкой среде, которое регистрируется по помутнению среды, иногда сопровождаемому пигментацией, появлению пленки, осадка, выделению газов, производят пересев на поверхность агаризованной среды.
1.10 Для этого из жидкой среды отбирают аликвоту 50–100 мкл и наносят на поверхность агаризованной среды в чашке Петри. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
1.11 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
1.12 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
1.13 После появления колоний на поверхности агаризованной среды выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
1.14 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
1.15 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
2 Контроль жизнеспособности культур, находящихся на хранении при температуре –70 оС.
2.1 Пробирки, находившиеся на хранении, размораживают максимально быстро.
2.2 Из пробирки с растаявшей суспензией клеток в растворе криопротектора, отбирают аликвоту 50–100 мкл и производят посев на соответствующую питательную среду в чашки Петри.
2.3 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
2.4 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
2.5 Выросшие изолированные колонии при необходимости снова переносят в раствор криопротектора и ставят на хранение при температуре –70 оС либо используют для работы.
2.6 В некоторых случаях, если рост на агаризованной среде не наблюдается, производят посев с поверхности скошенной агаризованной среды, находившейся на хранении в соответствующую жидкую среду.
2.7 После посева пробирку ставят в качалку при 200–250 об/мин и необходимой температуре культивирования на 1–7 суток.
2.8 При наличии роста в жидкой среде, которое регистрируется по помутнению среды, иногда сопровождаемому пигментацией, появлению пленки, осадка, выделению газов, производят пересев на поверхность агаризованной среды.
2.9 Для этого отбирают аликвоту 50–100 мкл из жидкой среды и наносят на поверхность агаризованной среды в чашке Петри. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
2.10 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
2.11 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
2.12 После появления колоний на поверхности агаризованной среды выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
2.13 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
2.14 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
3 Контроль жизнеспособности культур после лиофилизации
3.1 Через 24 часа после лиофилизации в пробирку с помощью пипетки вносят 0,2–0,3 мл стерильной водопроводной воды, физраствора или иной адекватной для регидратации данной культуры жидкости.
3.2 Через 30 мин (после полной регидратации) суспензию слегка пипетируют пипеткой и помещают на поверхность агаризованной среды, обеспечивающей оптимальное развитие культуры. Высев производят сплошным газоном с использованием шпателя Дригальского.
3.3 После посева чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
3.4 Чашки выдерживают в термостате в течение 1–7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
3.5 После появления колоний на поверхности агаризованной среды выросшие изолированные колонии отсевают петлей на поверхность скошенной плотной среды.
3.6 Пробирки с выросшими по штриху колониями ставят на хранение при температуре 4–8 оС.
3.7 Одновременно проводят контроль чистоты культуры согласно соответствующей СОП.
Контроль жизнеспособности культур осуществляется с использованием следующего оборудования:
– ламинарные шкафы (Clean Air)
– автоклавы (Sanyo)
– термостаты (Binder)
– термостатируемые качалки (Biosan)
– низкотемпературные холодильники (New Brunswick Scientific)
– лиофильная сушка FreeZone®Triad™Freeze Dry System 7400040 (Labconco)
– микроскопическая техника ЦКП микроскопии (микроскопы световые и люминесцентные производства фирмы Zeiss)
Комплекты общелабораторного оборудования:
– наборы микропипеток
– источники питания
– холодильники
– центрифуги
– вытяжные шкафы
– анаэростат АЭ-01 и др.
2.2 Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: А.В. Брянская, к.б.н., с.н.с.
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур по контролю чистоты культур микроорганизмов
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Контроль чистоты культур в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» осуществляется следующим образом.
1 Определение чистоты выделенной культуры осуществляется несколькими способами: визуальным, микроскопическим контролем и высевом на ряд питательных сред.
1.1 При визуальном контроле просматривается рост микроорганизмов по штриху на поверхности скошенной агаризованной среды. Такой контроль осуществляется для культур, способных расти на поверхности плотных сред.
1.2 Чистоту культур проверяют высевом на питательные среды, благоприятные для их роста, в том числе на мясопептонный агар (сусло, мясопептонный бульон, картофельный агар и др.). Однородность выросших колоний свидетельствует о чистоте культуры. Если рост по штриху неоднороден, культура загрязнена.
1.3 Для контроля чистоты культур под микроскопом готовится препарат фиксированных окрашенных клеток и просматривается с иммерсионной системой. Такой контроль возможен только для культур, имеющих морфологически однородные клетки.
1.4 Готовится препарат живых клеток и просматривается с использованием фазово–контрастного устройства. Такой контроль возможен только для культур, имеющих морфологически однородные клетки.
Контроль чистоты культур осуществляется с использованием следующего оборудования:
– ламинарные шкафы (Clean Air)
– автоклавы (Sanyo)
– термостаты (Binder)
– термостатируемые качалки (Biosan)
– низкотемпературные холодильники (New Brunswick Scientific)
– микроскопическая техника ЦКП микроскопии (микроскопы световые и люминесцентные производства фирмы Zeiss)
Комплекты общелабораторного оборудования:
– наборы микропипеток
– источники питания
– холодильники
– центрифуги
– вытяжные шкафы
– анаэростат АЭ-01 и др.
2.3 Стандартная операционная процедура по идентификации культур масс-спектрометрическим методом в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии»
Составлено: К.В. Старостин, ст.лаборант
Содержание и назначение: определяет протокол ряда последовательных процедур по идентификации культур масс-спектрометрическим методом
Местонахождение: ИЦиГ СО РАН
Пересмотр через: 1 год
Идентификация культур масс-спектрометрическим методом в «Коллекции микроорганизмов биотехнологического назначения в целях поиска новых перспективных микроорганизмов для целей биотехнологии и биоинженерии» состоит из ряда последовательных процедур, включающих в себя отбор проб, пробоподготовку, получение масс-спектров, идентификацию с помощью Biotyper 3 и учитывает требования следующих Стандартных операционных процедур:
– «Стандартная операционная процедура по пересеву культур»
– «Стандартная операционная процедура по контролю чистоты культур»
– «Стандартная операционная процедура по выделению культур»
Отбор проб
С помощью микробиологической петли 5–10 мг микробной культуры переносится в пробирку с 300 мкл деионизированной воды и ресуспензируется с помощью шейкера Microspin FV-2400 (фирма BIOSAN, Россия). В начале и в конце работы, а так же после отбора каждой пробы микробиологическая петля обжигается в пламени горелки. Вместе с отбором проб микробных культур для идентификации проводится отбор пробы культуры
|
