Применение




Скачать 105.21 Kb.
НазваниеПрименение
ТипДокументы
rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы




Тест-система «Диагностика тромбофилий, APPT-ES реагент с хлоридом кальция
( APPT-ES реагент – реагент АПТВ/АЧТВ, содержащий в качестве активатора эллаговую кислоту)
ПРИМЕНЕНИЕ

АПТВ/АЧТВ -ES используется для выявления нарушений внутреннего пути свертывания крови, а именно дефицита Факторов VIII, IX, XI, XII, Прекалликреина (Фактор Флетчера) и высокомолекулярного кининогена. Также АЧТВ используется вместе с соответствующей фактор-дефицитной плазмой, для количественного определения дефицита этих факторов и для контроля гепаринотерапии.

Определение можно проводить вручную, а также на полуавтоматическом и автоматическом коагулометрах. Набор обладает чувствительностью к присутствию волчаночных антикоагулянтов (ВА), или Люпус антикоагулянтов (Л). АЧТВ состоит из двух жидких компонентов: а) сбалансированной смеси эллаговой кислоты и экстракта фосфолипидов из ткани мозга кролика и б) 0,025М раствора кальция хлорида.

Антифосфолипидные антитела и неспецифические ингибиторы (антикоагулянты волчаночного типа) вызывают удлинение АЧТВ. Однако при низкой концентрации (ВА) или (Л) выраженного изменения АЧТВ может не произойти. При изготовлении АЧТВ реагентов обычно используют один из трех активаторов: каолин, кремний или эллаговую кислоту. Эллаговая кислота заслужила наибольшую популярность за счет свой хорошей растворимости, что позволяет сохранять суспензию реактива в гомогенном состоянии (что особенно важно при работе на автоматическом анализаторе).

Скрининговый тест АЧТВ косвенно определяет характер формирования тромбина опосредованно через его активацию превращения фибриногена в фибриновый сгусток.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Реактивы, содержащиеся в наборе, предназначены только для in-vitro диагностики. При работе с ними следует надевать перчатки. Ознакомьтесь с инструкцией по мерам предосторожности.
Информация для заказа

Каталожный No.

Компоненты теста

R1

R2


5397H


5 x 5.0 мл (250-500 tests )

5 x 5.0 мл


СОСТАВ РЕАГЕНТОВ

R1: АПТВ-ES реагент . Жидкий реагент, содержит 0.1 mM сбалансированной смеси эллаговой кислоты и экстракта фосфолипидов из ткани мозга кролика. Также в состав входят буфер, стабилизаторы, консерванты (включая 0.2% фенол).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ. Реагент поставляется в готовом для использования виде.

Непосредственно перед использованием, переворачивайте (без встряхивания) флакон несколько раз, чтобы получить однородную суспензию.

R2: Раствор хлорида кальция 0.025M (ж)

Реагент поставляется в готовом для использования виде.

3.Другие компоненты набора.

Каждый набор содержит инструкцию по применению.
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ

1. АПТВ-ES реагент (ж).

Реагент стабилен до окончания срока годности при условии правильного хранения при температуре 2-60С. Устойчив в течение 30 дней после вскрытия при температуре хранения 2-80C. Не замораживать. Избегать попадания инородных частиц.

В норме реактив представляет из себя бледно зеленый гомогенный раствор. Допускается наличие зеленоватого осадка, который должен мгновенно исчезать при переворачивании (без встряхивания) флакона. Наличие изменений другого рода и/или «непопадание» значений нормальных контролей или плазмы в диапазон, установленный лабораторией, могут свидетельствовать о порче реагента.

2. Раствор хлорида кальция 0.025M (ж).

Реагент стабилен до окончания срока годности при условии правильного хранения при температуре хранения 2-60С. Помутнение раствора говорит о его загрязнении.
Необходимое, но не поставляемое оснащение

Коагулометр с оптическим и оптико-механическим методом детекции

Центрифуга

Также для количественного определения факторов внутреннего пути свертывания.

Кат. № 5185 Универсальный калибратор (10 х 1.0 мл).

Кат. № 5375/5488 Буфер Оуренса (10 х 25.0 мл).

Кат. № 5193/5793 Дефицитная плазма по VIII фактору (10 х 1.0)

Кат. № 5194/5794 Дефицитная плазма по IX фактору 10 х 1.0 мл)

Кат. № 5196/5796 Дефицитная плазма по XI фактору (10 х 1.0 мл)

Кат. № 5197/5797 Дефицитная плазма по XII фактору (10 х 1.0 мл)
ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Для работы следует использовать только пластиковые или силиконированные стеклянные пробирки. Кровь забирается в пробирку с цитратным антикоагулянтом (3,2% или 3,8% цитрат натрия) в соотношении 9 + 1. После центрифугирования, проводимом при 2000-3000 * g в течение 15 минут (использование других параметров должно проверяться лабораторией), полученную плазму необходимо отделить от форменных элементов крови. Плазму следует хранить при температуре 2-60С. Тестирование должно быть проведено в течение 2 часов после забора образцов, либо плазму можно однократно заморозить и хранить при температуре -200С в течение 2 недель или при -700С в течение 1 месяца. Перед проведением исследования плазму следует быстро разморозить при 370С. Не держать плазму при 370С более 5 минут. Это сможет минимизировать нейтрализацию волчаночных антикоагулянтов (в случае их наличия).

Ложные результаты могут быть получены из-за загрязнения пробы тканевыми жидкостями. Не трясти пробу, избегать пузырьков и пены. Необходимо учитывать влияние лекарственных препаратов, см.ссылку Young, et al6. При разрушении тромбоцитов выделяются вещества, которые могут ингибировать волчаночные антикоагулянты.
ПРОЦЕДУРА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА

Все пипетки, пробирки, шприцы должны быть пластиковыми.

A. Ручной метод

Соберите кровь для анализа в соответствии с этой инструкцией.

  1. Приготовьте контрольные плазмы в соответствии с вложенными инструкциями.

  2. Перемешайте и прогрейте АПТВ реагент и раствор хлорида кальция 0.025M до 370С.

  3. Поместите 100 мкл плазмы пациента (контроля) в реакционную пробирку.

  4. Осторожно переверните флакон с АПТВ реагентом, чтобы ресуспендировать возможный осадок.

  5. Добавьте в реакционную пробирку 100 мкл АПТВ реагента, в котором уже содержится плазма пациента или контрольная плазма.

  6. Инкубируйте смесь при 370С 3 минуты.

  7. Добавьте 100 мкл прогретого раствора хлорида кальция 0.025M и засекайте время.

  8. Если Вы делаете тест вручную - то аккуратно трясите кювету (вперед-назад) в водяной бане. Остановите таймер при образовании сгустка.

  9. Делайте все тесты в дубле. Если коэффициент вариации превышает установленную Вами норму (обычно менее 5%) - то переделайте тест.


Б. При выполнение теста на автоматическом анализаторе гемостаза – смотрите инструкцию по его эксплуатации.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ


Результаты теста должны быть предоставлены с точностью до 1/10 секунды. При этом лаборатория должна установить референсные значения для теста (обычно это: Xср ± 2SD, где Xср - среднее арифметическое , а SD - среднеквадратичное отклонение). Результаты, превышающие верхний предел нормы должны быть восприняты как патология , причины которой необходимо изучать (тестировать) дальше. Результаты, значения которых меньше нижнего предела нормы нужно перепроверить, заново отобрав кровь у больного.

Низкие значения АЧТВ могут быть связаны с тромбозом in vivo (глубокий тромбоз вен, ДВС-синдром ).

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА


Каждая лаборатория должна установить программу контроля качества. Перед измерением каждой партии образцов пациентов необходимо протестировать нормальную и патологическую плазму, чтобы удостовериться в удовлетворительной работе оборудования и оператора. Если контрольные измерения не совпадают с ожидаемыми значениями, то измеренные данные пациентов следует считать недостоверными.

Компания Biosciences Europe предлагает следующие контрольные материалы:

Кат. № 5186 Контрольная плазма (норма) (10 x 1.0 мл)

Кат. № 5187 Контрольная плазма (умеренно выраженная патология) (10 x 1.0 мл)

Кат. № 5183 Контрольная плазма (высокая патология) (10 x 1.0 )

Кат. номер 5301 Контрольная плазма для специальных тестов Н (норма) (10 x 1.0 мл)

РЕФЕРЕНСНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ


Компания Хелена измерила 28 замороженных плазм от здоровых взрослых людей этим реагентом. Сбор крови проводился в вакутейнеры (3.8%натрия цитрата), измерения проводились на приборе Cascade 480.

Xср ± 2SD =21.9-31.7 секунд Xср = 26.8 секунд.

Референсные значения могут варьировать между лабораториями в зависимости от используемых методов и анализаторов. В связи с этим каждая лаборатория должна определить свою собственную область нормальных значений.
МОНИТОРИНГ ГЕПАРИНОТЕРАПИИ

При мониторинге гепаринотерапии важно построение in vitro калибровочной кривой, отражающей усредненный «гепариновый» ответ, поскольку у различных индивидуумов может быть различная восприимчивость к гепарину. В общем, терапевтическая доза гепарина может находиться в области 0.2 - 0.5 единиц/мл.

При мониторинге гепаринотерапии следует помнить:

1. Время сбора крови очень важно, так как период полураспада (период полуэлиминации) гепарина в человеке=1.5 часа.

2.При агрегации тромбоцитов, а также при их разрушении выделяется 4-тромбоцитарный фактор, который нейтрализует гепарин. Чтобы избежать этого, следует правильно забирать кровь, тщательно центрифугировать и быстро отделять бедную тромбоцитами плазму от клеточной массы.

3.Для определения базовых значений АЧТВ теста следует его провести пациенту до начала гепаринотерапии. Причем в той лаборатории, в которой и будет осуществляться мониторинг.

4.Различные автоматические системы детекции образования сгустка в плазме (механическая , оптическая и т.д.) могут по разному тестировать гепаринизированную пробу пациента. Поэтому мониторинг должен проводится на одном приборе.

5. Калибровочные кривые, отражающие усредненный «гепариновый» ответ должны переделываться (переопределяться) при изменении номера серии реагента, а также через определенные интервалы при одной и той же серии. Также нужно использовать один и тот же гепарин (он может быть получен из слизистых оболочек свиньи или из бычьих легких).

Каждая лаборатория должна самостоятельно определять чувствительность реагента к тому гепарину, который используется при лечении.
ОГРАНИЧЕНИЯ

Результаты АЧТВ теста, проведенного для одного и того же пациента в разных лабораториях могут значительно отличаться.

Метод детекции, температура, рН, способ сбора крови, тип антикоагулянта, время и метод хранения проб - все это очень важные факторы при проведении теста. Методика сбора крови и ее хранения должны быть стандартизированы и должны контролироваться. Неожиданные результаты, должны быть проверены другими методиками. Присутствие в пробе пациентов фрагментов тромбоцитов может вызвать высвобождение фосфолипидов ,которые могут нейтрализовать ВА(в случае их наличия в пробе). Следовательно, избегайте такого присутствия правильным приготовлением проб. Использование малых объемов проб не рекомендуется, так как рН в таких пробах менее стабилен. На АЧТВ тест влияют различные лекарства. Его удлинение наблюдается при приеме дифенина (дифенилгидантоин), гепарина, варфарина и препаратов, применяемых в рентгенографии. Уменьшение АЧТВ наблюдается при приеме пероральных контрацептивов (особенно эстрогенов). Таким образом, лаборатория должна сама устанавливать референсные значения для пациентов и стандартизировать условия проведения тестирования.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Компания Хелена приводит здесь характеристики только для ознакомления. Лаборатория должна сама устанавливать референсные значения.

ПРОВЕРКА ТОЧНОСТИ.
Определение контролей в одной аналитической серии. Использовались трехуровневые контрольные материалы, использовался прибор Cascade 480.


Контроль

Значение в сек.

Среднеквад. откл.

Коэф. Вариации

Кол-во проб

Контрольная плазма (норма) Norm-Trol 1

29.7

0.24

0.8%

20

Контрольная плазма (умеренно выраженная патология) Ab-Trol 2

52.4

0.64

1.2%

20

Контрольная плазма (высокая патология) Ab-Trol 3

77.4

1.01

1.3%

20



Определение контролей в разных аналитических сериях. Способ определения тот же, использовались двухуровневые контроли, каждое измерение повторяли три раза.


Контроль

Значение

Среднеквад.откл.

Коэфф. вариации

Кол-во проб

Контрольная плазма (норма) Norm-Trol 1

30.1

0.44

1.5%

60

Контрольная плазма (умеренно выраженная патология) Ab-Trol 2

52.5

1.91

3.6%

60


Сравнение с АЧТВ от другого производителя.

Компания Хелена сравнила свой АЧТВ набор с АЧТВ набором от другой фирмы. При этом использовались пробы от здоровых людей и от людей с различными заболеваниями (такими как: ВА, недостаток факторов, их комбинации и гепаринотерапия.). Всего было 103 пробы, измеренные в дубле.

График имел следующие характеристики:

Y=1.085Х-4.77 , где Y=APTT-ES, X=набор от другой фирмы, принятый за референс.

Corr. Coeff.(r)=0.975
Линейность при калибровке наборов для определения дефицита факторов свертывания.
Калибровали по 4 точкам на приборе Cascade 480.

Полулогарифмический корреляционный коэффициент (r) при калибровке факторов VIII, IX, XI, и XII был равен 0.990 и выше.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Basu, D. et al., A Prospective Study of the Value of Monitoring Heparin Treatment With the

Activated Partial Thromboplastin Time, N Eng J Med 287: 324-327, 1972.

2. Brandt, J.T. and Triplett, D.A., Laboratory Monitoring of Heparin. Effect of Reagents and

Instruments on the Activated Partial Thromboplastin Time, AJCP 76: 530-537, 1981.

3. Proctor, R.R. and Rapaport, S.I., The Partial Thromboplastin Time Test with Kaolin, AJCP 36: 212-

219, 1961.

4. Langdell, R.D. et al., Effect of Antihemophilic Factor on One-Stage Clotting Tests, J Lab Clin Med

41: 637-647, 1953.

5. Triplett, D.A., ED., Standardization of Coagulation Assays: An Overview, College of Am Path,

Skokie, Ill, pg 4, 1982.

6. Young, D.S. et al., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3rd ed., AACC Press, Washington,

D.C., 1990.

7. Kelton, J.G. and Hirsh, J., Bleeding Associated with Antithrombotic Therapy, Semin Hematol 17:

259-291, 1980.

8. Estes, J. and Poulin, P., Pharmacokinetics of Heparin, Thromb Diath Haemorr 33: 26-35, 1974.

9. Solomon, G., Hilgartner, M., Kutt, H., Neurology 22:1165, 1972.

10. Adams, R., Harrison, J., Scott, P., Quarterly J. of Med. 38:425, 1969.

11. Ambrus, J., Schimert, G., Lajos, T., Ambrus, C., Mink, I., Lassman, H., Moore, R., Melzer, J.J., Med.

2:65, 1971.

12. Crowell, E., Clatanoff, D., Kiekhofer, W.J., Lab. Clin. Med. 77:551, 1971.

13. NCCLS, Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and

Performance of Coagulation Assays, 2nd ed. H21-A2, 1991.

14. NCCLS, How to Define, Determine, and Utilize Reference Intervals in the Clinical Laboratory Proposed Guideline - C28P, 1992.

Похожие:

Применение iconПрименение методов активного обучения в образовательном процессе вуза
В данной статье рассматривается применение активных методов обучения, опыт использования которого дает возможность решать ряд труднодостижимых...

Применение iconМинтранс россии приказ
Оон, на применение отгрузочного наименования и классификационного кода опасных веществ и изделий, а также на применение тары при...

Применение iconГну краснодарский ниви россельхозакадемии научно-производственное...
...

Применение iconПрименение акустико-эмиссионного метода для выявления дефектов сварного шва в процессе сварки
При этом реализуется возможность определения с высокой точностью координат дефектов и их оперативного исправления в процессе сварки...

Применение iconВ случае эксплуатации омывателя в холодный сезон года, когда температура...
С, обязательно применение специальных жидкостей типа «арктика». При температурах ниже точки замерзания используемой жидкости во избежание...

Применение iconРазработка и применение лекарственных средств на основе ароксиалканкарбоновой...
Разработка и применение лекарственных средств на основе ароксиалканкарбоновой кислоты

Применение iconКлинические рекомендации применение диетического и функционального...
Применение диетического и функционального питания в лечебно-профилактических и реабилитационных программах

Применение iconПрограмма производственной практики профессионального модуля «применение...
Программа производственной практики профессионального модуля «Применение микропроцессорных систем, установка и настройка периферийного...

Применение iconРабочая программа профессионального модуля 08 Применение новых технологий...
Рабочая программа профессионального модуля 08 Применение новых технологий в лечебном деле разработана как вариативная часть Федерального...

Применение iconИсследовательская работа Тема: “Применение периферических катетеров...
Тема: “Применение периферических катетеров и помп в лечебных учреждения г. Волжский Волгоградская область.”

Применение iconПрименение и технические данные машины

Применение iconПлан-конспект для проведения занятия с личным составом нештатных...
Тема «Применение приборов радиационной и химической разведки, контроля радиоактивного заражения и облучения, а также средств индивидуальной...

Применение iconОоо «технос-м+» Применение автоматических установок пожаротушения...
Применение автоматических установок пожаротушения тонкораспыленной водой для защиты кабельных сооружений

Применение iconЛабораторная работа 2 12 лабораторная работа 3 17 лабораторная работа...
«Проектирование систем реального времени» для студентов специальности 09. 05. 01 «Применение и эксплуатация автоматизированных систем...

Применение iconПрименение информационных технологий в судопроизводстве: электронное правосудие
«Применение информационных технологий в судопроизводстве: электронное правосудие» 4

Применение iconСогласовано
Условия, обеспечивающие применение средств автоматизации в соответствии с назначением 6


Руководство, инструкция по применению






При копировании материала укажите ссылку © 2018
контакты
rykovodstvo.ru
Поиск