Руководство по использованию реагентных полосок для анализа мочи DIRUI Н11-МА
фирмы DIRUI Industrial Со., Ltd.
Общие положения
Это руководство информирует о методах, принципах реакций и вопросах, требующих особого внимания при использовании реагентных полосок DIRUI Н11-МА.
Реагентные полоски DIRUI Н11-МА выпускаются для качественного и полуколичественного анализа мочи и являются реагентом для диагностики in vitro. Эти полоски предназначены только для профессионального использования.
Реагентные полоски DIRUI Н11-МА используются для первичного тестирования заболеваний или поражения почек, т.к. тест на микроальбуминурию позволяет дифференцировать болезни, вызванные воспалением почечных канальцев или почечных клубочков. Тест важен для проверки успешности трансплантации почки, для диагностики диабетической нефропатии, инфекционных заболеваний и аномалий печени. Его также можно использовать для прогноза состояний эклампсии и преэклампсии при патологиях беременности.
Перед использованием полосок сравните этикетку на картонной упаковке с этикеткой на дне флакона. На них должны быть указаны параметры специфичных тестов.
Результаты на полосках можно считывать как визуально, так и с помощью прибора.
Следует внимательно прочитать руководство пользователя перед использованием реагентных полосок.
Сбор и подготовка образца
Соберите свежую мочу в чистую и сухую посуду. Мочу не центрифугировать. Перед проведением теста образец тщательно перемешайте. Тестирование мочи следует провести в течение часа после сбора. Все образцы необходимо отбирать и хранить в санитарных условиях.
Примечание: Не используйте воду в качестве отрицательного контроля. Не добавляйте консервантов, они не предотвратят распада кетонов, билирубина или уробилиногена. При длительном хранении результаты теста на глюкозу, рН, нитриты и кровь могут измениться в результате вторичной бактериальной контаминации образца.
Методика визуального считывания результата
Погрузите реагентную область полоски в образец мочи на 2-3 секунды.
Проведите ребром полоски по краю сосуда, чтобы удалить избыток мочи.
Держа полоску горизонтально, сравните результат теста на полоске с цветной диаграммой на этикетке пенала. Запишите результат. Для полуколичественного определения результат регистрируют согласно времени, указанному на цветной диаграмме. Для качественного результата полоску следует анализировать в интервале от 1 до 2 мин. после погружения. Если результат будет положительным, следует повторить исследование мочи для получения полуколичественного результата, и сравнить результат теста с цветной диаграммой в указанное на диаграмме время. Значения рН и белка можно регистрировать в любой момент в течение 60 секунд после погружения. Изменение цвета после 2 минут выдержки не имеет диагностического значения.
Методика инструментального считывания результата
Следуйте указаниям, данным в соответствующем описании методики работы анализатора мочи.
Хранение
Полоски должны храниться в оригинальной упаковке. Никогда не используйте полоски с истекшим сроком годности. Каждая полоска употребляется однократно. Не выбрасывайте влагопоглотитель из пенала. Не вынимайте полоски из пенала, если они не используются сразу. После извлечения полосок для анализа следует немедленно и плотно закрыть пенал. Полоски хранят в сухом месте при температуре от +2ºС до +30ºС. Не храните полоски в холодильнике и не подвергайте их действию прямого солнечного света. Не прикасайтесь к реагентной области полоски. ЗАЩИТА ОТ ВЛАГИ, СВЕТА И ТЕПЛА ЯВЛЯЕТСЯ СУЩЕСТВЕННОЙ МЕРОЙ ПРОТИВ ИЗМЕНЕНИЯ РЕАКЦИОННОЙ СПОСОБНОСТИ РЕАГЕНТОВ. Разрушение реагентов вызывает обесцвечивание или потемнение реагентной области полоски. Если это происходит, или если результаты теста вызывают сомнение или противоречат ожидаемым результатам, следует проверить срок годности полосок и убедиться в том, что он ещё не прошел, а также протестировать полоски при помощи контрольных растворов. Утилизацию проб мочи и использованных реагентных полосок следует выполнять в соответствии с правилами, установленными законодательством РФ для биологических отходов.
Ограничение процедур
Как и для всех лабораторных процедур, точный диагноз и терапевтические рекомендации не должны основываться только на одном результате или методе.
Принципы реакций
Глюкоза: Фермент глюкозооксидаза катализирует окисление глюкозы атмосферным кислородом, что приводит к образованию глюкуроновой кислоты и перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода выделяет активный кислород. Этот кислород окисляет иодид калия, что приводит к изменению окраски.
Билирубин: Взаимодействие связанного билирубина и соли дихлорбензола диазония в сильнокислой среде приводит к образованию азокрасителя.
Кетоны: Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с ацетоуксусной кислотой с образованием фиолетовой окраски раствора.
Удельный вес: Электролит (М+Х−) в форме соли реагирует в моче с полиметилвиниловым эфиром и малеиновой кислотой (-СООН), которые являются слабокислыми ионообменниками. В реакции образуется водородный ион [H+], который реагирует с рН-индикатором и меняет его окраску.
Кровь: Тест основан на способности гемоглобина катализировать окисление окрашенного индикатора стабилизированным органическим гидропероксидом.
рН: Метод основан на использовании рН-индикаторов.
Белок: Тест основывается на принципе «белковой ошибки индикатора». Анион специфического рН-индикатора взаимодействует с катионом белковой молекулы, вызывая дальнейшую ионизацию индикатора и изменение окраски.
Уробилиноген: Уробилиноген при взаимодействии с диазонием в сильнокислой среде образует розовые азокрасители.
Нитриты: Нитриты мочи и ароматический аминосульфаниламид диазотируются с образованием диазосоединения, которое реагирует с тетрагидробензо(h)хинолин-3-фенолом, что приводит к изменению окраски.
Лейкоциты: Метод основан на ферментативной реакции, катализируемой лейкоцитарной эстеразой, которая катализирует гидролиз пирроламинокислого эфира с высвобождением 3-гидрокси-5-фенилпиррола. Пиррол реагирует с диазонием, образуя продукты пурпурного цвета.
Микроальбумин: Тест основывается на принципе «белковой ошибки» сульфонфталеинового красителя, который имеет высокую чувствительность к микроальбумину.
Замечания
Белок и микроальбумин: Тестовая область «белок и микроальбумин» более чувствительна к альбумину, чем к белкам Бенса-Джонса, иммуноглобулину и гемоглобину. Поэтому отрицательный результат теста не означает, что вышеназванные белки отсутствуют в моче. Обычно белок не обнаруживается в моче с помощью стандартных методов, хотя небольшое количество белка в норме выделяется почками. Результат считается положительным, когда цвет полоски темнее, чем метка на диаграммме. Ложноположительные результаты могут быть получены в сильно забуференных щелочных образцах мочи. Образцы мочи, загрязнённые соединениями четвертичного аммония и очистителями, содержащими хлоргексидин, также могут показать ложноположительные результаты.
Глюкоза: Тест предназначен для определения D-глюкозы и практически не реагирует на другие сахара. Аскорбиновая кислота в концентрации до 0,28 ммоль/л и/или ацетоуксусная кислота в концентрации до 1,1 ммоль/л не влияют на тест. Малое количество глюкозы, в норме выделяемое почками, обычно находится ниже уровня чувствительности реагентной области тест-полоски.
Билирубин: В норме билирубин в моче нельзя выявить даже очень чувствительными методами. Если тест дает положительный результат, то, как правило, это указывает на патологию и требует дальнейшей проверки. Ложноположительный результат может быть получен в пробах мочи больных, принимающих лекарственные препараты, которые окрашивают мочу в красный цвет (например, феназопиридина). Ложноотрицательный результат может вызвать высокая концентрация аскорбиновой кислоты (свыше 500 мг/л) или длительное хранение образца мочи на свету.
Кетоны: Реагентная область полоски реагирует с ацетоуксусной кислотой в моче. Реагент не взаимодействует с ацетоном или β-гидромасляной кислотой. Образцы нормальной мочи обычно дают отрицательные результаты при тестировании на кетоны. Ложноположительные результаты могут проявиться при анализе сильно пигментированной мочи, или мочи, содержащей большое количество метаболитов препарата «Леводопа».
Удельный вес: Реагентная полоска позволяет измерять удельный вес образцов мочи от 1,000 до 1,030. Средняя ошибка между результатами, полученными при тестировании полоской и при определении коэффициента преломления, составляет всего 0,005. Чтобы получить более точный результат, можно добавить 0,005 к значениям, полученным в образцах мочи с рН≥6,5. Прибор для анализа мочи может автоматически делать эти поправки при анализе полосок. Неионные компоненты в моче, такие как глюкоза или рентгеноконтрастные вещества, не влияют на результат теста. Занижение результатов теста может наблюдаться в щелочной или сильно забуференной моче. Завышенные результаты могут быть получены в присутствии умеренного количества белка (1,75 г/л).
Кровь: У пациентов может наблюдаться «следовая» реакция. В каждом индивидуальном случае требуется клиническое заключение. Появление зеленых пятен (целые эритроциты) или зеленого цвета (гемоглобин/миоглобин) на реагентной части полоски в течение 60 секунд указывает на необходимость дальнейшей диагностической проверки. Кровь часто обнаруживается в моче менструирующих женщин. Значение гемоглобина в интервале 150 - 620 мкг/л приблизительно соответствует количеству 5-15 клеток/мкл целых эритроцитов.
Реагентная полоска чрезвычайно чувствительна к гемоглобину и может быть использована в качестве дополнения к микроскопическому исследованию. Полоски в одинаковой степени чувствительны как к гемоглобину, так и к миоглобину. Пониженная реакция зоны на кровь может наблюдаться в моче с большим значением удельного веса. Завышение результатов или ложноположительные реакции наблюдаются при инфекциях мочевыводящих путей (микробная пероксидаза); в присутствии аскорбиновой кислоты в концентрации выше 5,0 ммоль/л и остатков сильных окисляющих средств, таких как гипохлорит, на стенках посуды.
рН: Область определения рН обычно находится в диапазоне 5,0-8,5 при визуальном и 5,0-9,0 при инструментальном тестировании.
Уробилиноген: Реагентные полоски могут обнаружить уробилиноген в моче в концентрациях до 3 мкмоль/л (приблизительно 0,2 единицы Эрлиха/дл). Концентрация 33 мкмоль/л является критическим значением (американский стандарт), отражая переход от нормального состояния к патологии, что требует дальнейшего исследования. Отрицательные же результаты не являются окончательными для заключения об отсутствии уробилиногена в моче.
Нитриты: Грамотрицательные бактерии в моче превращают нитраты, в норме выделяемыми почками, в нитриты. Реагентная полоска избирательно чувствительна к нитритам и не реагирует с другими веществами в моче. Розовые пятна или края на полоске не следует рассматривать как положительный результат, но развитие однородной розовой окраски любой степени интенсивности должно быть засчитано в качестве положительного результата. Степень развития окраски и число бактерий не находятся в прямой зависимости. Отрицательный результат не означает того, что бактерии отсутствуют. Ложноотрицательный результат может быть в следующих случаях: 1) если моча не содержит микроорганизмов, превращающих нитраты в нитриты; 2) если моча не задерживается в мочевом пузыре достаточно долго (более четырех часов), необходимых для превращения нитрата в нитрит; 3) если нитраты отсутствуют в продуктах питания. Высокий удельный вес мочи также может понизить чувствительность теста. Содержание аскорбиновой кислоты в моче в концентрации менее 2,8 ммоль/л не влияет на результат теста.
Лейкоциты: Тестовая область полоски реагирует с эстеразой гранулоцитов. Образцы нормальной мочи обычно дают отрицательный результат, а положительные результаты (один или более «+») имеют клиническое значение. Индивидуально наблюдаемые следовые результаты могут иметь неясное клиническое значение, однако повторяющиеся следовые результаты указывают на патологию. Положительные результаты у женщин могут быть случайными из-за загрязнения образца выделениями из влагалища. Повышенные концентрации глюкозы (160 ммоль/л) или высокий удельный вес могут быть причиной заниженных результатов теста.
Специфические особенности теста
Специфические особенности теста базируются на данных клинических и аналитических исследований. В клинических образцах чувствительность теста зависит от нескольких факторов: изменчивости цветовосприятия, наличия или отсутствия ингибиторных факторов, обычно обнаруживаемых в моче, удельного веса, рН и условий освещения при визуальном считывании результата. Каждый окрашенный блок или инструментальные данные представляют собой диапазон значений. Из-за особенностей образца и разного цветовосприятия, образцы с концентрацией анализируемого соединения, попадающие между номинальными уровнями, могут интерпретироваться как результаты более высокого или более низкого уровня. Результаты выше второго уровня в тестах на белок, глюкозу, кетоны и уробилиноген, как правило, совпадают с истинной концентрацией. Точного соответствия между визуальными и инструментальными результатами достичь невозможно из-за различий между восприятием человеческого глаза и оптической системой аналитических приборов.
Чувствительность и тестовый диапазон реагентных полосок DIRUI Н11-МА
Параметр
|
Чувствительность
|
Диапазон инструментального теста
|
Диапазон визуального теста
|
Глюкоза
|
До 2.8 – 5.5 ммоль/л
|
Отр.- 55
|
Белок
|
До 0.2 – 0.3 г/л
|
Отр. - 3.0
|
Отр. - 20.0
|
Кетоны
|
До 0.5 – 1.0 ммоль/л
|
Отр. - 7.8
|
Отр. - 16.0
|
Кровь
|
До 5 - 15 кл/мкл
|
Отр.- 200
|
Билирубин
|
До 8.6 - 17мкмоль/л
|
Отр.- 100
|
Нитриты
|
До 13 - 22мкмоль/л
|
Отр.- Полож.
|
Лейкоциты
|
До 5 - 15 кл/мкл
|
Отр.- 500
|
Уробилиноген
|
До 3.3 - 16мкмоль/л
|
3,3 - 131
|
рН
|
-
|
5,0 – 9,0
|
5,0 – 8,5
|
Удельный вес
|
-
|
1,005 – 1,030
|
1,000 – 1,030
|
Микроальбумин
|
До 0.1 – 0.15 г/л
|
Отр. - 0,15
|
Отр. – 0,15
|
Состав реагентных зон (расчет на момент производства)
Белок: 0,1% (вес/вес) тетрабромфеноловый синий; 97,4% (в/в) буфер; 2,5% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Кровь: 26,0% (в/в) диизопропилбензол дигидропероксид; 1,5% (в/в) тетраметилбензидин; 35,3% (в/в) буфер; 37,2% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Глюкоза: 1,7% (в/в) глюкозооксидаза (микробная, 123 Е); 0,2% (в/в) пероксидаза (из хрена, 203 МЕ.); 0,1% (в/в) иодид калия; 71,8% (в/в) буфер; 26,2% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Кетоны: 5,7% (в/в) нитропруссид натрия; 29,9% (в/в) нереагирующие ингридиенты; 64,4% (в/в) буфер.
Лейкоциты: 4,3% (в/в) пирроламинокислота; 0,4% (в/в) соль диазония; 92,6% (в/в) буфер; 2,7% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Нитриты: 1,3% (в/в) р-арсаниловая кислота; 0,9% (в/в) тетрагидрохинолин-N-(1-нафтол)-этилендиамин; 89,6% (в/в) буфер; 8,2% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Удельный вес: 4,8% (в/в) бромтимоловый синий; 90,2% (в/в) поли(метилвиниловый эфир комалеиновый ангидрид); 5,0% (в/в) гидроксид натрия.
рН: 3,3% (в/в) бромкрезоловый зеленый; 55,0% (в/в) бромтимоловый голубой; 41,7% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Билирубин: 0,6% (в/в) 2,4-дихлорбензамин диазония соль; 57,3% (в/в) буфер; 42,1% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Уробилиноген: 0,2% (в/в) соль прочного голубого В (Fast Blue B); 98,0% (в/в) буфер; 1,8% (в/в) нереагирующие ингридиенты.
Микроальбумин: 2,2% (в/в) сульфонфталеин; 96,0% (в/в) буфер; 1,8% (в/в) нереагирующие ингредиенты.
Общие вопросы по определению микроальбумина
1. Определение микроальбумина имеет значение для ранней диагностики некоторых заболеваний.
а) Практическое значение для пациентов с высоким давлением крови: скорость выделения микроальбумина у больных с гипертензией обычно выше, чем у здоровых людей. Повышение уровня микроальбумина является важным прогностическим параметром кардиоваскулярной болезни.
в) Микроальбумин может предсказать развитие диабетической нефропатии и помочь в её раннем обнаружении.
с) Анализ на микроальбумин является чувствительным индикатором для диабетического поражения капиллярных сосудов.
d) Исследование микроальбумина имеет значение для проверки успешности трансплантации почки и для дифференцировки заболеваний, вызванных воспалением почечных канальцев и поражением почечных клубочков. Экскреторный уровень микроальбумина имеет прямую связь со степенью проницаемости почечных клубочков и рассматривается в клинической практике как важный параметр их повреждения.
е) Тест также можно использовать для прогноза состояний эклампсии и преэклампсии при патологиях беременности.
2. Клиническое значение положительного результата на микроальбумин.
а) Если полоска показывает положительный результат на микроальбумин, то необходимо повторно тестировать образец мочи в течение нескольких дней. Если микроальбумин был обнаружен случайно, то это может быть связано с физиологической протеинурией, вызванной, например, диетой, физическими упражнениями или стрессом.
в) Если положительный результат на микроальбумин последовательно воспроизводится, или одновременно проявляются положительные результаты на кровь и микроальбумин, или положительные результаты на глюкозу и микроальбумин, то следует проверить результат методом иммунотурбидиметрии.
|
