Сибирского отделения российской академии наук


НазваниеСибирского отделения российской академии наук
страница1/13
ТипДокументы
rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ

ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ БИОЛОГИИ И ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК

(ИХБФМ СО РАН)


Технологический паспорт коллекции

«Коллекция экстремофильных микроорганизмов и типовых культур»


Новосибирск - 2017

Общая информация:


  • Название коллекции - «Коллекция экстремофильных микроорганизмов и типовых культур»




  • Держатель коллекции - Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН)


Цели и задачи – Коллекция экстремофильных микроорганизмов и типовых культур создана, поддерживается и пополняется для выполнения следующих задач:

  1. Изучение биоразнообразия различных экосистем.

  2. Фаготипирование бактериальных культур.

  3. Изучение антибиотикорезистентности, биохимических и генетических характеристик микроорганизмов. Анализ антимикробной активности разрабатываемых препаратов.

  4. Проведение идентификации культур микроорганизмов.

  5. Регистрация и хранение штаммов-продуцентов.

  6. Оказание консультативной и научно-методической помощи научно-исследовательским, образовательным и иным организациям.


Объем коллекции – более 3000 штаммов микроорганизмов, более 200 штаммов бактериофагов. Штаммы микроорганизмов охарактеризованы по морфологическим свойствам колоний и клеток, биохимическим свойствам, антибиотикорезистентности, проведена таксономическая идентификация по гену 16S рРНК, сведения хранятся в базах данных. Штаммы бактериофагов охарактеризованы по литическим свойствам, спектру бактерий-хозяев, для части бактериофагов определены геномные последовательности. Информацию об актуальном составе коллекции можно получить по запросу в виде вывода из электронной базы данных.

АДРЕС:

630090, Россия, г. Новосибирск,

Пр-т Академика Лаврентьева, 8

http://www.niboch.nsc.ru

РУКОВОДИТЕЛЬ:

Тикунова Нина Викторовна, д.б.н.

КОНТАКТНОЕ ЛИЦО:

Тикунова Нина Викторовна,

Морозова Вера Витальевна

тел. (383) 363-51-31

e-mail: tikunova@niboch.nsc.ru,

morozova@niboch.nsc.ru


  • Перечень ключевых СОП:

  • СОП «Получение чистой культуры микроорганизма из образца»;

  • СОП «Идентификация таксономической принадлежности бактериального изолята по нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК»;

  • СОП «Характеризация антибиотикоустойчивости бактериального изолята методом диско-диффузионного анализа»;

  • СОП «Идентификация таксономической принадлежности изолята грибов по нуклеотидным последовательностям межгенных спейсеров ITS и NS»;

  • СОП «Идентификация бактериального штамма по биохимическим свойствам с использованием анализатора GenIII OmniLog»

  • СОП «Проверка жизнеспособности депонированной культуры микроорганизма из Коллекции ЭМТК».



Полная версия СОПов : http://www.niboch.nsc.ru/doku.php/emtc_collection



  • Инфраструктура:

  • Молекулярно-биологическая лаборатория

  • Боксовые помещения, боксы микробиологической безопасности II класса.

  • Комната для хранения.



  • Перечень СОПов:

СОП № ЛММБ 2-3-2017-09

Получение чистой культуры микроорганизма из образца

Составили: к.б.н., с.н.с. В.В. Морозова, вед. инженер А.В.Бардашева

Местонахождение: ИХБФМ СО РАН

Пересмотр через 1 год


  1. Введение, цель

Настоящая методика устанавливает порядок получения чистой культуры микроорганизма для последующей идентификации и депонирования в Коллекцию ЭМТК.

  1. Назначение

Получение чистых культур микроорганизмов из различных природных образцов, включая образцы почвы, образцы от животных, растений, людей и пр., является основным этапом пополнения Коллекции ЭМТК.

  1. Термины и определения

СОП – стандартная операционная процедура;

Асептика – комплекс мер направленных на предупреждение попадания в рабочую зону сторонних микроорганизмов;

Селективные среды – питательные среды для выделения определенных микроорганизмов за счет создания благоприятных для них условий роста и неблагоприятных условий для сопутствующих микроорганизмов других видов;

РПА – рыбо-пептонный агар;

СМА – сердечно-мозговой агар;

СМА – сердечно-мозговой агар.

  1. Пересмотр: Данная СОП вводится впервые.




  1. Материалы и оборудование

    1. . Материалы и реактивы

Наименование основных реактивов и материалов

НТД, производитель, страна

РПА

ТУ 9385-012-14237183-07

СМА

BioMerieux, Франция

Бактоагар

BD, США

Дрожжевой экстракт

BD, США

Триптон

BD, США

Глицерин

ГОСТ 6259-75

Среда Левина

Oxoid, Великобритания

Коринебакагар

ТУ 9398-019-78095326-2006

Среда Китта-Тароцци

Биотехновация, Россия

MRS агар

Himedia, Индия

Сальмонелла, шигелла агар

Oxoid, Великобритания

Агар Мак-Конки без кристаллического фиолетового

BioMerieux, Франция

Солевой агар с маннитом

BioMerieux, Франция

Агар CLED

BioMerieux, Франция

Сабуро агар

BioMerieux, Франция

Дезоксихолатный цитратный агар

Oxoid, Великобритания

Агар Эндо

ТУ 9398-027-78095326

Пробирки типа Eppendorf, 1.5 мл

Thermo, Россия

Наконечники для автоматических дозаторов до 200 мкл

«Eppendorf», США

Спирт этиловый, ректифицированный

ЛРС 000279/10

Перекись водорода, медицинская

ГОСТ 177-88

Вода дистиллированная рН от 5,0 до 7,0.

ГОСТ 6709-72

Натрий хлористый, хч

ГОСТ 4233-77

Чашки Петри, пластиковые диаметр 90 мм

Greiner Bio-One, Австрия

Чашки Петри, пластиковые диаметр 90 мм, трехсекционные, четырехсекционные

Greiner Bio-One, Австрия

Предметные стекла

Isolab, Германия

Пакеты для стерилизации

Citotest, Китай

Покровные стекла

Стеклоприбор, Россия

Набор красителей по Грамму

БиоВитрум, Россия

Бактериологическая петля пластиковая одноразовая

Citotest, Китай

Газогенерирующие пакеты, 3,5 л

Oxoid, Великобритания

Флаконы градуированные c завинчивающейся крышкой, 500 мл

Isolab, Германия

Спиртовка лабораторная

ГОСТ 23932-90Е

Пробирки с закручивающимися крынками, 2,0 мл DNase-free, RNase-free

SSIBIO, США

Колбы мерные вместимостью 250 мл

ГОСТ 1770-74

Комплект цилиндров вместимостью 50 мл, 500 мл и 1 л

ГОСТ 1770-74

Петля микробиологическая с ушком, d 1,5 мм, нержавеющая сталь

Bochem, Германия



    1. Оборудование

Оборудование

НТД, производитель, страна

Баня водяная лабораторная

BioSan, Латвия

Бокс биологической (микробиологической) безопасности II класс

Lamsystems, Россия

Микроскоп Imager A2

Carl Zeiss, Швейцария

Холодильник

Indesit, Италия

Автоматическая пипетка вместимостью 20÷200 мкл

«Ленпипет», Россия

Весы электронные аналитические

Ohaus, США

Термостат суховоздушный лабораторный ТСвЛ-80

ТУ-9452-006-07505566-2006

Анаэростат, 2,5 л

Oxoid, Великобритания

Автоклав ВК-75

ТЗМОИ, Россия

Вортекс

BioSan, Латвия



    1. Комплект спецодежды

Одежда

НТД, производитель, страна

Колпак медицинский

ГОСТ 2313478

Перчатки хирургические резиновые

ГОСТ 3-88

Маска медицинская

ГОСТ EN 13795-1-2011

Халат медицинский

ГОСТ 24760-81



  1. Помещения

  2. Проведение работ осуществляется в боксовых помещениях, в которых находятся боксы биологической (микробиологической) безопасности II класса.

  3. Процедура

    1. Подготовительный этап

7.1.1. Подготовка персонала к проведению работ

– надеть медицинский халат и перчатки

7.1.2. Приготовление дезинфицирующего раствора

– приготовить 3% раствор перекиси водорода, в стеклянный цилиндр налить (100±1) мл 30% перекиси водорода и довести объем до 1000 мл водопроводной водой, данный раствор может быть использован в течение 48 ч;

7.1.3. Подготовка боксового помещения к работе

– обработать 3% раствором перекиси водорода поверхности помещения и оборудования до начала работ;

– обработать ламинарный бокс и помещение ультрафиолетовыми лучами до начала работ в течение 15 мин.

7.1.4. Приготовление 70% раствора этилового спирта

– налить в стеклянный цилиндр (70±1) мл 96% этилового спирта и довести объем до 100 мл дистиллированной водой;

7.1.5. Приготовление LB-среды для хранения культур

– приготовить 50% (об./об.) раствор глицерина в дистиллированной воде;

– автоклавировать при 121°С в течение 15 мин;

– взвесить (3,0±0,1) г триптона, внести в мерный циллиндр;

– взвесить(1,5±0,1) г дрожжевого экстракта, внести в мерный цилиндр с триптоном. Добавить дистиллированной воды до 300 мл;

– разлить по флаконам градуированным;

– автоклавировать при 121°С в течение 15 мин;

– смешать в асептических условиях равные объемы среды LB и 50% раствора глицерина;

– разлить в стерильные пробирки объемом 2 мл с завинчивающейся крышкой по 200 мкл. Инкубировать при (36±1)°С в течение 18 – 24 ч для выявления случайной контаминации.

7.1.6. Приготовление физиологического раствора

– взвесить (0,90,1) г хлорида натрия, внести в мерную колбу вместимостью 100 мл и добавить дистиллированной воды до метки;

– перемешать до полного растворения соли;

– разлить по флаконам градуированным;

– автоклавировать при 121°С в течение 15 мин.

7.1.7. Подготовка чашек Петри с питательной средой

– приготовить питательную среду согласно инструкции производителя;

– разлить питательную среду после автоклавирования в стерильные чашки Петри толщиной (4,00,5) мм и оставить для застывания при комнатной температуре.
7.2. Основной этап

7.2.1. Первичная микроскопия

7.2.1.1 Микроскопия нативных препаратов

– обжечь предметное стекло в пламени спиртовки;

– нанести небольшое количество стерильного физиологического раствора;

– внести прокаленной бактериологической петлей небольшое количество образца. Петлю обеззараживают прожиганием. Сверху препарат накрыть покровным стеклом;

– микроскопировать, производя первичную идентификацию по морфологическим свойствам;

– погрузить препарат в 3% раствор перекиси водорода после окончания микроскопирования. Экспозиция не менее 6 ч.

7.2.1.2. Микроскопия мазков окрашенных по Грамму

– обжечь предметное стекло в пламени спиртовки;

– нанести небольшое количество стерильного физиологического раствора;

– внести прокаленной бактериологической петлей небольшое количество образца. Петлю обеззараживают прожиганием;

– оставить предметное стекло на воздухе до полного высушивания;

– провести фиксацию микропрепарата: предметное стекло трижды накладывают на пламя спиртовки в верхней части на 2 секунды с интервалом 4 секунды (суммарно в пламени 6 секунд). Это позволяет убить микроорганизмы, прикрепить их к стеклу и повысить восприимчивость к красителям;

– поместить на мазок полоску фильтровальной бумаги и нанести на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдержать 2-3 минуты. Слить краску, удалить фильтровальную бумагу и сполоснуть в проточной воде (до 30 сек);

– залить мазок на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата;

– слить раствор, мазок промыть дистилированной водой;

– дифференцировать 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают;

– промыть тщательно стекло в дистиллированной воде 1-2 мин;

– окрасить препарат дополнительно раствором сафранина (реагент 3) (несколько капель) в течение 2-3 минут для выявления грамотрицательной группы бактерий;

– промыть в проточной воде и высушить фильтровальной бумагой. Грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные - розово-красный, красный или коричневый;

– микроскопировать, производя первичную идентификацию по морфологическим свойствам;

– погрузить препарат в 3% раствор перекиси водорода после окончания микроскопирования. Экспозиция не менее 6 ч.

7.2.2. Первичный посев на селективные среды

– обработать рабочую поверхность ламинарного бокса и руки 70% раствором спирта;

– при неизвестных условиях роста микроорганизмов посев проводить параллельно на трех- или четырехсекционные чашки Петри с различными питательными средами и инкубировать их после посева при различных температурных условиях и различном газовом составе окружающей атмосферы;

– прокалить бактериологическую петлю в пламени спиртовки, остудить, забрать материал и густо засеять верхнее поле чашки Петри с соответствующей питательной средой, для выделения чистой культуры (Таблица 1);
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13

Похожие:

Сибирского отделения российской академии наук iconФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «федеральный...
«федеральный исследовательский центр институт цитологии и генетики сибирского отделения российской академии наук» (ИЦиг со ран)

Сибирского отделения российской академии наук iconКлеточные и гуморальные механизмы опухолеспецифической иммунотерапии...
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук iconСбродова Дарья Викторовна
Институт систем энергетики им. Л. А. Мелентьева Сибирского отделения Российской академии наук (исэм со ран)

Сибирского отделения российской академии наук iconСибирского отделения российской академии наук
«Коллекция биоматериалов (днк, рнк и плазма) пациентов, страдающих мультифакторными социально-значимыми заболеваниями»

Сибирского отделения российской академии наук iconДокументация об аукционе в электронной форме
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского отделения Российской академии...

Сибирского отделения российской академии наук iconДокументация об аукционе в электронной форме
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского отделения Российской академии...

Сибирского отделения российской академии наук iconИнститут биофизики сибирского отделения российской академии наук (ибф со ран)
Аннотированный перечень важнейших результатов исследований по «базовым проектам», выполненных в 2014 Г

Сибирского отделения российской академии наук iconО проведении запроса котировок №12 от 28. 02. 2011г
Полное наименование: Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт клинической иммунологии Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук iconДокументация об аукционе разработана
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской...

Сибирского отделения российской академии наук iconКти нп со ран: отчетные материалы за 2012 г
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки конструкторско-технологический институт научного приборостроения Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук iconДокументация об аукционе разработана
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской...

Сибирского отделения российской академии наук iconО проведении запроса котировок в электронной форме № зк-4/2018
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт горного дела им. Н. А. Чинакала Сибирского отделения Российской академии...

Сибирского отделения российской академии наук iconТехническое задание Описание объекта закупки
Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук icon2 3 извещение о проведении аукциона в электронной форме
Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук iconИзвещение о проведении аукциона в электронной форме
Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского...

Сибирского отделения российской академии наук iconИзвещение о проведении аукциона в электронной форме
Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского...


Руководство, инструкция по применению




При копировании материала укажите ссылку © 2018
контакты
rykovodstvo.ru
Поиск