1. назначение
|
Скачать 325.72 Kb.
|
7в. Пробоподготовка МагнитнаяМагнитная пробоподготовка рекомендуется при выделении чистой ДНК из различных биологических проб с высоким содержанием ДНК. 7.1.в Приготовление рабочего раствора Солевого буфера. 10 мл 10-кратного Солевого буфера перенести в мерный цилиндр, довести бидистиллированной водой до метки 100 мл и 96% этиловым спиртом до метки 300 мл и перемешать. Готовый рабочий раствор Солевого буфера следует хранить в герметично закрытой посуде при температуре 2-8 0С. 7.2.в В пробирку объемом 1,5 мл внести 100 мкл исследуемой жидкости, добавить 300 мкл Лизирующего реагента и 20 мкл суспензии сорбента Magnetic (перед использованием Magnetic следует интенсивно перемешать на вортексе до гомогенной суспензии). 7.3.в Пробирку поместить на ротатор или перемешивать вручную 5 мин. 7.4.в Добавить в пробирку 1,0 мл рабочего раствора Солевого буфера (см. пункт 7.1) и перемешать содержимое пробирки до гомогенного состояния. 7.5.в Установить пробирку в магнитный штатив на 15-20 с. Осторожно, не задевая осевший на стенку сорбент, удалить прозрач- ный супернатант с помощью насоса или пипетки. Если выделение ДНК проводится из цельной крови или гомогенатов тканей с высо- ким содержанием гемоглобина, осадок сорбента после разделения на магнитном штативе и удаления супернатанта следует промыть еще раз 200 мкл Лизирующего реагента. Далее по протоколу. 7.6.в Перенести пробирку в обычный штатив. 7.7.в Добавить в пробирку 1,0 мл рабочего раствора Солевого буфера и перемешать содержимое пробирки до гомогенного состояния. 7.8.в Установить пробирку в магнитный штатив на 15-20 с. 7.9.в Осторожно удалить прозрачную часть смеси. 7.10.в Повторить пункты 7.7.-7.9 7.11.в Посушить осадок при температуре 65 0С в течение 2-3 мин. 7.12.в В эту же пробирку внести не менее 100 мкл ЭкстраГена™. Внимание! ЭкстраГен™ следует отбирать от общего объема при постоянном перемешивании! 7.13.в Суспендировать содержимое пробирки на вортексе до получения гомогенной суспензии, после чего термостатировать 5 мин при 65 0С. 7.14.в Еще раз суспендировать содержимое пробирки на вортексе. 7.15.в Центрифугировать пробирку при 5000 об/мин. 1 мин. 7.16.в Перенести супернатант с ДНК в чистую пробирку 7.17.в Выделенную ДНК хранить при температуре минус 20 0С 8. ПОСТАНОВКА PCR.8.1. Достать нужное количество бесцветных пробирок МастерМикса для анализа проб, одну пробирку синего цвета (-) контроля для амплификации отрицательного контроля и одну пробирку красного цвета (+) контроля для амплификации положительного контроля. Промаркировать соответствующим образом отобранные пробирки.
8.3. Добавить в бесцветные пробирки МастерМикса по 10 мкл готовой для анализа ДНК проб (см. Пробоподготовку 7а.7 или 7б.16).
Внимание: 1. Для предотвращения контаминации следует строго соблюдать последовательность внесения образцов: сначала в анализируемые пробы, затем в (-) контроль и в конце в (+) контроль. Обязательно менять наконечник. 2. При работе с анализируемыми пробами рекомендуется использовать специальные наконечники с антиаэрзоль ными фильтрами.
Таблица 1
в зависимости от модели, используемого апмплификатора, рекомендуется оптимизировать температуру отжига в пределах 2 0С от базового 58 0С. 8.7. После окончания амплификации все пробирки перенести в комнату для проведения детекции ДНК. 9. ПРОВЕДЕНИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА9.1. Приготовление рабочего раствора буфера для электрофореза (ТВЕ). В мерную колбу (цилиндр) на 1000 мл внести содержимое флакона с бу- фером для электрофореза (ТВЕ), довести до метки дистиллированной во- дой и перемешать до полного растворения порошка. ТВЕ буфер использу- ется также и для приготовления агарозного геля. Готовый ТВЕ буфер может храниться при комнатной температуре в течение 2 месяцев. |
||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
Где отображены вопросы: Назначение цеха и выпускаемая продукция Назначение, устройство, кинематика и принцип действия гильотинных ножниц с нижним резом |
 |
Инструкция по установке и эксплуатации назначение Назначение. Электромеханический шлагбаум spin 3, 4, 6 предназначен для ограничения въезда и выезда с охраняемых территорий (автостоянки,... |
|
Тема Стрелковое оружие и ручные противотанковые гранатометы Занятие 1 Назначение и боевые свойства ак-74,рпк-74, общее устройство, принцип работы. Назначение частей и механизмов |
|
1. Назначение, устройство, принцип работы Назначение Коленчатый вал воспринимает усилия, передаваемые от поршней шатунами, и преобразует их в крутящий момент, который затем через маховик... |
|
1. 1 Служебное назначение и технические характеристики детали Для составления качественного технологического процесса изготовления детали необходимо тщательным образом изучить ее конструкцию... |
|
Паспорт Назначение Назначение: Ограничитель грузоподъемности с регистратором параметров кпб-3 (далее огпиР) предназначен для ограничения грузоподъемности... |
|
Назначение PowerShell 2 Установка Windows PowesShell 6 Назначение PowerShell 7 |
|
Коммерческое предложение Сверлильно-присадочный alfa 21 Classic (1... Назначение: Сверлильно-присадочные станки предназначены для сверления сквозных и глухих отверстий в торцах и плоскостях мебельных... |
|
Техническое задание №170 2017 на проектирование и поставку автоматизированной... Назначение оборудования: Перемещение комплектующих по территории цеха от склада до рабочего места. Осуществляется с помощью автоматизированного... |
|
Тематическое планирование учебной программы по технологии 10 класс Хозяйстве. Основные сборочные единицы колесного и гусеничного тракторов, их назначение, расположение и взаимодействие. Понятие о... |
|
7. Назначение каждого компонента 5 Информация индикаторов 5 Операция... Это руководство описывает правильное использование скутера, азы вождения. Для правильного и безопасного вождения, пожалуйста тщательно... |
|
7. Назначение каждого компонента 6 Приборная панель и индикаторы... Переключатель / Ближний и дальний свет / Переключатель поворотов / Звуковой сигнал открытого |
|
Пояснительная записка к тестовой работе по биологии в 10 классе для... Назначение работы: определить степень сформированности знаний, основных умений и навыков, оценить качество подготовки учащихся по... |
|
Добавление информации об оплате за жку в поле «Назначение платежа» Если получатель является поставщиком жку, введите информацию об оплате за жку в поле Назначение платежа с помощью специального окна... |
|
Инструкция по подаче заявления в электронном виде по услуге " Назначение... Назначение и выплата областного единовременного пособия при рождении ребенка через портал |
|
Методика определения нервно-психической устойчивости и риска дезадаптации... Назначение и содержание. Методика разработана в Санкт-Петербургской военно-медицинской академии и предназначена для выявления нервно-психической... |